PCX柱净化-气相色谱质谱法测定牲畜瘦肉中的盐酸克伦特罗

PCX柱净化-气相色谱质谱法测定牲畜瘦肉中的盐酸克伦特罗

盐酸克伦特罗，又名瘦肉精，是一种对动物具有促进生长、减少脂肪含量的兴奋剂类物质，曾广泛应用于生猪的饲养。由于盐酸克伦特罗容易在动物组织内残留，当人们食用含有一定量盐酸克伦特罗的牲畜肉后，可能会引起中毒，所以我国已禁止将盐酸克伦特罗作为生长促进剂使用。但因其具经济效益，故非法使用盐酸克伦特罗的现象依然存在，因此建立快速高效的盐酸克伦特罗检测方法具有重要的意义。

气相色谱-质谱检测盐酸克伦特罗的方法较多，如GB/T 5009.192-2003、NY/T 468-2006，我们在以往的实验基础上对前处理步骤进行了改变，在一定程度上减少了盐酸克伦特罗的检测时间。

实验部分

材料与设备：三氯乙酸、氨水，分析纯；甲醇、正己烷，色谱纯；盐酸克伦特罗标准品；美托洛尔标准品；N，O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMSCI)；Agela Cleanert PCX固相萃取柱60mg/3mL；安捷伦气相色谱-质谱仪。

气相色谱条件：色谱柱RTX-5ms，30m x 0.25m x 0.25μm；程序升温条件：初始温度70℃，保留1min；18℃/min升温至200℃，保留0.0min；5℃/min升温至245℃，保留0.0min；25℃/min升温至280℃，保留5.0min。总运行时间：23.622min；载气：氦气，纯度≥99.99%；进样口温度：220℃；进样量：3μL；进样方式：不分离进样。检测器：EI检测器。检测器温度：230℃。全扫描 模 式：35-400amu。SIM 模 式：72、86、187、223、243、262amu。

样品处理 提取：称取5～10g已粉碎的牲畜瘦肉于离心管中，加入15mL的5%三氯乙酸溶液，匀浆后超声萃取20min，再以9000r/min离心3min，取清液于另一离心管。重复上述步骤一次，合并提取液。

正己烷净化：向上述提取液中加入10mL正己烷，涡旋震荡后静置分层，吸去上层正己烷相，若油脂较多，可重复一次。

PCX净化：依次加入3mL水、3mL甲醇活化PCX柱，弃去流出液；往PCX柱加入样品提取液，弃去流出液；依次加入5mL甲醇、5mL水，弃去流出液；加入6mL的5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。

衍生：在55℃加热条件下氮吹洗脱液至干，加入内标美托洛尔，再氮吹至干。加入100μL甲苯和100μL(BSTFA)/(TMSCI)衍生试剂，涡旋2min后将样品置于80℃烘箱中加热衍生1h。待样品冷却后，加入800μL甲苯，涡旋2min后进样测定。

结果与讨论

盐酸克伦特罗衍生后的气相色谱图如图1所示，结果显示，峰型良好，衍生效果满足实验要求。

图1 盐酸克伦特罗衍生后的气相色谱图

提取方法的选择：对比酶提取法、国标NY/T 468-2006乙酸乙酯提取法、三氯乙酸酸性水溶液提取法，结果显示，酶提取法操作繁琐、耗时较长，一般需要在37℃下酶解16小时，而且试剂成本较高。乙酸乙酯提取法操作也比较繁琐，需要旋蒸干乙酸乙酯后再进行净化，影响实验的回收率。采用三氯乙酸酸性水溶液提取法，盐酸克伦特罗离子化后溶解在水中，并且结合PCX净化，利用离子键作用力，能够有效保留盐酸克伦特罗。

固相萃取柱的选择：对比常用的固相萃取柱HLB和PCX柱，结果显示，PCX柱回收率更高。主要原因可能是HLB主要采用范德华力保留待测物，而PCX有两重作用力，π-π作用力和离子键作用力，能够有效地保留盐酸克伦特罗。结合氨水甲醇溶液洗脱，本实验能够很好地净化盐酸克伦特罗，达到检测要求。

标准曲线、检出限、回收率与精密度：在10-500μg/L范围内，盐酸克伦特罗浓度与峰面积呈现良好的线性关系,其线性回归方程为：Y=8665.5X，相关系数为0.9990，检出限为1μg/L。取一份经检测不含有盐酸克伦特罗的样品作为空白样品，测得平均加标回收率均大于75%，标准偏差为2.6%～5.8%。

实际样品的应用：本方法应用于广东省内农贸市场日常生活销售的猪肉检测，对其进行食品安全监测与预警，假阳性检出低，效果良好。

□ 崔昊 罗杰鸿 广州京诚检测技术有限公司