PCR检测泸州地区男性STD患者感染EB病毒

陈明+颜丹+赵家兰+卿晟+黄文才

【摘要】 目的 了解瀘州地区门诊男性性传播疾病（STD）患者生殖道感染EB病毒的现况。方法 采用聚合酶链反应（PCR）技术检测328例门诊男性STD患者生殖道EB病毒感染情况。结果 328例男性STD患者中， 有86例检出EB病毒， 其阳性检出率为26.22%（86/328）。在86例EB病毒感染患者中， 单纯感染EB病毒者14例， 占16.28%（14/86）；混合感染者72例， 占83.72%（72/86）。混合感染者中， 合并一种STD病原体（淋球菌、支原体、衣原体、人乳头瘤病毒）阳性者35例， 占48.61%（35/72）；合并两种STD病原体（淋球菌+支原体、淋球菌+衣原体、淋球菌+人乳头瘤病毒、支原体+衣原体、支原体+人乳头瘤病毒、衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者17例， 占23.61%（17/72）；合并三种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体、支原体+衣原体+人乳头瘤病毒、淋球菌+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者13例， 占18.06%（13/72）；同时合并四种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者7例， 占9.72%（7/72）。结论 泸州地区男性STD患者对EB病毒具有易感性， 用PCR技术进行检测具有简便、快捷、准确、特异性强的特点， 检测的结果可作为诊断生殖道感染EB病毒的依据。

【关键词】 泸州地区；聚合酶链反应；男性；性传播疾病；EB病毒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.31.016

【Abstract】 Objective To understand the status of EB infection in reproductive tract infections in male outpatients with sexually transmitted diseases （STD） in Luzhou area. Methods Polymerase chain reaction （PCR） technique was used to detect the infection status of genital EB virus in 328 male outpatients with STD. Results Among 328 male STD patients， there were 86 cases with EB virus， with positive rate as 26.22% （86/328）. Among the 86 patients with EB infection， there were 14 cases with EB virus， accounting for 16.28% （14/86）， 72 cases with mixed infection， accounting for 83.72% （72/86）. Among the mixed infected patients， 35 cases were combined with one kind of positive STD pathogen （Neisseria gonorrhoeae， Mycoplasma， chlamydia， human papillomavirus）， accounting for 48.61% （35/72）， 17 cases were combined with two kinds of positive STD pathogens （Neisseria gonorrhoeae + mycoplasma， Neisseria gonorrhoeae + chlamydia， Neisseria gonorrhoeae + Human papillomavirus， Mycoplasma + chlamydia， Mycoplasma + human papillomavirus， chlamydia + human papillomavirus）， accounting for 23.61% （17/72）， 13 cases were combined with three kinds of positive STD pathogens （Neisseria gonorrhoeae + mycoplasma + chlamydia， mycoplasma + chlamydia + human papilloma virus， Neisseria gonorrhoeae + chlamydia + human papillomavirus）， accounting for 18.06% （13/72）， 7 cases were combined with four kinds of positive STD pathogens （Neisseria gonorrhoeae + chlamydia + human papillomavirus）， accounting for 9.72% （7/72）. Conclusion The male STD patients in Luzhou area are susceptible to EB virus， and the detection of PCR is simple， fast， accurate and specific. The detection results can be used as basis of for EB virus diagnosis of genital tract infection EB virus.

【Key words】 Luzhou area； Polymerase chain reaction； Male； Sexually transmitted diseases； EB virusendprint

上个世纪60年代Epstein和Barr发现EB病毒是一种人类疱疹病毒， 是一种嗜B细胞的人疱疹病毒， 可感染上皮细胞、可侵犯B细胞[1， 2]。最近数年来已逐渐开始有报道有关生殖泌尿道EB病毒感染的病例[3]。EB病毒可以感染生殖泌尿道的上皮细胞、B淋巴细胞和口腔上皮细胞[4， 5]。为了进一步了解四川泸州地区门诊就医的男性STD患者感染EB病毒的现况， 本地区四家医院的医务人员于2016年

6月～2017年6月总共收集了门诊328例男性STD患者的标本， 采用PCR技术对这些标本进行检测， 现就将检测结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 标本于2016年6月～2017年6月采自西南医科大学附属院皮肤性病科、泌尿外科、妇产科， 泸州第二人民医院皮肤性病科， 泸州纳溪区人民医院皮肤性病科， 泸州纳溪区中医医院皮肤性病科及妇产科， 一共收集来自上述医院性病门诊就诊的328例男性STD患者的标本， 患者年龄12～56岁， 平均年龄28.6岁；病程9～28 d。

1. 2 方法 采用PCR技术检测328例门诊男性STD患者生殖道EB病毒感染情况。

1. 2. 1 取材方法 用消毒棉签插入男性尿道1.0～1.5 cm处取材， 将所取标本浸在含内装生理盐水的试管里， 待检。

1. 2. 2 试剂 PCR检测试剂盒是美利坚合众国森特公司的产品， 检测的引物按EBNA-1顺序设计， 序列如下。

EB-A：5′GT CATC AT CA TC CG GG TC TC3′EB-B：5′TT CG GG TT GG AA CC TC CT TG3′扩增产物片段为269 bp。

1. 2. 3 模板DNA的扩增 按操作规程将引物、模板DNA、Tag酶等放入FR-900DNA扩增仪中进行反应， 经变性、退火、延伸共进行35个循环可得到产物。

1. 2. 4 结果判断标准 以2%琼脂糖凝胶对扩增的产物进行电泳分析， 用溴乙淀进行染色， 在紫外灯下观察， 如果有扩增带为阳性。

2 结果

328例男性STD患者中， 有86例检出EB病毒， 其阳性检出率为26.22%（86/328）。在86例EB病毒感染患者中， 单纯感染EB病毒者14例， 占16.28%（14/86）；混合感染者72例， 占83.72%（72/86）。混合感染者中， 合并一种STD病原体（淋球菌、支原体、衣原体、人乳头瘤病毒）阳性者35例， 占48.61%（35/72）；合并两种STD病原体（淋球菌+支原体、淋球菌+衣原体、淋球菌+人乳头瘤病毒、支原体+衣原体、支原体+人乳头瘤病毒、衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者17例， 占23.61%（17/72）；合并三种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体、支原体+衣原体+人乳头瘤病毒、淋球菌+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者13例， 占18.06%（13/72）；同时合并四种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者7例， 占9.72%（7/72）。

3 讨论

EB 病毒是在上个世纪60年代科学家Epstein和Barr在进行儿童恶性淋巴瘤病因病理的探索过程中， 从这些患病儿童的恶性淋巴瘤组织中培育瘤细胞时发现的一种病毒[6-8]。有许多的权威文献报道， EB病毒与Burkitts淋巴瘤、鼻咽癌、机体免疫力下降致某些淋巴增生性疾病密切关联[9-12]。近些年来陆续有报道一些STD患者泌尿生殖道感染EB病毒病例[13-16]。但是， 目前少有文献报道关于泌尿生殖道感染EB病毒的感染途径、感染后的临床表现、有关检测EB病毒的方法及手段等。为了更加深入了解EB病毒在门诊男性STD患者生殖泌尿道中的感染现状， 本地区四家医院的医务人员采用特异性强、敏感性好、快捷、简便的PCR技术对328例男性STD患者进行检测， 结果显示， 328例男性STD患者中， 有86例检出EB病毒， 其阳性检出率为26.22%（86/328）。在86例EB病毒感染患者中， 單纯感染EB病毒者14例， 占16.28%（14/86）；混合感染者72例， 占83.72%（72/86）。混合感染者中， 合并一种STD病原体（淋球菌、支原体、衣原体、人乳头瘤病毒）阳性者35例， 占48.61%（35/72）；合并两种STD病原体（淋球菌+支原体、淋球菌+衣原体、淋球菌+人乳头瘤病毒、支原体+衣原体、支原体+人乳头瘤病毒、衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者17例， 占23.61%（17/72）；合并三种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体、支原体+衣原体+人乳头瘤病毒、淋球菌+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者13例， 占18.06%（13/72）；同时合并四种STD病原体（淋球菌+支原体+衣原体+人乳头瘤病毒）阳性者7例， 占9.72%（7/72）。通过患者临床表现及各种特征发现， 已经感染了EB病毒的患者， 都有各种各样不同程度的分泌物增多、泌尿生殖道不适、疼痛感等现象， 说明EB病毒完全可以在生殖泌尿道产生病变。另外， 从检测的结果可知， 在已经感染了EB病毒的患者中， EB病毒混合在其他性病感染患者所占比例较大， 这显示， 已患性病的患者对EB病毒具有明显的易感性， 医务人员要加强对STD患者的监测， 及时对就诊的STD患者进行EB病毒的检测、监控和治疗。

总之， 泸州地区男性STD患者对EB病毒具有易感性， 用PCR技术进行检测具有简便、快捷、准确、特异性强的特点， 检测的结果可作为诊断生殖道感染EB病毒的依据。

参考文献

[1] 陆德源. 医学微生物学. 第5版. 北京：人民卫生出版社， 2001：321-322.

[2] 周维康， 李桂明， 吴音， 等. 生殖器部位EB病毒亚临床感染的检测. 中华皮肤科杂志， 2003， 36（5）：283.endprint

[3] Sixbey JW， Davis DS， Young LS， et al. Human epithelial cell expression of an Epstein-Barr virus receptor. Journal of General Virology， 1987， 68 （Pt 3）：805.

[4] 王凯， 王超， 王红. EB病毒感染相关性疾病患者免疫功能变化研究进展. 山东医药， 2015（43）：101-103.

[5] Bevan IS， Blomfield PI， Johnson MA， et al. Oncogenic viruses and cervical cancer. Lancet， 1989， 1（8643）：907-908.

[6] 徐子刚， 徐教生. Epstein-Barr病毒感染及相关皮肤疾病. 中国医学文摘（皮肤科学）， 2017（1）：55-64.

[7] 胡超苏. 郭哗教授谈淋巴瘤 EB病毒感染≠鼻咽癌. 抗癌， 2016（2）：24-25.

[8] 甘璐， 陈浩. EB病毒相关性皮肤淋巴瘤及淋巴组织增殖性疾病. 国际皮肤性病学杂志， 2016， 42（6）：464-467.

[9] 黄志卓， 张乐萍， 谢正德. EB病毒感染相关疾病的基因缺陷研究进展. 中华實用儿科临床杂志， 2016， 31（22）：1696-1699.

[10] 闫子勋， 赵维莅. EB病毒相关miRNA与淋巴瘤进展. 诊断学理论与实践， 2012， 11（2）：186-190.

[11] 黄海城. EBV感染相关的猪鼻咽癌模型的构建. 南方医科大学， 2014.

[12] 陈越， 王建国， 孙午. 静脉血和鼻咽分泌物EB病毒DNA检测结果的比较. 实验与检验医学， 2012， 30（5）：498-499.

[13] 颜丹， 李燎， 颜海婴， 等. 聚合酶链反应检测门诊STD患者泌尿生殖道EB病毒感染的实验研究. 现代预防医学， 2007， 34（10）：1840.

[14] 李燎， 颜丹， 钟桂书. STD门诊人群中EB病毒感染及其与性行为关系的调查. 泸州医学院学报， 2007， 30（4）：290-292.

[15] 李燎， 颜丹， 钟桂书. 156例泌尿生殖道EB病毒感染患者的临床分析. 泸州医学院学报， 2005， 28（4）：342.

[16] 颜丹， 李燎， 颜海婴， 等. 门诊女性STD患者感染EB病毒PCR检测结果分析. 中国妇幼保健， 2007， 22（24）：3407-3408.endprint