锦州市手足口病毒核酸检测结果分析

杨飞

摘要：目的 分析锦州市手足口病病原学检测结果，为临床手足口病防治提供依据。方法 选取100例2015年锦州市临床临床诊断为手足口病病例的咽拭子标本，提取样本核酸，用RT-PCR方法检测柯萨奇病毒A16型（CA16）、肠道病毒71型（EV71）、和非EV71、CA16的其他肠道病毒（EV）。结果 2015年3～12月份共采集手足口病病例标本100份。核酸检测结果显示，阳性标本86例（86.00%）；在2015年3～12月均有手足口病患者出现，3～5月份病例数急剧增加，5月份为最高峰，阳性检出率为45.35%，6～12月份病例数逐渐下降；男孩核酸检测阳性率显著高于女孩（P<0.05）；在不同年龄组之间，1岁组，EV71、EV阳性数构成比均为年龄组中最高。结论 锦州市2015年3～12月份均有手足口病发生，病原以EV71感染为主，在不同月份、年龄、性别上发病率存在一定差异。

关键词：手足口病；柯萨奇病毒A16型；肠道病毒71型

中图分类号：R440 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）21-0184-02

Analysis of Nucleic Acid Test Results of Hand-Foot-Mouth Virus in Jinzhou City

YANG Fei

（Jinzhou Disease Prevention and Control Center，Jinzhou 121000，Liaoning，China）

Abstract：Objective To analyze the results of hand foot mouth disease in Jinzhou city，provide the basis for clinical prevention and treatment of HFMD.Methods 100 cases of clinical diagnosis in Jinzhou city in 2015 HFMD cases of throat swab specimens，samples of nucleic acid，RT-PCR was used to detect Coxsackie virus type A16（CA16），enterovirus 71（EV71），and non EV71，other intestinal virus CA16（EV）.Results From March to December in 2015 were collected 100 samples of HFMD cases.Nucleic acid detection results showed that the positive specimens of 86 cases （86.00%）；From March to December in 2015，there were hand，foot and mouth disease patients，the number of cases increased from March to May，the highest peak in May，the positive detection rate was 45.35%，from June to December the number of cases were decreased；the positive rate of boys was significantly higher than that of nucleic acid detection girl（P<0.05）；among different age groups，1 years old group，EV71，the constituent ratio were the highest in EV age group.Conclusion Hand foot mouth disease occurred in Jinzhou from March to December in 2015.The main cause of infection was EV71 infection，and there were some differences in age，sex and incidence in different months.

Key words：Hand，foot and mouth disease；Coxsackie virus A16；Enterovirus 71 type

手足口病是多種病毒引起的，患者主要表现为皮疹或疱疹，发病部位集中在手、足、口臀部位。手足口病是一种自限性疾病，一般可在7 d内痊愈，但少部分患儿病情严重可出现心肌炎、脑膜炎等合并症，病死率较高。研究指出[1]，引起手足口病的主要病原为CA16、EV71。近年来，锦州市手足口病发病率不断上升，为掌握锦州市手足口病病原学及特点，本研究中对锦州市100例临床诊断病例标本进行EV71和CA16核酸检测，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取100例2015年3～12月份锦州市临床临床诊断为手足口病病例的咽拭子标本，其中女44例，男56例，年龄6个月～7岁。标本为患者咽喉部分泌液或疱疹液，将标本置于Hanks病毒采样管， 剧烈震荡10 min，3000 rpm离心30 min，取上层清液提取核酸，若不能即时检测则保存在-20 ℃冰箱内。

1.2方法

按照卫生部手足口病预防控制指南要求，采用RT-PCR方法检测患者咽拭子标本中病原核酸。

1.3主要试剂及以期

RNA提取试剂盒：瑞士Roche公司，Roche High Pure Viral RNA Kiit；荧光定量PCR试剂盒：中山达安基股份有限公司，Coxsackievirus virus A1 6 real time RT-PCR kit，Enterovirus type71 realtime RT-PCR kit；美国ABI，Stepone-PlusTM Real-Time PCR System。endprint

1.4病毒核酸检验

试剂盒说明操作进行病毒RNA提取；Real Time RT-PCR扩增预混合试剂操作按说明书进行，反应条件有：逆转录及预扩增：40 ℃，25 min，90 ℃，3 min；扩增：93 ℃，15 s，55 ℃，45 s，共40个循环。Ct≤34.9，且样品FAM通道有明显扩增曲线为阳性[2]。

1.5统计学处理

采用SPSS15.0软件分析及处理数据，以百分比（%）表示计数资料，组间比较以？字2检验，当P<0.05，具有统计学意义。

2结果

2.1核酸检测结果分析

2015年3～12月份共采集手足口病病例标本100份。核酸检测结果显示，阳性标本86例（86.00%），其中普通病例样本81例，重症样本5例。其中，EV71阳性标本数64份，阳性率为74.40%，重症样本4例，占重症阳性的80.00%；其次为其他肠道病毒（EV）阳性数18例，阳性率为20.90%，最后为CA16，检出阳性标本4例，阳性率为4.70%，1例为重症样本，占重症阳性的20.00%。

2.2不同性别、年龄核酸检测结果分析

86份阳性病例标本中，女孩病例28例（32.60%），男孩病例58例（67.40%），男孩核酸检测阳性率显著高于女孩（P<0.05）。在不同年龄组之间，1岁组，EV71、EV阳性数构成比均为年龄组中最高，2岁年龄，CA16阳性率高于其他年龄组，其次为EV和EV71，低于1岁组，但较其他年龄组要高，见表1。

2.3不同月份核酸检测结果

在2015年3～12月均有手足口病患者出现，其中3～5月份病例数急剧增加，5月份为最高峰，5月份阳性检出率为45.35%，6～12月份病例数逐渐下降，9月份时稍有升高，但总体呈下降趋势，见表2。

3讨论

目前手足口病流行较普遍，主要在亚洲地区流行，已成为严重的公共社会问题。准确对手足口流行的病毒进行检测，可对手足口病的预防与治疗提供指导意义。采用实时荧光定量RT-PCR检测手足口患者粪便中或咽拭子中的病原体，每份标本都是单管封闭式扩增检测，使标本间交叉感染的风险大大降低，且操作方便简便，能够快速地发出报告[3-4]。通过实验室检测结果来看，2015年引起本市手足口病的肠道病毒以EV71为主，其次为CA16；而在5例重症病例中EV71阳性4例，占重症总阳性的80%，显示重症病例以EV71病毒感染为主，表明该病毒传染性强，致病率高，患儿病情进展快，易引起神经毒性，可侵犯心、脑、肺等重要器官，患儿死亡率高。

手足口病四季均口发病，但冬季发病较少，最易发病季节为春末夏初。本研究显示，2012年本市3～12月均有发病，发病月份以5分月为最高峰，至7份以后发病逐渐下降，但仍以EV71引起的感染为主。在男女比例上，男孩发病明显高于女孩，与该病主要经粪-口和呼吸道飞沫传播，并且污染的手、日常用品和食品均会传播病毒，而男孩相对好活动，使传染的几率大大增加。从年龄上看，1岁组，EV71、EV阳性数构成比均为年龄组中最高，2岁年龄，CA16阳性率高于其他年龄组，其次为EV和EV71，低于1岁组，但较其他年龄组要高，可见1～2岁仍是手足口病的高发年龄段，其原因为此阶段儿童对病毒的防御能力相对较差，故发病率较高，因此需要特别加强对该年龄段儿童手足口病病原的检测，以便能够早期发现病例，并采取隔离措施，以防疾病进一步传播。因此，锦州市手足口病2015年3～12月份都有病例发生，肠道病毒仍以EV71为主，主要发病人群分布于1～2岁年龄段，且5～6月份为手足口的发病高峰期。手足口病患儿感染后不能得到终生免疫，且再次发病的几率仍较高。而目前尚无此病防御疫苗，因此应加强对手足口病的预防和治疗。提高实验室病毒检出率，并有效鉴别诊断RV71感染病例，有助于临床选择临床治疗方案，可有效减少重症和死亡病例[5]。

综上所述，锦州市2015年3～12月份均有手足口病发生，病原以EV71为主，在不同月份、年龄、性别上发病率存在一定差異。

参考文献：

[1]陈国清，邵荣标，王海燕，等.2010年盐城地区手足口病例肠道病毒型别调查[J].江苏预防医学，2012，23（2）：21-22.

[2]滕淑，赵仕勇，韦翊，等.手足口病患儿大便中病毒核酸检出时间观察[J].中华儿科杂志，2013，51（10）：787-792.

[3]龙辉，谢建红.单管多重RT-PCR检测肠道病毒核酸及其临床应用[J].国际检验医学杂志，2016，37（11）：1497-1499，1502.

[4]邱宝强，颜云盈，李梅，等.重症手足口病180例病原学检测及肠道病毒71型基因特征分析[J].广西医学，2016，38（4）：482-485.

[5]孙景異，王晨，高秀媛，等.2010-2011年西城区（南区）手足口病原监测结果分析[J].国际病毒学杂志，2012，19（4）：165-167.

编辑/雷华endprint