泰山连翘花水提取物抗衰老作用研究

李 腾 李雅林 何 浩 马羽霄 王 迪 刘有旺

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

泰山连翘花水提取物抗衰老作用研究

李 腾 李雅林 何 浩 马羽霄 王 迪 刘有旺

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

目的 探讨泰山连翘花水提物抗衰老作用及其机制。方法 复制 D-半乳糖小鼠衰老模型，将48只 C57BL/6小鼠随机分6组(n=8)：空白组，模型组，香菇多糖组和泰山连翘花水提物低、中、高剂量组，分别给予生理盐水、D-半乳糖、香菇多糖和泰山连翘花水提物。测定各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数，取血、肝、脑测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)。结果 泰山连翘花水提物能显著提高衰老模型小鼠吞噬率和吞噬指数；显著降低MDA含量并提高GSH-Px、SOD和CAT活力。结论 泰山连翘花水提物可通过增强巨噬细胞吞噬功能、促进机体抗氧化和清除自由基等能力而发挥其延缓衰老的作用。

泰山连翘；抗衰老；自由基；抗氧化能力

连翘是泰山春天一道美丽的风景，漫山遍野的野生连翘将整个泰山装扮成金色海洋，令人叹为观止。但对于其独特药用资源的开发远远不够，造成巨大的资源浪费。据报道，连翘是木犀科连翘属植物，是清热解毒的中药，为清热解毒口服液、双黄连口服液等中药制剂的主要原料[1]。但对于连翘抗衰老作用效果和作用机理并不十分清楚。本项目探索连翘花水提物是否对自由基所致的线粒体损伤有保护作用，并研究其抗氧化能力、超氧阴离子的清除活性及抗衰老机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂

D-半乳糖购自北京索莱宝生物科技有限公司；香菇菌多糖片购自浙江普洛康裕天然药物有限公司；瑞氏染液、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(gutathion peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2方法

1.2.1泰山连翘多糖水提取物的制备 将泰山连翘花采用热水提取,即药材洗净切碎后,以30%乙醇浸提,分离过滤。药材干燥后用10倍体积水加热沸腾提取3次,滤液合并,浓缩成生药的浓缩液。浓缩液用4倍体积的30%乙醇沉淀,离心分离醇沉部分,醇沉部分以水溶解,再次离心去除沉淀物,再次进行浓缩。然后继续用4倍体积的30%乙醇进行沉淀,沉淀物加水进行水解,最后进行透析、冷冻干燥，所得黄棕色沉淀即为中性多糖成分。

1.2.2建立抗衰老模型、动物分组及处理 60只小鼠随机分为6组,每组8只：空白对照组，衰老组，香菇多糖组和连翘花水提物低、中、高剂量组。

(1)空白对照组：灌胃等体积生理盐水。

(2)衰老模型组：颈背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg并灌胃等体积生理盐水。

(3)香菇多糖阳性对照组：颈背部皮下注射D-半乳糖120 mg/kg并灌胃等体积香菇多糖100 mg/ kg。

(4)泰山连翘水提物高、中、低剂量组：根椐预试验结果，低、中、高泰山连翘剂量各组小鼠每日分别灌胃 50、100、200 mg/kg并同时颈背部皮下注射 D-半乳糖 120 mg/kg。按0.2 ml/10 g，1天灌胃1次，连续给药 8周。

1.2.3巨噬细胞吞噬率和吞噬指数检测 末次给药24 h后，给小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液，30 min后，处死小鼠，取小鼠腹腔液进行推片，瑞氏染色，显微镜下观察并计算吞噬率和吞噬指数[2]。

1.2.4小鼠血中MDA含量和SOD活力测定 将小鼠进行内眦静脉取血，3000 r/min离心10 min收集血清，按照丙二醛试剂盒说明书操作，及按超氧化物歧化酶试剂盒说明书操作，检测MDA含量及SOD活力。

1.2.5小鼠肝组织GSH-Px活力测定 取小鼠肝脏，于不锈钢网上用注射器柄研磨，加预冷的生理盐水过滤以去除结缔组织，最后制成10%的肝组织匀浆。4 ℃冷冻离心,取离心上清液,用谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒测定谷胱甘肽过氧化物酶活力。

1.2.6小鼠脑组织 CAT活力测定 取小鼠脑组织,按照上述制备肝脏组织匀浆的方法，制备成10%的脑组织匀浆。4 ℃冷冻离心，取上清液，用过氧化氢酶试剂盒测定过氧化氢酶活力。

2 结 果

2.1连翘花水提物对衰老吞噬率和吞噬指数的影响

与空白对照组相比,模型组吞噬率和吞噬指数均显著降低(Plt;0.05)；与模型组比较，香菇菌多糖组及连翘花水提物低、中、高剂量组吞噬率和吞噬指数均显著性升高且具有一定的剂量依赖效应(Plt;0.05,Plt;0.01,见表1)。

表1 连翘花水提物对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响

注：*Plt;0.05vs空白组；#Plt;0.05，##Plt;0.01 vs 衰老组。

2.2连翘花水提物对衰老小鼠MDA含量和GSH-Px、SOD、CAT活力的影响

与空白对照组比较，衰老模型组小鼠MDA含量显著升高，而 GSH-Px、SOD和CAT活力则显著降低(Plt;0.05)；与模型组比较，香菇多糖组及连翘花水提物低、中、高剂量组MDA含量显著降低(Plt;0.05), GSH-Px和SOD活力均显著升高(Plt;0.01),香菇多糖中、高剂量组CAT活力显著升高(Plt;0.01,表1),低剂量组则差异不显著。

表2 泰山连翘花水提物对衰老小鼠MDA、GSH-Px、SOD和CAT的影响

注：*Plt;0.05 vs空白组；#Plt;0.05，##Plt;0.01 vs 衰老组。

3 讨 论

本研究按照传统方法[3-4]，采用D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型，研究了泰山连翘花水提物抗衰老作用及作用机制。本实验复制的D-半乳糖致衰老小鼠行动迟缓，皮毛松散无光泽，体重增加量明显下降。同时血清中SOD活性显著降低，而MDA水平显著升高，与以往报道的结论相符[5-6]。本研究结果表明，连翘花水提物可增强衰老小鼠巨噬细胞的吞噬能力，且随着剂量的增加，吞噬能力增强，表明巨噬细胞的吞噬功能可能参与了抗衰老作用。连翘花水提物是否增强淋巴细胞的抗衰老功能还有待进一步研究。另外，低、中、高剂量连翘花水提物处理组与衰老模型组相比，小鼠血清中GSH-Px 、SOD和CAT活性显著升高，而MDA含量显著降低，且具有明显的剂量效应依赖关系。因此推测连翘花水提物可能通过提高GSH-Px、SOD和CAT活性，增强其清除自由基的能力，降低脂质过氧化，减少丙二醛含量，从而减轻对机体组织的损伤，发挥延缓衰老的作用。

经过本研究，我们初步检测到，泰山连翘花水提取物具有非常好的抗衰老作用，进一步可以考虑将泰山连翘花制备成泰山连翘花茶，给中老年人饮用，观察其抗衰老效果。本研究也可以作为进一步将连翘花应用于临床抗心力衰竭、肾衰竭药物研究的基础，为新型药物开发提供参考。

[1] 王进明，范圣此，李安平，等.连翘不同部位中连翘苷和连翘酯苷 A的含量分析及其入药探讨[J].中国现代中药，2013,15(7):556-559.

[2] 王静静.灵芝多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响研究[J].中国医药指南,2012,10(21):471-472.

[3] 钟灵，王振富，文德鉴.黄芪多糖抗衰老作用的实验研究[J].中国应用生理学杂志，2013,29(4): 350-352.

[4] 张片红，唐沪强，郑鸣之，等.杭白菊总黄酮对衰老小鼠学习记忆的影响[ J] .中国应用生理学杂志，2011,27(3):368-371 .

[5] 刘佳，张敬敬，李明阳，等. 人参茎叶总皂苷对D-半乳糖致衰老小鼠免疫功能的影响[ J] .中国老年学杂志，2015,35(18)：5087-5089.

[6] 单颖，潘兴瑜，姜东,等.玉竹多糖抗衰老的实验观察[J].中国临床康复，2006,10(3):79-81.

Anti-aging effect of the water extract from the Taishan forsythia flowers

LI Teng LI Ya-lin HE Hao MA You-xiao WANG Di LIU You-wang

(Taishan Medical University, Taian 271016, China)

Objective: To explore the anti-aging effect and mechanisms of the water extract from the Taishan forsythia flowers. Methods: D-Galactose induced aging mice model was duplicated, and the 48 C57BL/6 mice were randomly divided into 6 groups (n=8): empty group, model group, mushrooms polysaccharide group, and the low dose, middle dose, high dose of the water extract from the Taishan forsythia flowers. These groups were administered normal saline, D-Galactose, mushrooms polysaccharide and water extract from the Taishan forsythia flowers respectively. Phagocytosis rate and phagocytic index of the macrophages from the mice abdominal cavity were detected; and malondialdehyde (MDA), gutathion peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD)from the mice blood, liver or brain were also detected. Results: Water extract from the Taishan forsythia flowers increased phagocytosis rate and phagocytic index of the aging mice, decreased MDA content and enhance activity of the GSH-Px,SOD and CAT. Conclusion:Water extract from the Taishan forsythia flowers can play anti-aging effect via enhancing pshagocytosis function of the macrophages, promoting oxidation resistance and directly clearing free radical.

Taishan forsythia;anti-aging;free radical;oxidation resistance

R285 .5

A

1004-7115(2017)11-1223-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.11.007

国家级大学生创新创业训练计划项目(201510439123)。

李腾(1992—)，男，泰山医学院在校学生。

刘有旺，E-mail:ywlji@126.com。

2017-09-16)