胃癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达观察

吕庆福，周好，过兆基，曹苇，支巧明

(苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006)

胃癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达观察

吕庆福，周好，过兆基，曹苇，支巧明

(苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006)

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)-AK054978、lncRNA-FER1L4在胃癌组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法胃癌患者96例，手术治疗时留取癌组织及癌旁组织，采用qRT-PCR法对癌组织及癌旁组织中的lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4进行检测。分析癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达水平与胃癌患者临床病理参数的关系，采用Kaplan-Meier生存曲线法分析癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达与胃癌患者预后的关系。结果胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-AK054978的相对表达量分别为7.32±2.12、1.04±0.12，两者相比，Plt;0.05；胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-FER1L4的相对表达量分别为0.21±0.15、1.09±0.22，两者相比，Plt;0.05。胃癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的相对表达量与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、TNM分期有关(P均lt;0.05)。癌组织中lncRNA-AK054978高表达的胃癌患者5年生存率为70.83%、生存时间为(51.94±2.29)个月，癌组织中lncRNA-AK054978低表达的胃癌患者5年生存率为83.33%、生存时间为(55.06±1.81)个月，两者相比，P均lt;0.05；癌组织中lncRNA-FER1L4低表达胃癌患者的5年生存率为72.92%、生存时间为(52.23±2.24)个月，癌组织中lncRNA-FER1L4高表达胃癌患者的5年生存率为87.50%、生存时间为(56.38±1.64)个月，两者相比，P均lt;0.01。结论胃癌组织中lncRNA-AK054978高表达，lncRNA-FER1L4低表达；lncRNA-AK054978高表达和lncRNA-FER1L4低表达促进胃癌的恶性进展；lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4可作为胃癌预后预测指标和治疗的潜在靶点。

长链非编码RNA；长链非编码RNA-AK054978；长链非编码RNA-FER1L4；胃癌

胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，是由基因和环境因素，如幽门螺杆菌感染[1]、饮食习惯[2]、吸烟和饮酒[3]等，共同作用诱发的高度异质性和复杂的疾病。2011年全球大约有90万胃癌新发病例和70万胃癌死亡病例[4]。近几十年来，胃癌的发病率有下降的趋势，然而在包括中国在内的亚洲东部地区，其发病率仍然处于较高水平[5]。此外，随着胃癌临床综合治疗方案的巨大进步，胃癌患者的病死率显著降低，但晚期胃癌患者预后仍然较差，5年生存率仅20%左右[6]。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 bp的非编码转录本。近年来的研究证实，在肿瘤形成过程中，lncRNA发挥促癌基因[7]或者抑癌基因[8]的功能。LncRNA在多种肿瘤细胞中存在异常表达，如结肠癌[9]和食管癌[10]等。Fan等[11]研究发现lncRNA-AK001094、lncRNA-AK024171、lncRNA-AK093735、lncRNA-BC003519和lncRNA-NR_003573与胃癌的发生和恶性进展密切相关；Yue等[12]的研究结果表明，lncRNA-FER1L4具有抑制结肠癌形成和预测患者预后的作用。本研究对胃癌组织及癌旁组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达情况进行了观察，分析了其表达水平与患者临床病理参数、血清肿瘤标志物水平及患者预后的关系。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年1月～2012年6月苏州大学附属第一医院收治的接受手术治疗的胃癌患者96例，男54例，女42例；年龄lt;60岁49例、≥60岁47例。纳入标准：患者具有完整的病例资料，签署知情同意书，术后病理诊断为胃癌。排除标准：合并其他恶性肿瘤、全身感染性疾病、肝肾疾病的患者。96例患者术前留取静脉血，电化学发光法检测血清肿瘤标志物[糖链抗原72-4(CA72-4)gt;4 U/mL 者65例、≤4 U/mL 者31例，癌胚抗原(CEA)gt;5 μg/L者69例、≤5 μg/L者27例，糖链抗原19-9(CA19-9)gt;37 U/mL者75例、≤37 U/mL者21例]。96例患者术中留取癌组织及癌旁组织。96例患者的肿瘤直径gt;5 cm 者68例、≤5 cm 者28例；肿瘤低分化62例、中高分化34例；肿瘤浸润至黏膜下层58例、浆膜层38例；有淋巴结转移83例、无淋巴结转移13例；有远处转移64例、无远处转移32例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期34例、Ⅲ+Ⅳ期62例。本研究经医院伦理委员会审核同意。

1.2 癌组织及癌旁组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的检测 采用 qRT-PCR法。TRIzol(美国Invitrogen公司)提取胃癌组织及癌旁组织中总RNA，按照RNA提取试剂盒(美国Invitrogen公司)的说明书操作。紫外分光光度计(美国Thermo公司)检测总RNA浓度及纯度，逆转录试剂盒(大连宝生物工程有限公司)进行逆转录，cDNA产物置于-20 ℃保存备用。qRT-PCR引物序列(南京金斯瑞生物科技公司)如下:lncRNA-AK054978正向引物(5′-3′)为AAGCCACCCCACTTCTCTCTAA，反向引物(5′-3′)为AATGCTATCACCTCCCCTGTGT；lncRNA-FER1L4正向引物(5′-3′)为CCGTGTTGAGGTGCTGTTC，反向引物(5′-3′)为GGCAAGTCCACTGTCAGATG；18S rRNA(内参)正向引物(5′-3′)为AGGACATGCATGGACACAGA，反向引物(5′-3′)为GGACGGAATCAACTCTGACA。定量PCR扩增仪(ABI7500，美国ABI公司)检测lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4R。qRT-PCR扩增体系为10 μL；反应条件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，进行35个循环。用2-ΔΔCt表示lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的相对表达量。

1.3 随访 采用电话或者门诊的方式进行随访。随访时间为患者确诊胃癌后1～60个月，直至患者死亡或随访时间截止。

2 结果

2.1 胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-AK054978和lncRNA-FER1L4的表达量比较 胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-AK054978的相对表达量分别为7.32±2.12、1.04±0.12，两者相比，Plt;0.05；胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-FER1L4的相对表达量分别为0.21±0.15、1.09±0.22，两者相比，Plt;0.05。

2.2 癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达量与胃癌患者临床病理参数及术前血清肿瘤标志物水平的关系 癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达量与胃癌患者肿瘤大小、分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、TNM分期有关(P均lt;0.05)，与患者年龄、性别无关(P均gt;0.05)，见表1。癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达量与胃癌患者术前血清CA72-4水平有关(Plt;0.01)，而与血清CEA、CA19-9水平无关(P均gt;0.05)，见表2。

表1 癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达量与胃癌患者临床病理参数的关系

表2 癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达量与胃癌患者术前血清肿瘤标志物水平的关系

2.3 癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4的表达量与胃癌患者预后的关系 以中位数为界限，将胃癌患者分为lncRNA-AK054978低表达组(48例)与lncRNA-AK054978高表达组(48例)，lncRNA-FER1L4低表达组(48例)与lncRNA-FER1L4高表达组(48例)。lncRNA-AK054978高表达组5年总生存率为70.83%(34/48)、生存时间为7～60(51.94±2.29)个月，lncRNA-AK054978低表达组5年总生存率为83.33%(40/48)、生存时间为12～60(55.06±1.81)个月，两者相比，P均lt;0.05。lncRNA-FER1L4高表达组5年总生存率为87.50%(42/48)、生存时间为7～60(56.38±1.64)个月，lncRNA-FER1L4低表达组5年总生存率为72.92%(35/48)、生存时间为12～60(52.23±2.24)个月，两者相比，P均lt;0.01。

3 讨论

人类基因组中能够编码蛋白质的基因只占整个人类基因组的2%，非编码RNA占98%[13]。lncRNA是指长度超过200 bp的一类非编码RNA，其在细胞分化、个体发育等多种生命活动过程中扮演重要角色[14]。lncRNA是基因表达的重要调节因子，可在转录及转录后水平调节基因表达。lncRNA表达异常与人类多种肿瘤密切相关[15]，如前列腺癌、膀胱癌、肾脏癌等，其可通过丰富的机制参与调控肿瘤的形成、增殖和侵袭转移等[16, 17]。

本研究结果显示，在胃癌组织中，lncRNA-AK054978表达量显著增加，而lncRNA-FER1L4表达量则显著降低，提示在胃癌肿瘤形成过程中，lncRNA-AK054978可能发挥癌基因的功能，而lncRNA-FER1L4则发挥抑癌基因的功能。生物信息预测结果提示，lncRNA-AK054978的靶基因可能是RPl-177G6.2[12]，RPl-177G6.2在肝癌细胞中的低表达促进了肝癌的形成[18]。lncRNA-FER1L4在多种肿瘤中发挥抑癌基因功能，如在肝细胞癌细胞中敲除lncRNA-FER1L4后，促进了细胞增殖、侵袭能力[19]，lncRNA-FER1L4通过调节PTEN基因表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖[20]，Liu等[21]研究证实lncRNA-FER1L4在胃癌组织中呈低表达，与本研究结果一致，lncRNA-FER1L4的低表达状态可能与胃癌形成有关。

本研究结果显示，胃癌肿瘤越大、分化程度越低、浸润程度越深、有淋巴转移、有远处转移、TNM分期越高，癌组织lncRNA-AK054978的表达就越高，lncRNA-FER1L4的表达则越低。以上结果表明，lncRNA-AK054978高表达与lncRNA-FER1L4低表达促进了胃癌的恶性进展过程，临床上可通过观察胃癌患者癌组织中lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4表达水平来推测患者的肿瘤进展程度。

CA72-4、CEA和CA19-9是临床上常用的与胃癌相关的血清肿瘤标志物，有研究[22]表明，CA72-4、CEA和CA19-9与胃癌淋巴转移相关，并且是胃癌分期的良好预测分子，能在一定程度上反映肿瘤进展情况[23]。本研究结果显示lncRNA-AK054978高表达和lncRNA-FER1L4低表达均与其术前血清CA72-4高水平相关，提示lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4可能与胃癌的肿瘤进程有关。

本研究结果显示，癌组织lncRNA-AK054978高表达的胃癌患者5年总生存率、平均生存时间均低于lncRNA-AK054978低表达患者，同时lncRNA-FER1L4低表达患者的5年总生存率、平均生存时间均低于lncRNA FER1L4高表达患者。以上结果提示癌组织lncRNA-AK054978高表达与lncRNA-FER1L4低表达均可预示胃癌患者的不良预后。

总之，本研究结果表明，lncRNA-AK054978在胃癌中可能发挥着癌基因的功能，而lncRNA FER1L4可能发挥着抑癌基因的功能，lncRNA-AK054978高表达与lncRNA-FER1L4低表达促进了胃癌的肿瘤形成和恶性进展过程，且均与患者的不良预后密切相关。lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4可作为胃癌预后预测指标和治疗的潜在靶点。但lncRNA-AK054978、lncRNA-FER1L4是通过何种途径参与胃癌的发生和恶性进展过程，则有待于进一步的探索研究。再者，由于本研究的实验样本数有限，为了得到更可靠的结论，仍然需要扩大样本量进行验证。

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ExpressionoflncRNA-AK054978andlncRNA-FER1L4inpatientswithgastriccancer

LYUQingfu,ZHOUHao,GUOZhaoji,CAOWei,ZHIQiaoming

(TheFirstAffiliatedHospitalofSoochowUniversity,Suzhou215006,China)

ObjectiveTo detect the expression levels of long non-coding RNA-AK054978 (lncRNA-AK054978) and lncRNA-FER1L4 in the tissues of gastric cancer and to explore its clinical significance.MethodsNinety-six cases of gastric cancer tissues and the adjacent tissues were obtained. The lncRNA-AK054978 and lncRNA-FER1L4 expression levels in the cancer tissues and the adjacent tissues were detected by the real-time quantitative PCR (qRT-PCR). The correlations of lncRNA-AK054978/lncRNA-FER1L4 expression with the clinical characteristics were analyzed. The Kaplan-Meier method was used to detect the relationship between lncRNA-AK054978/lncRNA-FER1L4 expression and gastric cancer patients' survival.ResultsThe relative expression levels of lncRNA-AK054978 in the gastric cancer tissues and the adjacent tissues were 7.32±2.12 and 1.04±0.12, respectively (Plt;0.05). The relative expression levels of lncRNA-FER1L4 in the gastric cancer tissues and the adjacent tissues were 0.21±0.15 and 1.09±0.22, respectively (Plt;0.05). In the gastric cancer tissues, the lncRNA-AK054978/lncRNA-FER1L4 relative expression levels were correlated with the tumor diameter, differentiation grade, depth of invasion, lymph node metastasis status, distant metastasis status and TNM staging (allPlt;0.05). The Log Rank results showed that the 5-year overall survival rate and the mean survival time in the high-lncRNA-AK054978 group were 70.83% and (51.94±2.29) months, which were much lower than 83.33% and (55.06±1.81) months in the low-lncRNA-AK054978 group (bothPlt;0.05); the 5-year overall survival rate and the mean survival time in the low-lncRNA-FER1L4 group were 72.92% and (52.23±2.24) months, which were much lower than 87.50% and (56.38±1.64) in the high-lncRNA-FER1L4 group (Plt;0.01).ConclusionsIn the gastric cancer tissues, the lncRNA-AK054978 is highly expressed and the lncRNA-FER1L4 is lowly expressed. The high expression of lncRNA-AK054978 and the low expression of lncRNA-FER1L4 promote the development of gastric cancer. LncRNA-AK054978, FER1L4 may serve as biomarkers for the prognosis and the therapy of gastric cancer.

long non-coding RNA; long non-coding RNA-AK054978; long non-coding RNA-FER1L4; gastric carcinoma

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.43.007

R735.2

A

1002-266X(2017)43-0021-04

江苏省卫生和计划生育委员会医学科研计划项目(H201569)。

吕庆福(1981-)，男，硕士，主治医师，主要研究方向为消化道肿瘤。E-mail: suizhou20170808@163.com

支巧明(1982-)，男，硕士，副主任医师，主要研究方向为消化道肿瘤。E-mail: strexboy@163.com

2017-08-07)