血清IL-6及外周血Th17细胞在合并RA的AMI患者中的临床意义

黄 晖，李 礼，丛广志，何 琳，燕 茹，郝 钰，马玉兰，张 亮，张红岩，贾绍斌

·论 著·

血清IL-6及外周血Th17细胞在合并RA的AMI患者中的临床意义

黄 晖，李 礼，丛广志，何 琳，燕 茹，郝 钰，马玉兰，张 亮，张红岩，贾绍斌

目的探讨急性心肌梗死(AMI)合并类风湿关节炎(RA)与不合并类风湿关节(RA)患者的临床指标及血清白介素-6(IL-6)水平和外周血辅助性T细胞17(Th17)的差异。方法选择合并RA的AMI患者28例，不合并RA的AMI患者28例，收集这些患者的基线资料，并测定患者血清IL-6水平和外周血淋巴细胞Th17细胞亚群，比较2组差异。结果合并RA的AMI患者血清IL-6水平高于不合并RA的AMI患者(P<0.05)，身体质量指数(BMI)低于不合并RA的AMI患者(P<0.05)；Th17细胞在AMI患者外周血CD 4 T细胞中比例显著升高，但在合并及不合并RA的AMI患者中无统计学意义；合并RA的AMI患者的血清IL-6水平显著高于不合并RA的AMI患者，且在不合并RA的AMI患者中，血清IL-6水平与AMI患者冠脉病变程度呈正相关(P<0.05)。结论血清IL-6可能是不合并RA的AMI患者冠脉病变进展的重要炎症因子，而Th17细胞可能是RA患者发生AMI的一个潜在致病因素。

急性心肌梗死；类风湿关节炎；自身免疫；辅助性T细胞17；血清白介素-6

冠心病(CHD)是一种与类风湿关节炎(RA)有相同炎症通路的心脏疾病[1-2]。近年来研究提示，早期粥样硬化斑块的主要成分为各种免疫细胞，而这些免疫细胞释放的各种效应分子加速了斑块的进展；急性冠脉综合征(ACS)就是斑块内炎症激活的表现[3]。RA是以关节病变为主要表现的自身免疫性疾病。有研究指出，从20世纪50年代起，CHD便成为RA患者的主要死亡原因。国外一项研究表明，RA患者和糖尿病患者急性心肌梗死(AMI)的风险相当[4]，RA患者的心血管死亡率是普通人群的1.5倍[5]。但是RA患者易合并AMI的发病机制并不明确。此研究旨在对比合并和不合并RA的AMI患者的异同，探讨合并RA的AMI患者的潜在发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料：宁夏医科大学总医院心脏中心2015年3月-2016年5月收治的AMI合并RA并行冠脉介入治疗(PCI)的患者共28例，按1∶1比例选取年龄、性别匹配的同期住院接受PCI不合并RA的AMI患者。纳入标准：符合2012年欧洲心脏病学会制定的急性心肌梗死诊治指南；符合1987年美国风湿病学会修订的类风湿关节炎分类标准。排除标准：合并除RA外的其他结缔组织病；伴有严重脏器功能衰竭。

1.2 研究方法：详细记录患者的性别、年龄、RA病程、吸烟史、BMI、入院临床检验、冠状动脉造影结果、Syntax评分，采用DAS28评估患者RA疾病活动度。收集患者血清检测血清白介素-6(IL-6)，每组随机选取8例患者外周血分离PBMC,检测患者辅助性T细胞17(Th17)占CD4 T细胞的比例，并采集年龄、性别匹配的健康人8例进行流式染色。

1.3 实验方法

1.3.1 ELISA法检测血清IL-6含量：采集纳入患者外周血4 mL，采血后30 min内将血清分离并分装，置于-80 ℃冰箱冻存，采用未冻融的血清进行检测。选用RD公司提供的ELISA测量IL-6试剂盒(Quantikine;R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)，操作步骤按说明书进行。反应终止后立即上酶标仪进行检测。

1.3.2 流式法检测Th17细胞占CD 4 T细胞的比例：分离外周血单个核细胞，用1 640无血清培养基，添加离子霉素(1 μl/mL)、PMA(0.5 μl/mL)、BFA(2.5 μl/mL)置于孵箱内(37℃，5%CO2)刺激4 h；收集细胞进行表面染色：用PECF594标记的抗人CD4抗体2 μl、AF700标记的抗人CD3抗体2 μl避光染色30 min；重悬细胞，加入BD固定/破胞膜液 300 μl，4℃避光孵育20 min；用APC标记的IL-17抗体2 μl进行胞内染色，并采用同型抗体对照，4℃避光孵育30 min，洗涤后上机检测。

2 结果

2.1 2组患者临床资料比较：2组患者的年龄、高/低密度脂蛋白、左室射血分数(LVEF)及冠脉SYNTAX积分差异无统计学意义。不合并RA的AMI患者高血压病史的比例明显高于合并RA的AMI患者，见表1。

2.2 血清IL-6水平与AMI患者冠脉SYNTAX积分相关性分析：血清IL-6水平与SYNTAX积分呈正相关，且这种相关性仅存在于不合并RA的AMI患者，合并RA的AMI患者，其血清IL-6水平虽显著高于不合并RA的AMI患者(表1)，但与SYNTAX积分无相关性，见图1-图2(目录后)。

2.3 外周血Th17细胞在各组间表达的差异：合并及不合并RA的AMI患者外周血Th17细胞在CD 4T细胞中的比例显著高于健康对照组，在AMI亚组中，虽未出现明显统计学差异，但合并RA的AMI患者的Th17细胞比例较未合并RA的AMI患者有升高趋势，见图3-图4(目录后)。

表1 合并与不合并RA的AMI患者的临床及免疫学资料分析

3 讨论

近年来，国外许多研究提示RA患者心血管事件的发生率增高，但对于RA发生CHD的危险因素的研究结果尚不统一。有结果提示，在RA患者中，低BMI的RA患者心血管死亡率增加3倍以上，这可能是因为疾病活动造成患者体重下降，低BMI的RA患者往往有更高的疾病活动度，系统免疫活动异常导致CHD的发生和发展。国内一项大型RA合并CHD的流行病调查显示，传统心血管危险因素并不是导致RA患者发生冠脉病变的直接因素，单纯控制传统心血管危险因素并不能完全阻止RA患者冠脉病变的进展[6]。本研究结果提示，合并RA与不合并RA的AMI患者的冠脉病变情况及心功能均无明显统计学差异。而2组患者在BMI、CRP、IL-6水平上明显不同，在传统心血管危险因素的比较上，合并RA的AMI患者高血压的发生率低于不合并RA的AMI患者，与既往研究结果相符。

IL-6是一种促进Th17分化的细胞因子，IL-6在细胞膜表面的IL-6受体水解后可形成sIL-6R，其可以和IL-6结合形成复合体，介导远距离信号传导系统，从而影响包括内皮细胞、平滑肌细胞在内的多种细胞[7]。国外多项研究表明，IL-6水平与冠状动脉累及冠脉的支数呈正相关[8]，同时IL-6的基因多态性和冠脉病变支数也存在相关性[9]。

冠脉SYNTAX评分是一种对冠状动脉病变程度进行评估的半定量工具，该评分结合了Leaman评分、ACC/AHA病变分级系统、完全闭塞分型系统以及Duke和ICPS分支病变分型系统，可更为翔实地对冠状动脉病变的解剖学特征进行评价。而冠脉SYNTAX评分对50%～99%的非梗死病变给予相同的分数，故而其更多地反映病变累及范围的大小。Harada等利用64排冠脉CT评估病人冠脉斑块的数目，发现其与IL-6有关[8]，比计算冠脉累及支数更为精确。因此，IL-6在AMI患者特别是未合并RA的AMI患者中与SYNTAX积分的相关性表明，IL-6水平与冠脉内粥样硬化累及的范围明确相关，提示IL-6可能在动脉粥样硬化斑块的发生发展方面发挥了重要的作用。本研究结果提示，合并RA的AMI患者的血清IL-6水平显著高于不合并RA的AMI患者，且只有在不合并RA的AMI患者中，血清IL-6水平与AMI患者冠脉病变程度(SYNTAX积分)有显著的正相关性，提示IL-6是AMI患者冠脉斑块进展的因素之一，但合并RA的AMI患者动脉粥样硬化及梗死的发生可能存在其他的致病因子。

Th17细胞是近年来新发现的一种辅助T细胞的亚型，其发现解释了许多采用原有适应性免疫理论无法解释的问题，与RA等多种自身免疫病相关[10]。同时，也有报道称其分泌因子IL-17A作为一种前炎症因子，与人类动脉粥样硬化中斑块的不稳定性密切相关[11]。多个动物实验表明，在Apoe-/-小鼠内阻断IL-17R信号通路能减小斑块的体积，减轻粥样斑块的进展[12-13]。但此结果与使用不同克隆来源的抗体的结果并不统一。

我国对Th17细胞与CHD的关系研究尚无统一结论，有学者认为，AMI及不稳定心绞痛(UAP)患者中Th17细胞在T细胞中的比例明显升高，而另有学者认为Th17细胞在AMI、UAP及对照组中无明显差异。本研究结果提示，AMI患者Th17细胞在CD4 T细胞亚群中显著升高，与之前部分研究相似。但在是否合并RA的组间比较中无统计学差异，这可能与本研究纳入例数较少有关。本研究结果显示，与不合并RA的AMI患者相比，合并RA的AMI患者Th17细胞亚群比例有升高趋势，提示Th17细胞比例升高可能是RA患者发生AMI的潜在致病原因，但其机制还需进一步验证。

Th17细胞与血清IL-6在CHD患者中水平升高，提示二者在冠脉病变中均发挥了一定的作用，且血清IL-6水平与冠状动脉病变程度存在相关性。但在合并RA 的AMI患者中血清IL-6水平与冠脉程度无相关性，提示RA患者发生AMI可能存在其他致病因子，而Th17细胞可能为其中一个潜在的致病因素。

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ClinicalsignificanceofIL-6andTh17cellsinacutemyocardialinfarctionpatientscombinedwithrheumatoidarthritis

HUANGHui,LILi,CONGGuangzhi,HELin,YANRu,HEYu,MAYulan,ZHANGLiang,ZHANGHongyan,JIAShaobin.

DepartmentofCardiology,GeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China

JIAShaobin,Email: hui8380156@163.com

ObjectiveTo explore the difference of clinical charateristics and Th17 cell and serum IL-6 between patients in acute myocardial infarction with or without rheumatoid arthritis.Methods28 patients with AMI combined RA and another 28 AMI patients were selected,and the baseline data were collected. ELISA and Flow cytometry were used to test Th17 and IL-6.ResultsThe level of IL-6 was higher in AMI patients combined with RA while BMI was lower in these patients compared with AMI patients without RA (t=-2.535,P<0.05;t=2.428,P<0.05,respectively). The percentage of Th17 producing in CD4 T cell was higher in patients with AMI,but no significant difference was shown in subgroups with or without RA. The level of serum IL-6 was higher in AMI patients combined with RA,and positive correlated with SYNTAX score in AMI patients without RA (r=0.585,P<0.05).ConclusionSerum IL-6 probably is an inflammatory factor which could promote atherosclerosis in AMI patients without RA. Th17 cell is a potential pathogenic marker in process of atherosclerosis in AMI patients with RA.

Acutemyocardialinfarction;RheumatoidArthritis;Autoimmune;Th17;IL-6

R781

A

10.13621/j.1001-5949.2017.11.0968

宁夏科技支撑计划资助项目(201526)

宁夏医科大学总医院心脏中心，宁夏 银川 750004

黄晖(1973-)，男，硕士学位，副主任医师，主要从事心血管内科工作。

贾绍斌，Email:hui8380156@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20171109.1542.016.html

2017-06-03责任编辑李 洁