一例松鼠猴感染乳酸明串珠菌的诊断报告

张志忠 王 瑞 聂 睿 郭 浩 殷冬冬 王桂军

(1.合肥野生动物园，合肥，230031；2.安徽农业大学动物科技学院，合肥，230036)

一例松鼠猴感染乳酸明串珠菌的诊断报告

张志忠1王 瑞2聂 睿2郭 浩2殷冬冬2王桂军2

(1.合肥野生动物园，合肥，230031；2.安徽农业大学动物科技学院，合肥，230036)

2014年9月，合肥野生动物园发生一起松鼠猴感染乳酸明串珠菌的病例。病猴出现咳嗽，流鼻涕，发热等症状。病程较快，观察到上述症状后即死亡。剖检时发现肺脏瘀血，肠壁有大小均一的黑点。从病死猴的肝脏分离到一株细菌，纯分后发现菌落形态为细小灰白色，表面光滑，呈透镜状，边缘整齐无皱褶。革兰氏染色后镜检发现为革兰氏阳性球菌，经过细菌16S rRNA PCR扩增和测序比对，确诊为乳酸明串珠菌感染。

松鼠猴；乳酸明串珠菌；感染

乳酸明串珠菌(Leuconostoclactis)属于链球菌科(Streptococcaceae)，明串珠菌属，存在于植物表面，常用于青贮、泡菜和果酒中。一般认为乳酸明串珠菌对人和动物没有致病性[1]。但自1984年，Shlaes 等首次证实明串珠菌为条件致病菌，可导致人类的感染，此后陆续有明串珠菌导致人感染的报道[2]，但国内很少有动物感染乳酸明串珠菌的报道。2014年9月合肥野生动物园松鼠猴(Saimirisciureus)出现死亡，另发现一些松鼠猴出现咳嗽、流鼻涕等症状，临床观察和病理变化并结合实验室诊断，确诊为乳酸明串珠菌感染。现将该病例的诊断情况报告如下。

1 材料和方法

1.1 病料来源

合肥野生动物园病死松鼠猴。

1.2 主要试剂和引物

DL2000Marker、TaqDNA聚合酶、dNTPs、ddH2O、EB等均购自生工生物工程(上海)股份有限公司，药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司，16S rRNA引物分别为：16SF(5’-AGATTTGATCCTGGCTCAG-3’)，16SR(5’-CTACGGCTACCCTGTTACGA-3’)，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3 细菌分离与鉴定

1.3.1 细菌分离与纯化

无菌操作取病死猴肝脏、脾脏、肺脏接种于血液琼脂培养基上，37℃培养24 h，挑取单菌落接种于辅酶培养基，37℃条件下，培养24 h，进行纯化培养。

1.3.2 细菌染色镜检

挑取单个菌落进行革兰氏染色，在光学显微镜下进行观察。

1.3.3 细菌DNA的提取

挑取单菌落接种于TSB液体培养基于37℃培养18 h，从菌液中提取细菌DNA。

1.3.4 细菌16S rRNA的序列测定与分析

以提取的DNA样本作为模板，使用细菌16S rRNA引物进行扩增，PCR反应体系为25 μL，分别含TaqMix12.5 μL，模板5 μL，上下游引物各1 μL，加水补足至25 μL。反应条件为95℃预变性5 min，95℃变性1 min，56℃退火1 min，72℃延伸2 min，共进行35个循环，最后72℃延伸10 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，将产物送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

1.3.5 药敏试验

采用纸片法，按照试剂使用说明书进行药敏试验。

2 结果

2.1 剖检结果

剖检发现肺脏瘀血(图1)，肠壁有大小均一的黑点(图2)。

2.2 细菌纯化与镜检结果

细菌纯化培养后发现菌落为灰白色细小菌落，表面光滑呈透镜状，边缘整齐无皱褶。挑取菌落涂片，革兰氏染色后在显微镜下观察，发现为G+球菌，呈长链状排列，似乳杆菌(图3)。

图1 肺脏瘀血Fig.1 Lung congestion

图2 肠壁有大小均一的黑点Fig 2 Black spots of uniform size on intestinal wall

图3 显微镜下细菌形态(×1 000)Fig.3 Microscopic morphology of bacteria(×1 000)

2.3 细菌16S rRNA的PCR扩增和测序结果

细菌16S rRNA的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，可见长度约为1 500 bp的特异条带，与预期条带大小相符合(图4)。

2.4 序列分析结果

将所得菌株的16S rRNA基因序列在NCBI上用BLAST进行同源性比较，结果与Leuconostoclactisqz-253(乳酸明串珠菌qz-253株，登录号：AB904777.1)等乳酸明串珠菌的基因同源性达93%，据此，该病例可确诊为乳酸明串珠菌感染。

PCR产物的测序结果如下：

图4 细菌16S rRNA PCR产物电泳图Fig.4 Electrophorogram of bacterial 16S rRNA PCR products注：M.DNA Maker DL2 000；1.细菌PCR产物 Note：M.DNA Maker DL2 000；1.bacterial PCR products

2.5 药敏试验结果

药敏试验结果表明乳酸明串珠菌对先锋4号，先锋5号、头孢呋辛、左氧氟沙星、头孢噻肟、青霉素、复方新诺明、大观霉素、氨苄西林高度敏感；对庆大霉素、卡那霉素、链霉素中度敏感；对万古霉素耐药。

3 讨论

自Buu-Hoï等于1985年首次报道第一例人感染肠膜明串珠菌起[3]，国内外陆续报道过明串珠菌相关感染病例，如明串珠菌致败血症并发脑脓肿[4]；明串珠菌致感染性休克[5]等。在2014年翁绳凤等报道了国内一例人感染乳酸明串珠菌的报道，患者的临床症状大致相同，存在高热、咳嗽等症状且相关研究表明，明串珠菌的感染情况常发生于使用万古霉素治疗感染时期，以及机体免疫能力低下的时期[6]。而在动物中尚未见到乳酸明串珠菌感染的报道。此次合肥野生动物园发生松鼠猴感染乳酸明串珠菌，说明乳酸明串珠菌对动物也可能存在感染力。目前，国内外尚无乳酸明串珠菌感染后应用抗菌药物治疗的标准。乳酸明串珠菌感染后的治疗多是根据药敏试验结果和最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)来选择用药方案[7]。针对此次松鼠猴感染乳酸明串珠菌，应根据药敏试验结果用药，同时在用药过程中要严密监控猴群的情况，发现不良反应及时查找原因，调整治疗方案。另一方面，要做好动物园动物卫生防疫工作，改善动物的饲养环境和营养，并切实完善饲养环境的定期消毒制度等。

[1] Buchanan R E，Gibbons N E.伯杰细菌鉴定手册[M].8版.北京：科学出版社，1984：702-705.

[2] Shlaes D M，Marino J，Jacobs M R.Infection caused by vancomycin resistantStreptococcussanguisⅡ[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1984，25(4)：527-528．

[3] Buu-Hoï A，Branger C，Acar J F.Vancomycin-resistant streptococci orLeuconostocsp.[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1985，28(3)：458-460.

[4] 韦义军，龙苹.明串珠菌败血症并发脑脓肿一例[J].中华儿科杂志，2007，45(10)：768-769.

[5] 鲍文韬，孙建玲，于亮.明串珠菌致感染性休克一例并相关文献复习[J].中华实验和临床感染病杂志：电子版，2012，6(5)：469-470.

[6] 翁绳凤，康丽军.肠膜明串珠菌血流感染1例[J].中国感染控制杂志，2014，13(2)：123-125.

[7] 尹秀云，陈建魁，牟兆钦，等.明串珠菌所致菌血症报告一例报告[J].军事医学科学院院刊，2001，25(3)：239-240.

LeuconostoclactisInfection in Captive Squirrel Monkeys

Zhang Zhizhong1Wang Rui2Nie Rui2Guo Hao2Yin Dongdong2Wang Guijun2

(1.Hefei Wildlife Park，Hefei，230031，China；2.College of Animal Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei，230036，China)

In September 2014，Leuconostoclactisinfection was found in squirrel monkeys at the Hefei Wildlife Park.Sick monkeys showed symptoms of cough，runny nose，and fever.The course of the infection was short and monkeys died quickly after these symptoms were observed.At necropsy，we found lung congestion and uniform-sized black spots on the intestinal wall.After screening and purifying bacteria isolated from the liver of dead monkeys，we found the pure colony was small，gray white，smooth-faced，lens shaped and with neat edges.Gram positive cocci were confirmed by microscopic examination after Gram staining.After bacterial 16S rRNA PCR amplification，sequencing and sequence alignment，the pathogen was confirmed to beLeuconostoclactis.

Squirrel monkey；Leuconostoclactis；Infection

稿件运行过程

2017-01-11

修回日期：2017-02-27

发表日期：2017-08-10

S858.9

A

2310-1490(2017)03-494-04

张志忠，男，44岁，高级兽医师；主要从事野生动物饲养管理和兽医研究。E-mail：1471197690@qq.com