BRMS1和骨桥蛋白在胃癌中的表达及其意义

李效良 逄小红

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

BRMS1和骨桥蛋白在胃癌中的表达及其意义

李效良 逄小红

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

目的 探讨乳腺癌转移抑制基因(breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1)和骨桥蛋白(OPN)在胃癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学技术检测胃癌组织和癌旁正常组织中BRMS1和OPN蛋白的表达水平。结果 BRMS1在73例癌旁正常组织中均阳性表达，表达率100%(73/73)，而胃癌组织中表达率为32.9%(24/73)，两组比较差异具有统计学意义(Plt;0.01)；胃癌组织中OPN表达率为71.2%(52/73)，癌旁正常组织中未见OPN阳性表达。BRMS1的表达与胃癌临床病理分期和淋巴结转移有关(P均lt;0.01)，与肿瘤大小、浸润深度、Borrmann分型和组织学类型无关。OPN的表达与胃癌细胞浸润深度、临床病理分期和淋巴结转移有关(Plt;0.01或Plt;0.05)，与肿瘤大小、Borrmann分型和组织学类型无关。BRMS1与OPN的表达呈负相关(列联系数C=0.582，P=0.000)。BRMS1阴性表达伴OPN阳性表达者易发生淋巴结转移(Plt;0.05)。结论 BRMS1和OPN在胃癌的转移过程中发挥重要作用，可作为反映胃癌生物学行为的指标。BRMS1可能通过减少OPN的表达抑制胃癌的转移。

胃肿瘤；乳腺癌转移抑制基因；骨桥蛋白

乳腺癌转移抑制基因(breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1)是2000年在乳腺癌细胞中发现的肿瘤转移抑制基因。BRMS1蛋白定位于核内，可能是一种转录调节因子，通过调控转录来抑制肿瘤的转移[1]。近年来研究发现，除了乳腺癌，BRMS1在人黑色素瘤[2]、膀胱癌[3]、咽癌[4]等肿瘤中也起到抑制转移的作用。骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种具有多功能的分泌型细胞外基质蛋白，其转录可受到许多因素的影响。近年来的研究发现，OPN在多种恶性肿瘤组织中异常表达，其表达水平与肿瘤的恶性程度、转移倾向及预后密切相关[5-7]。目前对BRMS1、OPN与胃癌关系的研究以及二者相互关系的研究报道较少。我们应用免疫组织化学技术对胃癌及癌旁正常组织各73例进行BRMS1和OPN蛋白检测，以探讨BRMS1和OPN的表达与胃癌临床病理因素之间的关系，及BRMS1与OPN表达的相关性，以期对胃癌的诊断和治疗具有指导意义。

1 对象与方法

1.1对象

收集2013年至2016年在山东省泰安市中心医院行手术切除的73例胃癌患者蜡块标本进行免疫组织化学检测，其中男40例，女33例，中位年龄50岁(20～76岁)，术前均未行放疗或化疗。所有病例均经术后病理确诊。按组织病理学分级：高分化腺癌9例，中分化腺癌20例，低分化腺癌44例。按1988年UICC TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期18例。对照组为癌旁正常组织。

1.2主要试剂

羊抗人BRMS1单克隆抗体和羊抗人OPN多克隆抗体(Santa Cruz公司产品)，SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3免疫组化染色和判定标准

操作步骤按免疫组化试剂盒说明书进行。DAB显色，苏木精复染，明胶甘油封片。用PBS代替一抗作阴性对照。BRMS1、OPN均以细胞质或(和)细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。采用二级计分法，首先按染色强度评分：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，gt;75%为4分。两者乘积≤2分为免疫组化反应阴性，≥3分为阳性。

1.4统计学处理

应用SPSS18.0软件进行统计学分析，癌组织蛋白质表达与临床病理参数之间的关系用四格表或R×C表χ2检验，BRMS1与OPN表达的相关性分析采用独立性的χ2检验，并计算列联系数。

2 结 果

2.1BRMS1和OPN蛋白在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达

BRMS1蛋白主要表达于细胞核和细胞质，呈棕黄色颗粒状。73例癌旁正常组织中BRMS1蛋白均呈阳性表达，表达率100%(73/73)；而在绝大多数胃癌组织中BRMS1呈阴性表达，只在部分胃癌组织中呈阳性表达，表达率为32.9%(24/73)。BRMS1在癌旁正常组织中的表达率明显高于胃癌组织(χ2=73.75，P=0.000)。OPN蛋白在癌旁正常组织不表达，而在胃癌组织中表达71.2%(52/73)，主要表达于胃癌细胞质，呈棕黄色颗粒状。

2.2BRMS1和OPN的表达与胃癌临床病理特征的关系

BRMS1的表达与胃癌临床病理分期和淋巴结转移有关(P均﹤0.01)，而与肿瘤大小、胃癌细胞浸润深度、Borrmann分型和组织学类型无关。OPN的表达与胃癌细胞浸润深度、临床病理分期和淋巴结转移有关(Plt;0.01或Plt;0.05)，与肿瘤大小、Borrmann 分型和组织学类型无关(表1)。

表1 胃癌组织中BRMS1和OPN的表达与患者临床病理特征的关系

2.3胃癌组织中 BRMS1和OPN表达的相关性

全组73例胃癌标本的免疫组化结果表明，BRMS1阳性表达的胃癌组织中OPN多呈阴性表达；反之，BRMS1呈阴性表达的胃癌组织中OPN多呈阳性表达(表2)，二者呈负相关关系(列联系数C=0.582，P=0.000)。

表2 胃癌组织BRMS1表达与OPN表达的关系

2.4胃癌组织中BRMS1和OPN联合表达与淋巴结转移的关系

46例OPN阳性表达同时伴BRMS1阴性表达者中33例发生淋巴结转移，转移率为71.7%；18例OPN阴性表达同时BRMS1阳性表达者中有7例发生淋巴结转移，转移率为38.9%；9例OPN和BRMS1同时阴性表达或阳性表达的胃癌组织中有2例发生淋巴结转移，转移率为22.2%。OPN阳性表达同时伴BRMS1阴性表达者淋巴结转移的发生率明显高于后两者(P均lt;0.05)。

3 讨 论

BRMS1是2000年Seraj等首先在乳腺癌细胞中发现的肿瘤转移抑制基因，研究显示，它能显著降低乳腺癌转移到肺和淋巴结的能力。随后的研究[2-4]发现，在多种具有高度转移潜能的恶性肿瘤细胞内均表现为BRMS1基因表达的降低或缺失，提示BRMS1在多种恶性肿瘤的转移中均起着重要的抑制作用。本研究结果显示，BRMS1蛋白在73例癌旁正常组织中均表达，而在胃癌组织中表达率为32.9%(24/73)；胃癌组织BRMS1的表达率显著低于癌旁正常组织(Plt;0.01)。我们还分析了胃癌组织BRMS1的表达与临床病理因素之间的关系，发现胃癌组织中BRMS1的表达率与是否伴有淋巴结转移呈负相关，即在有淋巴结转移的胃癌组织中BRMS1的表达率明显低于无淋巴结转移的胃癌组织；同时随着胃癌临床分期的升高，BRMS1的表达率明显降低。上述研究结果表明，BRMS1作为肿瘤转移抑制基因参与了抑制胃癌转移的过程，BRMS1蛋白的低表达在胃癌细胞侵袭力的获得和增强发挥一定作用，提示BRMS1表达下降和缺失可能预示胃癌组织的高侵袭倾向、易转移和预后较差的恶性生物学特征。

OPN是一种具有分泌性、粘附性的糖基化磷酸蛋白，与其主要受体整合素和CD44结合，参与多种器官和组织的生理病理过程。其表达受多种激素、生长因子、肿瘤促进剂及原癌基因表达产物等的调控[8-9]。近年来诸多研究表明，骨桥蛋白在肿瘤细胞的粘附、浸润、迁移及新生血管形成过程中起关键作用，与肿瘤的发生、发展和侵袭转移有关，可作为肿瘤进展标记物。本研究结果显示，OPN在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，提示OPN可能参与了胃癌的发生和发展。我们对胃癌中OPN的表达与临床病理学特征之间的关系进行了分析，发现OPN的表达与肿瘤细胞浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移有关，即肿瘤细胞浸润越深、分期越晚、转移程度越重，OPN的阳性率越高，与Higashiyama M[10]的研究结果相似，提示OPN的高表达与胃癌的侵袭和转移密切相关，OPN可能是判断胃癌预后的参考指标。

本实验还对胃癌组织中BRMS1与OPN表达之间的关系进行了研究，并对BRMS1和OPN的联合表达与淋巴结转移的关系进行了分析，发现BRMS1与OPN的表达呈负相关，BRMS1阴性表达伴OPN阳性表达者易发生淋巴转移。由于BRMS1是mSin3-HDAC转录辅助抑制因子复合体的一员[11]，而mSin3-HDAC复合体在各种基因的转录调节中起重要作用，因此推测BRMS1可能通过减少OPN的表达抑制肿瘤转移。Samant RS等[12]的体外研究结果为这一推测提供了证据，他们利用启动子缺失的荧光素酶报告系统在OPN启动子上发现了一个新的NF-кB位点，并用电泳迁移率变动分析和染色质免疫沉淀作用(ChIP)证实这个位点是BRMS1在OPN启动子的调节位点(OPN/NF-кB)，BRMS1可能通过抑制NF-кB的活性抑制OPN转录，从而抑制肿瘤的转移。

综上所述，BRMS1和OPN的表达都与胃癌的侵袭和转移有关，而且BRMS1和OPN的表达呈负相关。说明在胃癌发生、发展的众多变化过程中，BRMS1和OPN之间存在着一定的相互关系，BRMS1可能通过减少OPN的表达抑制胃癌的转移，其具体的关系有待进一步研究。临床中联合检测BRMS1和OPN的表达，对判断胃癌良恶性程度及评估预后等具有一定指导意义。

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Expression and significance of BRMS1 and OPN in gastric carcinoma

LI Xiao-liang PANG Xiao-hong

(Taishan Medical University，Taian 271016, China)

Objective: To investigate the expression of breast cancer metastasis suppressor 1 (BRMS1) and osteopontin (OPN) and their relations with the clinicopathological features of gastric carcinoma. Methods: Immunohistochemistry was used on 73 specimens of gastric carcinoma tissues and native gastric tissues adjacent to the gastric carcinoma tissues. Results: The expression rate of BRMS1 in the gastric carcinoma tissues was 32.9% (27/73), which was significantly lower than that in the adjacent gastric tissues (100%, 73/73,Plt;0.01). The expression rate of OPN in gastric carcinoma tissues was 71.2% (52/73), and no OPN expression was observed in the adjacent gastric tissues. The expression of BRMS1 was correlated with the TNM stage (Plt;0.01), and lymph node metastasis (Plt;0.01), but not with the invasive depth, tumor size, growing manner (Borrmann staging), or histopathological grade (allP﹥0.05). The expression of OPN was correlated with invasive depth of the tumor (Plt;0.01), TNM stage (Plt;0.05), and lymph node metastasis (Plt;0.01), but not with the tumor size, growing manner (Borrmann staging), or histopathological grade (allP﹥0.05). The expression of BRMS1 was negatively correlated to the OPN (contingency coefficient=0.582,Plt;0.01). The cases with BRMS1(-)/ OPN(+) revealed a significantly high tendency of lymph node metastasis(Plt;0.05). Conclusion: BRMS1 and OPN may play an important role in the metastasis of gastric carcinoma, and can be used to evaluate the biological activity of gastric carcinoma. BRMS1 may suppress the metastasis of gastric carcinoma by reducing OPN expression.

stomach neoplasms;breast cancer metastasis suppressor 1;osteopontin

R735

A

1004-7115(2017)11-1215-04

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.11.005

李效良(1963—)，男，副教授，本科，主要从事细胞生物学教学和研究工作。

逄小红，主要从事免疫细胞与淋巴管再生机制、血管与淋巴管新生及肿瘤转移机理研究。

2017-09-12)