P504s在前列腺癌中的表达研究

李龙　朱文尧　陶泽宇　杨小淮

[摘要] 目的 探讨P504s和前列腺特异性抗原（PSA）在不同前列腺组织中的表达及其在前列腺癌（PCa）诊断中的价值。 方法 回顾性分析107例前列腺手术或穿刺活检患者的临床资料，其中前列腺癌（PCa）患者40例，前列腺上皮内瘤（PIN）患者13例，前列腺增生（BPH）患者54例，对存档病理蜡块进行免疫组化染色。 结果 PCa、PIN中P504s的表达的阳性率与BPH中P504s的表达的阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05），而PCa与PIN中P504s的表达阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。P504s、PSA与PCa的Gleason分级无明显相关性（P>0.05）。 结论 P504s具有良好的前列腺组织特异性和肿瘤特异性，在PCa早期诊断及鉴别诊断方面具有重要价值。

[关键词] P504s；前列腺特异性抗原；前列腺癌；免疫组织化学

[中图分类号] R737.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）29-0006-03

Study on the expression of P504s in prostate cancer

LI Long1 ZHU Wenyao1 TAO Zeyu1 YANG Xiaohuai2

1.Bengbu Medical College， Bengbu 233030， China； 2.Department of Urinary Surgery， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu 233004， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of P504s and prostate specific antigen（PSA） in different prostate tissues， and its value in the diagnosis of prostate cancer（PCa）. Methods Clinical data of 107 cases receiving prostate surgery or biopsy were retrospectively analyzed， including 40 patients with prostate cancer（PCa）， 13 patients with prostate intraepithelial neoplasia （PIN） and 54 patients with prostate hyperplasia （BPH）. Immunohistochemical staining was performed on the archived pathology wax. Results The positive rate of P504s expression in PCa and PIN was significantly different from the positive rate of P504s expression in BPH （P<0.05）， and there was no significant difference in the positive rate of P504s expression in PCa and PIN（P>0.05）. There was no significant correlation between P504s， PSA and Gleason grade of PCa（P>0.05）. Conclusion P504s has favorable prostate tissue specificity and tumor specificity. It has an important value in the early diagnosis and differential diagnosis of PCa.

[Key words] P504s； Prostate specific antigen （PSA）； Prostate cancer； Immunohistochemistry

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是歐美国家男性常见的恶性肿瘤[1，2]。近年来，在我国PCa发病率呈逐渐上升趋势。PCa早期诊断具有临床症状不典型、隐匿性的特点[3]。目前，多采用血清PSA的测定方法进行早期筛查，但PSA肿瘤特异性低，且存在灰色区域，在PCa的早期发现中存在一定的缺陷。P504s（α-甲酰基辅酶A消旋酶）在PCa的诊断中具有高度敏感性和特异性[4]，在病理诊断PCa中具有重要意义。本文通过对不同前列腺组织标本进行免疫组化实验，探讨P504s在PCa中的表达及其在PCa诊断中的价值，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 组织标本

选取蚌埠医学院第一附属医院病理科2013年1月～2017年7月的前列腺手术或穿刺标本。所有患者临床资料完整，均无合并其他肿瘤疾病，术前未进行放疗、全身化疗，术前或穿刺前均检测了PSA值。筛选出符合条件的患者共107例，年龄53～88岁，平均（68.4±6.9）岁。其中前列腺癌（PCa）患者40例，前列腺上皮内瘤（PIN）患者13例，前列腺增生（BPH）患者54例。

1.2 试剂来源

兔抗人多克隆抗体P504s抗体，兔抗人多克隆抗体PSA抗体，均购自proteintech公司。即用型S-P超敏免疫组化试剂盒和DAB酶底物染色试剂盒、柠檬酸组织抗原修复液均购于福州迈新公司。

1.3 实验方法endprint

采用S-P免疫组化方法，检测107例前列腺组织存档蜡块标本中P504s及PSA的染色结果。操作步骤和方法完全按照试剂盒说明书严格实施。实验阳性对照使用已知病理结果证实的PCa患者的标本切片，阴性对照用PBS代替一抗。

1.4 结果判定

根据染色强度积分：10×20倍显微镜下随机观察切片5个不同视野无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；染色密度积分：10×4低倍显微镜下观察切片，计算阳性细胞的百分比。以前列腺细胞胞膜及胞浆出现浅黄色、棕黄色、棕褐色颗粒为阳性表达。按照着色细胞百分比积分（切片阳性表达率）计算公式：阳性表达率（%）=阳性（弱阳性+阳性+强阳性）表达例数/总例数×100%；<5%计0分；5%～25%计1分；>25%～50%计2分；>50%计3分；并将染色强度积分和染色密度积分的乘积计为免疫反应积分，且0分为表达（-），1、2分为（+），3、4分为（++），6、9分为（+++）。

1.5 PCa的Gleason评分

根据2010版Gleason评分[5]标准，将PCa的病例资料分为三组，其中Gleason评分≤4分为分化良好组，5～7分为中等分化组，8～10分为差分化组。

1.6 统计学方法

使用SPSS 22.0进行数据分析处理，不同组间率的比较采用χ2检验，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多个不同组间数据比较采用秩和检验，P504s、PSA的表达与PCa临床分期及Gleason评分相关性分析之间采用Spearman等级相关检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理学形态特征

P504s主要表达于细胞的胞质中，阳性表达呈黄色至黄棕色（或棕褐色），在周圍的前列腺腺体上皮细胞及基地细胞中表达为阴性。在PCa和PIN中呈弥漫性表达，而在PIN、BPH组织细胞中呈局灶弱性表达。PSA在PCa、PIN、BPH中均有表达，阳性多位于细胞胞浆，部分在胞膜，且在胞浆靠近腔缘位置染色较深。见封三图1～6。

2.2 P504s、PSA的免疫组化染色结果

P504s在PCa、PIN及BPH组织中均有不同程度的表达，表达阳性率分别为92.5%（37/40）、84.6%（11/13）、5.9%（3/51）。PSA的表达率分别为80.0%（32/40）、69.2%（9/13）、75.9%（41/54）。P504s在BPH与PCa、PIN中表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），且在PCa中较高。在PCa与PIN中比较，无显著性差异（P=0.398）；PSA在PCa、PIN及BPH中的表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1、2。

2.3 P504s、PSA在PCa组织中的表达差异

在PCa组织中P504s、PSA表达“+、++、++”为癌检出阳性，在40例PCa组织中P504s的阳性检出率为92.5%，PSA的阳性检出率为80.0%。运用配对四格表的χ2检验处理分析，显示P504s和PSA在PCa的检出率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.4 P504s与血清总PSA的关系

107例患者根据术前PSA检测结果按0～4 ng/mL、>4～10 ng/mL、>10～20 ng/mL、>20 ng/mL分为四组，P504s在四组中的PCa检出率分别为100.0%、75.0%、 88.9%、96.2%。见表3。

2.5 P504s与PCa组织Gleason分级的关系

根据Gleason分级标准将PCa组织标本分为三组，其中Gleason评分≤4分9例，5～7分19例，8～10分12例，使用Spearman等级相关检验分析所示，P504s在PCa组织中的表达与Gleason分级未见显著相关性（rs=-0.133，P=0.415>0.05）。见表4。

3 讨论

PCa的临床诊断大多依靠肿瘤细胞的特异性、组织特异性，而PCa单依靠光镜下诊断常缺乏足够依据，特别是对于穿刺活检患者病理标本的明确诊断，更增加了难度。P504s（α-甲酰基辅酶A消旋酶）是一种胞质蛋白，主要存在于过氧化物酶和线粒体上，其基因定位于染色体5p13，参与脂肪酸衍生物和脂肪酸的β氧化过程[6，7]，是一种具有高度敏感性和特异性PCa标记物[8]，在PCa的诊断和鉴别诊断中愈加重要。

通过引入免疫组化染色技术，发现P504s在PCa中的阳性表达率虽有所不同，但普遍均较高[9]，本实验结果中P504s在PCa中的阳性表达率为92.5%，比较符合前人的研究。在病理学诊断方面，联合应用多种标记蛋白CK5/6、p63、34βE12标记前列腺组织的基底细胞[10]，可以显著提高PCa的诊断水平。通过相互对比印证可以进一步提高PCa的诊断率，达到理想的诊断目标。

P504s主要表达于细胞质，在PCa和PIN组织细胞中呈弥漫性表达，表达强度较高[11]。本实验的结果与之相符，且多呈黄色或棕黄色，部分呈细颗粒状，在BPH组织细胞中不表达或呈局灶性弱表达。P504s在BPH与PCa、PIN中表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），且在BPH组织中仅3例弱表达，在PCa中表达阳性率较高。表明P504s可以作为PCa和PIN高度敏感和特异的标记物，为PCa及PIN与良性增生的鉴别诊断提供参考。

PCa的Gleason评分作为重要的PCa评估指标[12]，可以帮助预测评估PCa患者术后的预后情况。通过我们收集的病例发现Gleason评分在6、7分的患者最多见，与国内外的研究相符[13，14]。在Gleason评分≤4分、5～7分、8～10分三组中，P504s的阳性检出率分别为88.9%、78.9%、75.0%，检出率均较高。林毅锋等[15]通过免疫组化实验发现不同Gleason评分患者之间的P504s的表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），有助于PCa的诊断。本实验通过Spearman等级相关检验方法分析显示Gleason评分与P504s表达强度未见明显等级相关，说明P504s对于PCa的预后方面作用不大。endprint

目前，在PCa的早期诊断以及普查中主要依靠血清PSA的检测[16]，PSA具有良好的组织特异性，但是肿瘤特异性不高，特别是在前列腺炎患者、近期尿潴留患者、导尿等操作术均可以使血清PSA不同程度的上升，并且血清PSA还存在灰色区域。本实验本中的四组（0～4 ng/mL、>4～10 ng/mL、>10～20 ng/mL、>20 ng/mL）血清学标本中，P504s在四组中的PCa检出率分别为100.0%、75.0%、88.9%、96.2%。说明P504s在不同血清PSA水平中均具有良好的检出率，特别是在对于血清PSA>4 ng/mL临床可疑的PCa患者，P504s表达阳性可以进一步明确诊断，弥补单纯血清PSA检测的不足，增加低血清PSA患者中PCa的诊断水平，降低漏诊率，尽早发现早期PCa患者。

综上所述，P504s可以作为新型的PCa标记物，且对于处于PSA灰色区域的PCa患者依然具有良好的检出率，合理应用前列腺基底细胞标记物，可以明显增加PCa的检出率，在PCa的早期诊断方面具有重要的临床价值。

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（收稿日期：2017-08-01）endprint