液相色谱-串联质谱法检测婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚

张敏娟，安 瑜，唐 欣，王慧芳，李 晓

（陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

液相色谱-串联质谱法检测婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚

张敏娟，安 瑜，唐 欣，王慧芳，李 晓

（陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

建立了婴幼儿配方奶粉中双酚A和壬基酚的液相色谱-串联质谱法的测定方法。样品经溶剂提取净化后，采用Poroshell 120SB-C18型液相色谱柱分离，以0.1%氨水和甲醇为流动相，进行梯度洗脱，采用多反应监测模式，外标法定量。结果表明，双酚A的方法检出限为0.05 μg/kg，壬基酚的方法检出限为0.1 μg/kg。线性范围内低、中、高3个添加水平双酚A的回收率为76.80%～86.75%，壬基酚的回收率为77.00%～87.34%。该方法具有灵敏度高、定性定量准确等特点，适用于婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚的检测。

双酚A；壬基酚；液相色谱串联质谱；婴幼儿配方食品；检测

双酚A和壬基酚是重要的化工原料，是环境中广泛分布的污染物。目前发现双酚A和壬基酚普遍存在于各类食品中[1]，可通过各种途径污染食品。双酚A和壬基酚亲脂性较强，易在脂肪和蛋白含量高的食品中富集[2]。双酚A和壬基酚是一种公认的内分泌干扰物[3-4]，具有类似雌激素作用，能够对机体产生毒害作用。大量体内外试验证明双酚A和壬基酚的雌激素效应和生物毒性，其对人体产生的不良作用，包括对内分泌系统、生殖系统和免疫系统的影响及致癌作用[1]。

近年来，随着我国乳业的快速发展，乳制品产量大大提高，人均消费量也大幅增加。随着食品安全意识的提高，人们对乳制品，特别是婴幼儿食品的安全更是提出更高的要求。NP和BPA不允许添加到食品中，特别是婴幼儿配方奶粉中。但在婴幼儿配方奶粉的生产过程和使用的包装材料中可能存在双酚A和壬基酚，导致双酚A和壬基酚有可能被引入到奶粉中，进而给婴幼儿的健康带来危害[5]，因此对双酚A和壬基酚的检测就尤为重要。目前，双酚A和壬基酚的检测方法主要有高效液相色谱[6-7]、气相色谱-质谱法[8]及液相色谱-串联质谱法[1-5]等。试验采用液相色谱-串联质谱法，以乙腈为提取溶剂，同时测定婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

1.1.1 材料

婴幼儿配方乳粉，内蒙古伊利集团提供；婴幼儿配方奶粉，陕西银桥集团提供；婴幼儿配方羊奶粉，陕西百跃集团提供。

1.1.2 试剂

双酚A和壬基酚标准品，纯度＞98.5%，德国Dr.ehrenstorfer gmbh公司产品。

甲醇，色谱纯，德国默克公司产品；乙腈，色谱纯，德国默克公司产品。

1.1.3 仪器

6420 A型液相色谱-串联质谱仪，美国Agilent公司产品；TG16-WS型台式高速离心机，湖南湘仪离心机仪器有限公司产品；JDX-300型多功能摇床，上海世平实验设备有限公司产品；UHP-Ⅲ-20T型超纯水机，成都超出科技有限公司产品；BSA224S型电子天平，北京赛多利斯天平有限公司产品；Poroshell 120EC-C18型色谱柱，美国Agilent公司产品。

1.2 方法

准确称取样品2.0 g（精确到0.01 g） 于25 mL玻璃离心管（用乙醇和超纯水清洗，经180℃烘干）内，加入5 mL乙腈，振荡提取20 min，以转速5 000 r/min离心5 min，上清液转移至另外1个干净的玻璃离心管中，再用5 mL乙腈提取，合并2次提取的上清液，氮气吹干。加2 mL甲醇溶解，以转速6 500 r/min离心3 min，上清液供液相色谱-串联质谱仪测定，同时做空白试验。

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Poroshell 120EC-C18，2.1 mm×100 mm×1.8 μm，或性能相当者。柱温30℃；进样量5 μL；流动相0.1%氨水∶甲醇为90∶10，梯度洗脱；流速0.3 mL/min。

色谱条件见表1。

表1 色谱条件

1.2.2 质谱条件

电离方式：ESI负离子模式；干燥气：氮气，纯度≥99.9%，23 L/min；离子源温度300℃；采集模式多重反应监测模式（MRM）。

双酚A和壬基酚的质谱参数及保留时间见表2。

表2 双酚A和壬基酚的质谱参数及保留时间

2 结果与分析

2.1 样品前处理方法的优化

试验采用无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯∶环己烷（1∶1）、乙腈4种溶剂进行提取，同时进行加标试验。经过分析，发现当采用乙腈为提取溶剂时，对奶粉中蛋白质的沉淀效果较好，无干扰峰。双酚A和壬基酚的回收率比较稳定，且能获得76%～88%的回收率。因此，确定乙腈为该方法的提取溶剂。

2.2 色谱与质谱条件的优化

2.2.1 色谱柱的选择

试验选择了Agilent公司的Poroshell 120EC-C18、SB-C18和BEH-C183种色谱柱。结果表明，采用BEH-C18色谱柱和SB-C18色谱柱时，双酚A和壬基酚峰形较差，定性及定量分析结果偏差比较大。当采用Poroshell 120EC-C18色谱柱时，双酚A和壬基酚响应值和峰形都比较好，保留时间稳定。因此，试验最终选用Poroshell 120EC-C18色谱柱。

3种色谱柱分离双酚A和壬基酚得到的MRM色谱图见图1。

图1 3种色谱柱分离双酚A和壬基酚得到的MRM色谱图

2.2.2 流动相的选择

试验先后使用甲醇和水，乙腈和水、甲醇和0.1%甲酸、甲醇和0.1%氨水作为流动相。通过对照峰形、保留时间和灵敏度。结果发现，当流动相为甲醇和0.1%氨水溶液为流动相时，其质谱响应值最高，峰形平滑对称，并且色谱分离效果也很好。因此，最终确定流动相为甲醇和0.1%氨水溶液。

2.2.3 质谱条件的选择

双酚A和壬基酚的化学结构表明，此化合物进行电喷雾负离子模式扫描。在负离子模式下，双酚A和壬基酚分别产生133.1，212.2，133.1，147.1 m/z的特征离子。最终确定双酚A和壬基酚的定量离子对分别为227.2/212.2和219.2/133.1，定性离子对分别为227.2/133.1和219.2/147.1。试验对裂碎电压和碰撞能量进行了优化，确定了双酚A和壬基酚的最佳质谱参数。

双酚A和壬基酚子离子MRM色谱图及质谱图见图2。

图2 双酚A和壬基酚子离子MRM色谱图及质谱图

图3 空白样品 （a）、双酚A和壬基酚标准品（b）及加标样品（c） MRM色谱图

2.3 方法的验证

2.3.1 标准曲线和检出限

双酚 A：0.5，1.0，2.5，5.0，10.00 μg/L，壬基酚：1，2，5，10，20 μg/L质量浓度范围，在选定的色谱条件和质谱条件下进行测定，得到双酚A和壬基酚的线性范围、线性方程、相关系数和检出限。

试验采用在空白样品中添加标准溶液的方法，以各定量离子3倍和10倍的信噪比（S/N） 对应样品中目标化合物的浓度，得到检出限和定量限。

双酚A和壬基酚的线性范围、线性方程、相关系数和检出限见表3，空白样品（a）、双酚A和壬基酚标准品（b） 及加标样品（c） MRM色谱图见图3。

表3 双酚A和壬基酚的线性范围、线性方程、相关系数和检出限

2.3.2 方法精密度和回收率

采用在空白样品（婴幼儿配方乳粉） 中进行加标的方法进行回收率和精密度试验。在空白样品中添加低、中、高3个质量浓度水平（双酚A：0.25，2.50，10.00 μg/kg；壬基酚：0.5，5.0，20.0 μg/kg）的标准溶液，按照1.2.1描述的方法进行测定，每个添加水平平行测定6次。

双酚A和壬基酚在样品中的回收率和精密度见表4。

表4 双酚A和壬基酚在样品中的回收率和精密度

试验结果表明，表明该方法回收率良好，数据结果稳定，可以满足实际检测要求。

3 结论

建立液相色谱-串联质谱法检验检测婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚含量的方法。该方法具有前处理简单、灵敏度高、定性定量准确、回收率稳定等优点，适用于婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚的检测与验证。

[1]罗纪军.液相色谱-串联质谱法测定乳制品中双酚A和壬基酚 [J].现代农业科技，2015（1）：288-289，291.

[2]牛宇敏，张晶，张书军，等.同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中的双酚A、壬基酚及辛基酚 [J].分析化学，2012（4）：534-538.

[3]李锦清，綦艳，郦明浩，等.UPLC-MS/MS法测定奶粉中壬基酚和双酚A[J].广东化工，2015（14）：211-212.

[4]曲双双，肖光辉，刘婷，等.UPLC-MS/MS法同时测定婴幼儿配方奶粉中的壬基酚和双酚A[J].中国食品添加剂，2016（8）：185-190.

[5]曲双双.UPLC-MS/MS法测定婴幼儿配方奶粉中壬基酚和双酚A的方法建立及应用 [D].哈尔滨：黑龙江东方学院，2016.

[6]周建科，张前莉，韩康，等.中老年奶粉中双酚A和己烯雌酚的反相高效液相色谱测定 [J].食品工业科技，2007 （2）：233-234，145.

[7]田宏哲，徐静.高效液相色谱法测定牛奶中双酚A[J].食品科技，2012（8）：286-289.

[8]黄会，邓旭修，张华威，等.凝胶渗透色谱-固相萃取-气相色谱-质谱法测定水产品中辛基酚、壬基酚和双酚A[J].食品科学，2013（24）：116-120.◇

Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Detection of Infant Formula Foods Bisphenol A and Nonylphenol

ZHANG Minjuan，AN Yu，TANG Xin，WANG Huifang，LI Xiao
（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection，Xi'an，Shaanxi 710048，China）

A test method for the determination of bisphenol A and nonylphenol in infant formula by liquid chromatography-tandem mass spectrometry was established.Samples were extracted by solvent extraction and cleaned up before chromatographic separation on a Poroshell 120SB-C18column using a mobile phase consisting of water and methanol by isocratic elution.The dyes were analyzed by LC-MS/MS in multiple reaction monitoring（MRM） mode and quantified by the external standard method.The method of bisphenol A was found to be 0.05 μg/kg.The method of nonylphenol was found to be 0.1 μg/kg.The recycling rate of low，medium and high levels in linear range the recovery of bisphenol A was 76.80%～86.75%，the recovery of nonylphenol was 77.00%～87.34%.This method had the characteristics of high sensitivity and quantitative accuracy，which could be applied to the detection of bisphenol A and nonylphenol in infant formula.

bisphenol-A；nonylphenol；LC-MS/MS；infant formula foods；determination

O657.63

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.12.013

1671-9646（2017） 12a-0049-03

2017-07-31

婴幼儿配方乳粉中双酚A和壬基酚的测定方法研究（2015QK212）。

张敏娟（1975— ），女，本科，工程师，研究方向食品安全与检测。