益气降浊颗粒对冠心病（痰浊血瘀型）家兔血脂、miR-21及TGFβRⅡ表达的影响*

王莹威 刘 蕾 张 瑶 魏明慧

（1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150036；3.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001）

益气降浊颗粒对冠心病（痰浊血瘀型）家兔血脂、miR-21及TGFβRⅡ表达的影响*

王莹威1△刘 蕾2张 瑶2魏明慧3

（1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150036；3.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001）

目的观察益气降浊颗粒对冠心病（痰浊血瘀型）家兔血管内microRNA-21（miR-21）和TGFβRⅡmRNA表达水平的影响。方法本实验采用冠心病（痰浊血瘀型）家兔模型作为研究对象，运用荧光定量PCR技术观察miR-21和TGFβRⅡ mRNA在家兔主动脉的表达情况。结果实验中空白组、中药组、模型组中TGFβRⅡ的表达与miR-21具有相关性（r=-0.564，P＜0.05），而中药干预下的动脉硬化模型家兔TGFβRⅡ的表达水平较模型组显著降低，同时可使血脂TC、TG、LDL-C水平降低，HDL-C水平升高（P<0.05）。结论益气降浊颗粒可以显著降低血管中miR-21和TGFβRⅡ的表达，益气降浊颗粒可能通过调节miR-21和TGFβRⅡ的表达发挥其稳定斑块的作用。

冠心病 益气降浊颗粒 miR-21 TGFβRⅡ

冠心病（CHD）是心血管疾病中极为常见一类炎性病变，冠状动脉的粥样硬化是其特征之一，严重威胁到人类的生命、健康、以及生活质量。研究发现，microRNA（miRNAs）是一类非编码的单链RNA，其中miR-21与心血管疾病关系密切，而TGFβRⅡ同时作为其靶基因，深受学者广泛关注。多项研究证实，miR-21和TGFβRⅡ的表达与炎症反应［1］及心血管疾病［2-3］方面存在一定的相关性，而炎症与动脉斑块的稳定与否密切相关。近代研究中药干预下对冠心病的治疗取得一定的疗效，前期的临床研究中，益气降浊汤在临床上对于冠心病的治疗已取得成效［4］。本实验通过高脂饲料饮食喂养，构建冠心病痰浊血瘀型家兔，观察血管中血脂、miR-21及TFGβRⅡ的变化情况，意在探究益气降浊颗粒对冠心病（痰浊血瘀型）家兔血管中miR-21及TFGβRⅡ的影响，通过抑制miR-21及TFGβRⅡ的表达，明确中药制剂对冠心病的疗效，进一步探索益气降浊颗粒是否有稳定斑块的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 常规喂养2周的4～5月龄健康新西兰大白兔30只，雄性，清洁级，体质量3.0～3.8 kg，平均（3.27±1.35）kg，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。 动物生产许可证号：SCXK（2015）-0026。

1.2 试药仪器 益气降浊颗粒由黄芪、苦参、当归、莪术、川芎药物组成，由黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室制备。miR-21和TGFβRⅡ的引物，来自上海生物工程有限公司；兔免疫组化试剂盒，（批号030403），来自北京博奥森公司；胆固醇（TC）、甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 测定试剂盒 （批号分别为111221，114751，110421，113753），由中北北控生物科技股份有限公司提供。

1.3 分组与给药 将30只兔分为两组，一组10只喂养普通饲料为空白组作对照；另一组20只持续喂养8周高脂饲料 （配方：胆固醇1%，蛋黄粉15%，猪油15%，基础饲料79%），构建冠心病痰浊血瘀模型。造模过程中，1只兔死于感染。造模成功后，将19只兔随机分为模型组9只、中药组10只。中药组以益气降浊颗粒溶于150 mL生理盐水灌胃2周，同时模型组以等容积的生理盐水灌胃，实验结束后气体栓塞法处死动物。给药过程中，1只兔（中药组）意外猝死。

1.4 标本采集与检测 血浆中血脂指标（TC，TG，LDLC，HDL-C），从实验开始进行检测，第8周再测一次，发现模型组相关血脂水平平均达到正常组的6～10倍，预测造模成功，实验第10周，对3组兔颈动脉插管进行取血，观察血脂、miR-21及TGFβRⅡ的表达。取血成功后，继续抽血待兔血液抽尽，剖腹，取出定位并分离主动脉弓，取主动脉弓3、4、5段行miR-21及TGFβRⅡ的荧光定量PCR检测。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用成组 t检验，PCR 数据以Pearson法进行分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 空白组与模型组第8周血脂水平比较 见表1。与空白组比较，模型组TC、TG、LDL-C水平明显升高，HDL-C水平明显降低 （P＜0.05），差异具有统计学意义，提示造模成功。

表1 空白组与模型组第8周血脂水平比较（mEq/L，±s）

表1 空白组与模型组第8周血脂水平比较（mEq/L，±s）

与空白组比较，△P<0.05。

组别 n TC TG HDL-C LDL-C空白组 10 2.57±2.15 0.67±0.41 1.75±0.49 1.62±1.21模型组 19 30.17±6.31△ 1.73±1.15△ 0.71±0.61△ 18.65±5.08△

2.2 各组治疗2周后血脂变化及miR-21、TGFβRⅡ表达水平比较 见表2。与空白组比较，模型组TC、TG、LDL-C的指标明显升高，HDL-C明显降低 （P＜0.05）；与模型组比较，中药组 TC、TG、LDL-C 水平明显降低，HDL-C 水平明显升高（P＜0.05）。

表2 各组治疗2周后血脂变化及miR-21、TGFβRⅡ表达水平比较（±s）

与空白组比较，△P＜0.05；与中药组比较，▲P＜0.05。

组 别 n TC（mEq/L） TG（mEq/L） HDL-C（mEq/L）LDL-C（mEq/L）miR-21 TGFβRⅡ空白组 10中药组 9 2.79±1.96 0.87±0.62 1.93±0.54 22.16±5.24 1.47±1.26 1.08±0.69 1.49±1.37 15.36±5.74 20.15±10.52 0.08±0.05 51.21±15.48 0.13±0.04模型组 9 32.59±8.58 1.93±1.31 0.57±0.59 27.28±8.45 80.42±32.21 0.20±0.08

2.3 各组miR-21及TGFβRⅡ的表达水平比较 见表2。与空白组比较，模型组miR-21、TGFβRⅡ的表达水平明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，中药组miR-21、TGFβRⅡ的表达水平明显降低（P＜0.05）。 miR-21和TGFβRⅡ的相关性研究：行Pearson相关分析，统计结果为r=-0.564，P＜0.05，有统计学意义。

3 讨 论

冠心病在中医范畴属“胸痹”，属于本虚标实之证，主要病机为心脉瘀阻，其痰浊血瘀证型逐渐占领冠心病致病因素的主导，成为临床重要证型之一［5-6］。近年越来越多的中药制剂对动脉粥样硬化的疗效显著［7-9］。笔者曾运用益气降浊汤改善冠心病的心肌缺血症状［10］，尤其是痰瘀互结的胸痹心痛取得较好疗效。益气降浊颗粒由益气降浊汤变换剂型而来。此颗粒制作简单，易于服用，价格低廉。益气降浊颗粒由黄芪、苦参、当归、莪术、川芎组成，其中黄芪补脾益气为君，气行则营卫和，莪术破血行气，苦参清利痰湿，川芎辛散温通，燥湿行气，与苦参相合，活血祛瘀止痛共为臣药，再佐以当归养血活血，亦有防莪术破血伐气之力太过之功效。诸药配伍，使痰饮化，瘀血散，脉道畅，胸阳展，从而能够明显改善冠心病 （痰浊血瘀型）所引起的心脏不适症状。现代药理研究显示，黄芪具有抗氧化作用，抑制炎症反应［11］；苦参能够明显改善高脂血症的水平［12］；川芎具有抑制炎症反应，改善脂质代谢，稳定斑块等作用［13］；莪术具有抗炎抗氧化、抗动脉硬化的作用［14］。

多项研究显示，冠心病的发病机制为动脉粥样硬化，动脉粥样硬化与 miR-21、TGFβRⅡ息息相关［15-16］，miR-21具有调控基因的表达，改善动脉的粥样硬化，而miR-21和TGFβRⅡ同时参与调节细胞生长、分化、增殖、凋亡等变化过程，与心血管疾病的演变密切相关［17］，在炎症和免疫反应调节等方面也被认为发挥了重要作用［18］，同时冠心病又是一种炎症病变，在其演变过程中，miR-21和TGFβRⅡ分子水平出现了异常的升高。相关资料显示，通过抑制miR-21和TGFβRⅡ的表达，可纠正炎性病变，调控心肌细胞，从而改善冠心病冠脉的病变程度［19］。经调查得知，miRNA与冠心病的发生发展密切相关，但在中医证候类型上却少有研究［20］。本实验从冠心病（痰浊血瘀型）家兔模型着手，建立其近似于临床冠心病的病理学改变。研究表明，miR-21和TGFβRⅡ参与了动脉粥样硬化的过程，在炎性细胞、心肌细胞中存在不同程度的表达。本实验数据显示，中药组与模型组比较，miR-21和TGFβRⅡ表达显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），从而证明益气降浊颗粒能显著降低兔血浆中miR-21、TGFβRⅡ的水平。

因此，益气降浊颗粒对于冠心病家兔血管中miR-21和TGFβRⅡ表达有显著的降低作用，尤其是对痰浊血瘀型冠状动脉病变有明显的疗效。同时益气降浊颗粒能够改善冠心病斑块中的脂质水平，调控炎症反应过程，进而对稳定斑块有一定的作用。然而当代对血管中miR-21和TGFβRⅡ的表达抑制，采用中医药治疗方案却少有报道，这很有可能成为未来临床治疗冠心病的又一研究方向。

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Effect of Yiqi Jiangzhuo Granule on Expression of miR-21 and TGFβRⅡ in Coronary Heart Disease Rabbits with Phlegm and Blood Stasis Type

WANG Yingwei，LIU Lei，ZHANG Yao，et al. The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Heilongjiang，Harbin 150040，China.

Objective：To investigate the effect of Yiqi Jiangzhuo Granule on the expression of microRNA-21（miR-21） and TGFβRⅡ mRNA in coronary heart disease rabbits with phlegm and blood stasis type.Methods：The rabbit model of coronary heart disease with phlegm and blood stasis was selected as the study objects.The expression of miR-21 and TGFβRⅡ mRNA in the blood vessels was observed by fluorescence quantitative PCR.Results：The expression of TGFβRⅡ was significantly correlated with miR-21 in the blank group，Chinese medicine group and the model group （r=-0.564P＜0.05），and the expression of TGFβRⅡ in the atherosclerosis model group reduced more significantly than that in the model group.The levels of TC，TG and LDL-C were decreased and HDL-C was increased （P<0.05）.Conclusion：Yiqi Jiangzhuo Granule can significantly reduce the expression of miR-21 and TGFβRⅡ in the blood vessel，and Yiqi Jiangzhuo Granule may play its role as a stable plaque by regulating the expression of miR-21 and TGFβRⅡ.

CHD；Yiqi Jiangzhuo Granule；miR-21；TGFβRⅡ

R285.5

A

1004-745X（2017）11-1919-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.11.011

黑龙江省自然科学基金（H201460）；黑龙江中医药大学研究生创新科研项目

△通信作者（电子邮箱：13836113901@163.com）

2017-08-09）