ADVIA Centaur CP化学发光免疫法测定丙戊酸药物浓度的性能评价

杨丽薇,吴明德,刘 敏

ADVIACentaurCP化学发光免疫法测定丙戊酸药物浓度的性能评价

杨丽薇,吴明德,刘 敏

目的评价西门子全自动化学发光分析仪ADVIA Centaur CP对血清丙戊酸(VPA)的定量检测性能。方法应用该系统定量检测VPA,并对其精密度、准确度、功能灵敏度、特异性、相关性分析进行方法学评价。结果直接化学发光法测定丙戊酸的高、中、低值样本日内精密度分别为2.74%、2.98%、4.48%,日间精密度分别为3.21%、4.00%、6.54%;高、中、低水平样本的回收率分别为96.69%、97.43%、103.58%;功能灵敏度达到1.22 μg/mL;与ADVIA Centaur免疫系统比较具有很好的相关性,比对试验结果r≥0.95,得到回归方程:Y=0.987 2 X-1.090 5。结论该系统对定量检测血清VPA浓度有较高的准确度、灵敏度和特异性,且快速简便,能够达到临床检测要求的标准。

化学发光免疫法;性能评价;丙戊酸

0 引言

丙戊酸为一侧链脂肪酸类化合物,是临床治疗多种类型癫痫的一线药物,临床应用比较广泛,也用于肌阵挛发作,全身性强直阵挛发作,单纯及复发性和失神发作[1]。检测服用该药物患者体内的血药浓度是临床调整剂量、评价疗效、避免毒副作用和实施个体化治疗的主要依据之一。由于患者服用剂量与血药浓度之间的相关性较差,常规剂量给药时,血药浓度测定值将有50%低于或高于常规治疗范围[2],因此,人体内浓度测定方法的建立对于研究其药物动力学及药物相互作用具有重要意义。化学发光免疫法具有灵敏度高、重复性好、准确、用血量少、简便快速等优点,适于临床研究与普遍应用。西门子全自动微粒子化学发光免疫分析系统ADVIA Ceutaur CP是德国公司推出的,使用直接化学发光免疫技术进行竞争免疫测定方法,对血药浓度进行检测。患者样品与标记试剂中吖啶酯标记的衍生物竞争性结合固相试剂中的微磁颗粒共价结合的有限的鼠单克隆抗体,患者样品中存在的浓度与系统检测所得的相对光学信号单位(RLUs)数量呈反比。本研究中，我们根据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)相关文件的要求,结合本实验室的实际，对该检测系统测定血清丙戊酸的性能进行综合验证及评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 所用患者样本均来自我院精神科门诊及住院的正在服用药物的患者,所有样本采集时间为上午8∶00～9∶00,分离血清后-20 ℃保存备用。

1.1.2 仪器与试剂 德国西门子ADVIA Centaur CP和西门子ADVIA Centaur全自动化学发光分析仪及其配套检测试剂盒,校准液批号:C2861,均为原装进口;质控品购于伯乐公司生产的Lyphochek免疫分析质控物,高、中、低3个水平的质控品批号分别为:40311、40312、40313。所有试剂均在有效期内使用。

1.2 方法 所有实验步骤按仪器系统说明书和厂家工程师培训方法严格进行,并遵守《全国临床检验操作规程》第4版中的相关规范与要求,对仪器进行日常维护保养,定期对曲线进行校准,质控品检测均为在控。

1.2.2 准确度 采用回收试验方法[5],在样品中加入标准物质,选取低水平患者血清样本1份12.5 μg/mL,分别与伯乐质控品高值(105 μg/mL)、中值(75 μg/mL)、低值(33.5 μg/mL)等量混合,配制成高、中、低3个浓度的血清标本,使混合后3个样本浓度水平每份检测3次,取平均值，测定其回收率。

1.2.4 特异性 在丙戊酸为55.8～69.0 μg/mL的混合血清中加入安定(100 μg/mL)、氯硝安定(100 μg/mL)、苯比巴妥(750 μg/mL)、阿司匹林(1 000 μg/mL)化合物。加入后血清样品的丙戊酸测定结果与未加入的配对样品组进行比较,这些化合物对丙戊酸的测定结果无显著性影响。

1.2.5 相关性分析 参考EP9-A2[8]文件，每天随机选择10个新鲜患者样本,对仪器进行常规维护和保养校准合格的情况下，2 h内分别在西门子ADVIA Centaur CP化学发光仪和ADVIA Centau化学发光仪完成浓度的检测,每个样本重复测定2次,连续5 d,以ADVIA Centau化学分析仪2次测定结果的均值为X轴,以ADVIA Centaur CP化学发光仪2次测定结果的均值为Y轴绘图进行方法比对。

2 结果

2.1 精密度试验 日内和日间精密度结果见表1。丙戊酸高、中、低值样本测定的CV均符合厂家提供的标准CV批内、批间≤10%,精密度性能优良。见表1。

表1 丙戊酸精密度试验验证结果

2.2 回收试验 添加3个水平丙戊酸的回收率分别为96.69%、97.68%、103.58%,回收率=回收量/添加量=(添加后的检验值-添加前的检验值)/添加量×100%。均在100%±10%范围，符合该仪器的检测要求。见表2。

表2 ADVIA Centaur CP检测VPA的回收试验

表3 丙戊酸功能灵敏度试验结果

由表3可以看出，当检测浓度为1.22 μg/mL时,其CV%最接近20%,因此,丙戊酸测定的功能灵敏度应在1.22 μg/mL左右,与试剂商提供的1.0 μg/mL接近。

2.4 特异性结果 在混合血清样品中加入各浓度的化合物,应用ADVIA Centaur CP仪测定丙戊酸的结果与未加入化合物组进行比较,化合物对丙戊酸的测定结果无显著性影响(P≥0.05)。

2.5 相关性分析结果 以ADVIA Centar 2次测定结果均值为参比,ADVIA Centaur CP 2次测定结果均值为比较得出回归方程Y=0.987 2 X-1.090 5及相关系数r=0.993 4。ADVIA Centaur CP测定丙戊酸r≥0.95认为X取值范围合适,直线回归统计的斜率和截距可靠,两检测系统结果间具有良好相关性[9]，见图1。

图1 相关性结果分析

3 讨论

丙戊酸类药物是临床上常用的广谱一线抗癫痫药物,其口服吸收迅速、完全[10],可单独作用或与其他抗癫痫药物联合应用来控制癫痫发作。其治疗有效浓度范围为50～100 μg/mL,若该药在血清或血浆中的浓度过低,则不能维持癫痫的控制状态,若其在血清或血浆中的浓度过高,则增加发生毒性反应的危险。因药物的代谢和排泄存在很大的个体差异,药物的半衰期对特定的个体而言很难预期。由于治疗窗窄、个体差异大、不良反应和血药浓度相关,中毒症状与癫痫发作症状难以判断[11]，因此,为最大限度地发挥疗效和避免不良反应,密切监测血清或血浆中丙戊酸的浓度,对于正在进行丙戊酸治疗的患者是非常重要的。

本研究应用西门子ADVIA Centaur CP免疫化学发光仪检测服用丙戊酸患者血清VPA，并对其分析性能进行评价,从而为血清丙戊酸水平变化的准确判断以及将药物浓度控制在理想范围提供可靠的检测方法。精密度是反映检测系统整体性能的首要指标,也是进行其他方法学验证实验的前提[12]。西门子ADVIA Ceutaur CP全自动化学发光免疫分析系统是采用直接化学发光技术进行的竞争免疫测定方法,该方法具有准确性好、特异性高、操作简便快速、样本用量少且不需预处理等优点。试剂中的磁性颗粒均匀悬浮于整个反应系统，使反应系统的特异结合能力增加，反应效率提高，加强了化学发光检测的准确性[13]。本研究结果表明，该系统精密度良好,高、中、低值样本的日内日间CV均小于10%,符合有关规定要求;高、中、低水平样本的回收率分别为96.73%、97.68%、105.67%,均在可接受范围(90%～110%)之内,说明该仪器的回收率良好,同样也反映了良好的准确度[14];功能灵敏度应达到1.22 μg/mL,完全能满足临床和科研的要求;r≥0.95说明相关性好,检测具有一定的可比性;采用的一次性Tip头,不会造成样品之间的交叉污染;由于该种方法简单、快速,样本不需要前处理,无放射污染,且检测项目覆盖广泛,在实际分析中有较好的应用前景。

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PerformanceevaluationofADVIACentaurCPchemiluminescenceimmunoassayforthedeterminationofvalproicacidconcentrationinserum

YANG Li-wei,WU Ming-de,LIU Min

(Clinical Laboratory,Zigong Psychiatric Mental Health Center,Zigong 643020,China)

ObjectiveTo evaluate the performance of SIEMENS automatic chemiluminescence analyzer,ADVIA Centaur CP,for quantitative detection of serum valproic acid (VPA).MethodsThe VPA was quantitatively detected by this system,and the precision,accuracy,sensitivity,specificity and correlation analysis were evaluated.ResultsThe inter-day precision of direct chemiluminescence method for the determination of valproic acid in high-,middle-and low-level samples was 2.74%,2.98% and 4.48%,respectively,and intra-day precision was 3.21%,4.00%,and 6.54%,respectively.The recoveries of high-,middle-and low-level samples were 96.69%,97.43% and 103.58%,respectively.The functional sensitivity reached 1.22 μg/mL.Comparison of the two detective results of the ADVIA.Centaur immune system showed good correlation (r≥0.95),regression equation:Y=0.987 2 X-1.090 5.ConclusionThe system is rapid and simple with high accuracy,sensitivity and specificity for quantitative detection of serum VPA concentration,it can reach the standard of clinical detection requirements.

Chemiluminescence immunoassay;Performance evaluation;Valproic acid

2017-03-26

四川省自贡市精神卫生中心检验科,四川 自贡 643020

10.14053/j.cnki.ppcr.201711021