自体骨髓间充质干细胞联合促肝细胞生长素治疗失代偿期酒精性肝硬化疗效分析

焦栓林，赵晓蕊，欧阳洪，杜世奇，秦建增，王全楚

自体骨髓间充质干细胞联合促肝细胞生长素治疗失代偿期酒精性肝硬化疗效分析

焦栓林，赵晓蕊，欧阳洪，杜世奇，秦建增，王全楚

目的观察自体骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合促肝细胞生长素（pHGF）治疗失代偿期酒精性肝硬化（ALC）患者的临床疗效。方法2012年6月～2016年6月我科住院收治的67例失代偿期ALC患者，34例接受常规综合治疗，33例在常规综合治疗基础上接受BMSCs肝动脉移植治疗，并接受HGF注射2月。结果在治疗2月末，观察组血清TBIL、ALB、PT、HA水平分别为（55.9±12.6） μmol/L、（38.8±5.1)g/L、（13.4±3.6） s 和（222.2±61.5）ng/ml，与对照组【（66.9±11.0）μmol/L、（33.8±5.8）g/L、（15.8±3.9）s、（284.5±30.5）ng/ml，P＜0.01 或 P＜0.05】比，差异显著。结论应用 BMSC 移植联合 HGF 治疗 ALC 患者能较好地改善肝功能指标。

酒精性肝硬化；骨髓间充质干细胞；促肝细胞生长素；治疗

酒精性肝病（ALD）是目前仅次于病毒性肝炎的常见肝脏疾病。酒精性肝硬化（ALC）是ALD的终末阶段，约8%～20%大量饮酒者最终可发展为ALC[1]。目前，对于ALC患者的治疗主要依靠护肝药物、白蛋白、利尿等常规内科方法，在失代偿期患者则需要腹水回输或肝移植等措施处理。近年来，干细胞移植作为一种治疗失代偿期肝硬化的新技术被应用于临床。干细胞移植分为自体造血干细胞移植、自体骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植、异基因脐血干细胞移植和异基因脐带间充质干细胞移植等。有研究表明，对于酒精性肝病引起的失代偿期肝硬化，应用间充质干细胞治疗效果较好[2，3]。促肝细胞生长素（pHGF）由于具有刺激正常肝细胞DNA合成，促进肝细胞再生功能而被广泛应用于临床。我们应用BMSCs联合pHGF治疗失代偿期ALC患者，观察了临床疗效情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例来源 2012年6月～2016年6月我科收治的67例失代偿期酒精性肝硬化患者67例，男56例，女11例；平均年龄54±14岁。诊断符合2010年中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组制定的《酒精性肝病诊疗指南》[4]的诊断标准：有超过5年的饮酒史，男性折合乙醇量≥40 g/d，女性≥20 g/d，或2周内有大量饮酒史，折合乙醇量＞80 g/d。临床有肝功能减退及门静脉高压症的表现，血清酶学检查支持失代偿期ALD的诊断。经过腹部B超、CT、MRI检查诊断为肝硬化。纳入标准：肝功能处于失代偿状态，已发生食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病、腹水等严重并发症。排除合并病毒性肝炎、年龄＜18岁、存在心、肺、肾等重要脏器功能不全、凝血酶原活动度＜40%或有严重出血倾向者。患者签署知情同意书，本研究得到我院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法 34例对照组患者接受保肝、利尿等内科综合治疗；33例在对照组治疗的基础上，给予自体BMSCs和pHGF治疗。在抽取骨髓术前3 d及手术前6 h分别给予人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）150 μg，在三角肌部位行皮下注射。在无菌治疗室内，选患者髂后上棘为穿刺点，常规消毒铺巾局麻后，使用18号骨髓穿刺针穿刺，抽取骨髓血100 ml，以4 000 U肝素抗凝，避免污染。采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞，每例患者提取的单个核细胞总数在3.8×108～2.1×109。将骨髓单个核细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM细胞培养液中，置于37℃、5%CO2孵箱中培养，48 h后去除未贴附细胞，继续培养细胞1 w，弃胎牛血清培养基，用生理盐水洗涤2次，继续培养7 d，收集细胞，获得骨髓间充质干细胞，悬浮于肝素化生理盐水5 ml中，含细胞数为4.6×106～1.8×107个。经流式细胞仪检测、鉴定示呈CD34-，CD45-，CD90+，CD44+。在数字减影血管造影技术下，经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉，造影，观察肝内血管情况及有无占位性病变。将待用的细胞悬液5 ml经左右肝动脉缓慢注入，并用生理盐水5 ml冲管。术毕，拔管，穿刺点加压包扎。穿刺侧下肢固定6 h，术后应用抗生素3 d，预防感染。给予促肝细胞生长素（威海赛洛金药业有限公司）120 mg加入5%葡萄糖注射液250 ml中静脉滴注，1次/d，连续8 w。

1.3 观察指标 常规检测血生化指标（浙江世纪康大医疗科技有限公司）；采用日本Sysmex公司生产的CA-1500血凝仪测定凝血酶原时间（PT）；采用ELISA法检测透明质酸（HA，上海信裕生物科技有限公司）。

1.4 统计学方法 应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，P＜0.05为具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清肝功能指标和HA变化比较 在治疗后2个月，观察组各项指标较对照组改善更明显（P＜0.01，表1）。

表1 两组血肝功能指标和HA水平（±s）比较

表1 两组血肝功能指标和HA水平（±s）比较

与对照组比，①P＜0.01

例数 TBIL（μmol/L) ALB（g/L）对照组 治疗前 34 123.3±28.1 28.1±5.0治疗后 34 66.9±11.0 33.8±5.8观察组 治疗前 33 124.5±25.9 27.7±4.8治疗后 33 55.9±12.6① 38.8±5.1①PT（s）18.7±4.11 15.8±3.9 18.9±4.7 13.4±3.6①HA（ng/ml）306.8±75.4 284.5±30.5 309.6±70.0 222.2±61.5①

2.2 不良反应 33例接受骨髓干细胞移植患者术后发生胃肠道反应5例，发热1例，股动脉穿刺点出血形成淤斑3例，骨髓穿刺部位淤斑1例，均经止血、对症治疗后恢复。

3 讨论

肝硬化是一种临床常见的慢性肝病，可由多种原因引起，肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。主要病理学表现为出现肝细胞弥漫性变性、坏死，继发出现纤维组织增生及肝细胞结节状再生，肝脏生理功能如胆汁的分泌，脂肪、糖类、蛋白质的代谢和储存，凝血因子的合成及体内解毒等发生严重障碍。因此，减少肝细胞坏死、促进肝细胞再生、消除肝内炎症病变、减少细胞外基质和胶原生成、促进胶原降解、维护肝脏正常功能是治疗肝硬化的关键。

近年来，随着BMSCs临床应用的逐渐发展和对肝硬化研究的深入，采用BMSCs移植治疗肝硬化成为肝硬化治疗的新方法，越来越多的研究表明BMSCs移植治疗失代偿期肝硬化患者的安全性良好，近期疗效显著[4，5]。研究显示BMSCs既有多向分化能力，在体外有效的刺激或体内微环境诱导下可逐渐分化为具有正常功能的肝脏细胞，进而恢复肝脏功能。研究发现，BMSCs通过刺激胶原酶活性，促进胶原降解，抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA 的过度表达和肝细胞的凋亡，明显降低胶原纤维、网状纤维及PCⅢ、HA、LN水平，阻止肝硬化的发生、发展[8，9]。国内学者采用注射乙醇的方法复制肝损伤模型，采用BMSCs治疗后动物肝组织坏死的区域明显小于模型组。

pHGF是由乳猪新鲜肝脏中提取出的多肽类肝细胞生长刺激因子，最早作为促进肝细胞增生的有丝分裂原被开发和纯化[10]，能显著降低PCⅢ、HA、LN水平，阻断肝纤维化的发展。它还能溶解已形成的纤维组织，消耗肝组织中的ECM，改善肝功能。此外，pHGF能够促进机体肝细胞 DNA合成，从而促进肝细胞再生，改善肝脏微循环。另一方面，pHGF通过加强肝内皮细胞对HA的摄取和分解功能，抑制纤维细胞增生和胶原纤维形成，从而发挥抑制肝纤维化的作用。

本研究对肝硬化患者治疗前后各项血生化指标变化情况分析显示，血清总胆红素和凝血酶原时间呈现明显下降，血清白蛋白呈现明显的上升趋势。可见，经过BMSCs移植治疗后患者肝功能恢复明显，副作用少，值得临床验证。

[1]Gao B，Bataller R.Alcoholic liver disease:pathogenesis and new therapeutic targets.Gastroenterology，2011，141（5）:1572-1585.

[2]Forbes SJ，Newsome PN.New horizons for stem cell therapy in liver disease.J Hepatol，2012，56（2）:496-499.

[3]Zhang Z，Wang FS.Stem cell therapies for liver failure and cirrhosis.J Hepatol，2013，59（1）:183-185.

[4]王方，云升皓，周新人，等.经肝动脉自体骨髓或脐带血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化患者的安全性和近期疗效比较.实用肝脏病杂志，2014，17（4）:356-359.

[5]沈建坤，郑联坵，潘兴南，等.自体骨髓间充质干细胞治疗失代偿期酒精性肝硬化疗效分析.实用肝脏病杂志，2015，18（6）:628-632.

[6]郭屏，王淑平，刘丹萍.川芎嗪联合促肝细胞生长素治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化疗效观察.中国药房，2007，18（8）:601-603.

[7]Matsuda Y，Matsumoto K，Yamada A，et al.Preventive and therapeutic effects in rats of hepatocyte growth factor infusion on liver fibrosis/cirrhosis.Hepatology，1997，26（1）:81-89.

[8]吴理茂，李连达，刘红，等.自体脊髓干细胞移植与归元方连用治疗急慢性肝损伤实验研究.中国工程科学，2004，6（8）:34-38.

[9]Yang L，Inokuchi S，Roh YS，et al.Transforming growth factor-β signaling in hepatocytes promotes hepatic fibrosis and carcinogenesis in mice with hepatocyte-specific deletion of TAK1.Gastroenterology，2013，144（5）:1042-1054.

（收稿：2017-01-19）

（本文编辑：陈宗炳）

Efficacy ofautologousbone marrow mesenchymalstem cellstransplantation in treatmentofpatientswith decompensated alcoholic livercirrhosis

JiaoShuanlin，ZhaoXiaorui，Ouyang Hong，etal.DepartmentofHepatobiliary Medicine，153th Hospital of PLA，Zhengzhou 450007，Henan Provinc

Alcoholic liver cirrhosis；Bone marrow mesenchymal stem cells；Hepatocyte growth factor；Therapy

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.06.038

450007郑州市 解放军第153医院肝胆内科

焦栓林，男，52岁，大学本科，主任医师。主要从事重症肝病及晚期肝硬化的诊断与治疗研究。E-mail：jiaoshuanlin@126.com