中药四性的生物热动力学研究——黄连的不同炮制品药性的微量热学比较

王爱青

(河南省洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023)

中药四性的生物热动力学研究
——黄连的不同炮制品药性的微量热学比较

王爱青

(河南省洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023)

黄连；生物热动力学；炮制品；四性；药性

黄连为临床常用中药，主要功效为泻火解毒、清热燥湿，泡制方法不同，在药性上也存在差别[1]。本研究通过分析黄连不同炮制品对大肠杆菌代谢产热的影响，对黄连炮制前后药性变化及黄连药性的客观真实性展开探讨，现回顾结果如下。

一般资料

大肠杆菌生长热谱图采用瑞典Thermometric公司生产的仪器测定，在实验过程中控制系统温度为37℃。大肠杆菌菌株由中国典型培养物保藏中心提供，采用LB培养基。盐酸小檗碱购自中国药品生物制品检定所，黄连由解放军302医院中药房提供。试剂均为分析纯，药品均用无菌水配制。

研究方法

1.不同炮制品的制备。①酒制黄连：取500 g净黄连，加入62.5 g黄酒，行焖透处理，于锅内妥善放置，文火炒干，放凉备用。②吴茱萸黄连：取50 g吴茱萸，加入适量水煎煮，取500 g净黄连与煎液充分拌匀，炒干，放凉备用。③胆汁黄连：取500 g净黄连，加入30 mL鲜猪胆汁充分拌匀，炒干，放凉备用。④醋制黄连：取500 g净黄连，加入93.75 g醋充分拌匀，待完全渗入后，晒干，放锅内，轻微翻炒，晾干备用。

2.制备供试品溶液。①实验色谱条件：流动相为乙腈-水，色谱柱为μ-Bondapak C18柱，柱温为室温，体积流量为1 mL/min，检测波长为345 nm，理论塔板数需>5 000。②制备不同炮制品的总生物碱：采用90%乙醇10倍量回流3次，每次所用时间为2 h，然后挥发乙醇，静置，离心，得滤液和沉淀。用浓HCl调滤液pH值为1～2，静置过夜。过滤，水洗至中性，获取沉淀物。合并沉淀物，真空干燥，即获得不同黄连炮制品的总生物碱。采用高效液相色谱法测定不同炮制品总生物碱，以盐酸小檗碱计。结果显示，生物碱质量分数均>50%。③制备总生物碱溶液：用无菌水配置混悬液，盐酸小檗碱对照品溶液浓度为25 mg/mL，酒制黄连、生黄连、吴茱萸黄连、姜制黄连、胆汁黄连、醋制黄连总生物碱溶液浓度与生药250 mg/mL相当。

3.绘制生长热谱曲线。应用安瓿法，取5 mL培养基精确加入每个安瓿瓶，接种大肠杆菌，以1×106/mL为菌接种量，加入定量药液，加盖瓶塞，密封。上述操作均在无菌条件下进行，放入微量热仪，跟踪记录细菌在37°C时的生长热谱曲线(p-t曲线)。

结果

1.确定大肠杆菌生长速率常数。在不同药物作用下，大肠杆菌的生长速率常数κ，最大发热功率Pmax，指数生长期的热焓△H和传代时间tG。见表1。

2.确定细菌生长抑制率浓度和半抑制率浓度。定义细菌生长抑制率I=(κ1-κ2)/κ1×100%。其中κ1为对照组常数，试药组常数为κ2。见表1。

表1 不同黄连炮制品作用下大肠杆菌热力学参数

讨论

本研究以黄连及其不同炮制品为实验材料，应用微量热仪测定大肠杆菌在37°C正常生长条件下的生长热谱图及给药后生长热谱图，并对其生长热谱曲线展开分析，发现酒制黄连、盐酸小檗碱、吴茱萸黄连、生黄连、胆汁黄连、醋制黄连、姜制黄连均对大肠杆菌有不等程度的抑制作用[2]。酒制黄连、吴茱萸黄连、姜制黄连的抑制作用相对较强，大肠杆菌生长速率常数有较大的降低幅度，产热量较大，传代时间延长多；胆汁黄连、盐酸小檗碱、醋制黄连、生黄连对大肠杆菌的抑制作用稍弱，生长速率常数下降幅度较小，产热量较少，传代时间延长少[3]。

黄连性寒凉，炮制方法不同，药性也会发生改变，即从制——寒者益寒、反制——以热制寒。酒制黄连、吴茱萸黄连、姜制黄连药性偏温，而胆汁黄连、醋制黄连药性偏寒，采用微量热法测定的结果与相关文献一致。黄连是临床上典型的清热消炎类抗菌药，根据不同炮制品对大肠杆菌生长抑制率的差异，可作为一种有效评价不同黄连炮制品的方法，即酒制黄连、姜制黄连、吴茱萸黄连较生黄连、醋制黄连抗菌活性更强[4]。

综上所述，微量热法可作为一种有效的区分中药药性的手段，在指导临床应用方面价值显著。

[1]刘腾飞，陈四玉，刘翠艳.黄连不同的炮制方法和制剂工艺体外抑菌作用的比较研究[J].中国中医药科技，2015,22(1):46-48.

[2]张淑贤.不同用量的吴茱萸炮制过的黄连的成分变化[J].中国中医药现代远程教育，2013,11(16):163.

[3]王凌，王少明，庄捷，等.不同炮制方法对黄连主成分含量及肠吸收的影响[J].中国临床药理学与治疗学，2011,16(2):165-169.

[4]谭光羡，石锦明，刘红志.黄连不同炮制方法对临床应用疗效的分析[J].中医临床研究，2011，3(13):50-51.

2017-02-14)