人类嗜T淋巴细胞病毒抗体ELISA试剂盒使用期间稳定性评价*

杨俊鸿 代华友 黄霞 骆展鹏 彭楷 何大莉 陈政

·试剂与仪器评价·

人类嗜T淋巴细胞病毒抗体ELISA试剂盒使用期间稳定性评价*

杨俊鸿 代华友 黄霞 骆展鹏 彭楷 何大莉 陈政

目的 对人类嗜T淋巴细胞病毒（HTLV）酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒使用期间的稳定性进行评价，为监测HTLV选择检测试剂提供部分参考。方法 采用变异系数评价4个批次检测抗-HTLV的ELISA试剂盒室内质控结果的批内、日间和批间的差异性，采用箱式图分析批内和日间结果出现极值的情况，评价试剂盒使用期间的批内稳定性、日间稳定性和批间稳定性三方面性能。结果 试剂批内CV=6.5%，无极值出现；4批次试剂日间CV分别为6.8%、7.1%、8.8%和8.6%，有2个批次试剂出现极值，概率分别为3.2%和5.3%；批间CV=8.7%。结论 连续监测室内质控批内、批间和日间结果，能够评价抗-HTLV酶联免疫诊断试剂盒使用期间的批内稳定性、日间稳定性和批间稳定性三方面性能。

人类嗜T淋巴细胞病毒 酶联免疫吸附试验试剂盒 稳定性 评价

HTLV Enzyme-linked Immunosorbent Assays Kit Stability Evaluation

《血站技术操作规程》（2015版）增加了检测“地方性、时限性”输血相关传染病标志物的内容[1]。国家卫生计生委在2015年12月下发通知，在全国范围内开展无偿献血人群HTLV感染监测。本中心承担了重庆市无偿献血人群HTLV感染监测任务。由于目前HTLV抗体（抗-HTLV）不属于国家规定的血液筛查法定检测项目，因此对国内市场上相关的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒还未有性能评价的报道。为此，对中心使用的4个批次检测抗-HTLV的ELISA试剂盒室内质控结果进行分析，评价试剂盒使用期内的批内稳定性、日间稳定性和批间稳定性三方面性能。

材料与方法

1 检测血清 2 U/ml抗-HTLV标准血清（北京康彻思坦，批号201512005）。

2 试剂与仪器 ①抗-HTLV ELISA检测试剂盒（北京万泰生物有限公司，批号：T20160101，T20160502，T20160503，T20160804）；②Xiril全自动加样仪（瑞士）和BEP Ⅲ全自动酶免后处理系统（德国）。

3 检测方法 标准血清和检测试剂盒从保存冰箱取出后在18℃～25℃室温平衡30 min。标准血清充分混匀后，按照试剂说明书参数要求，采用Xiril全自动加样仪加样，BEP Ⅲ全自动酶免后处理系统进行检测。根据说明书提供的公式计算每次检测的Cut off值和S/Co值。

4 批内稳定性评价 在一块酶标板内对一次混匀的标准血清重复进行40孔检测，根据检测结果S/Co值之间的差异性评价试剂盒的批内稳定性。

5 日间稳定性评价 连续收集每一批试剂使用期内每天检测标准血清的结果，对检测结果进行日间差异分析，评价试剂使用期的稳定性。

6 批间稳定性评价 收集4个批次试剂使用期内检测标准血清的结果，比较4批试剂之间的差异性，评价试剂的批间稳定性。

7 统计学处理 将数据录入Excel 2010表格，分别计算批内数据、日间数据和批间数据的均值和标准差（S），根据均值和标准差计算变异系数（CV），以CV作为差异性评价指标，以《血站技术操作规程》规定的精密度要求作为判断依据。采用SPSS 19.0软件对批内结果和日间检测结果以每孔S/Co值作为纵坐标作箱式图，S/Co值＞3倍四分位数间距的为极值[2]，分析出现极值的情况。

结 果

1 批内稳定性评价结果 同一次混匀的标准血清40孔重复检测结果S/Co值、均值、标准差S1和变异系数CV1值见表1；批内检测结果S/Co值的箱式图分析结果显示，所有结果均在3倍四分位数间距范围内，未出现极值，见图1。

2 日间稳定性评价结果 统计4个批次试剂盒使用期内标准血清检测结果，计算得到均值2、标准差S2和变异系数CV2值见表2；图2显示了4个批次试剂盒室使用期间内质控结果的中位数和上、下四分位数以及3倍四分位范围，T20160101和T20160502两个批次试剂未出现极值；T20160503批次试剂在第3天、第33天和第45天出现3个极值；T20160804在第16天和第45天出现2个极值。

表1 批内稳定性评价结果（n=40）

图1 试剂盒批内稳定性箱式图分析结果

表2 日间稳定性评价结果

3 批间稳定性评价结果 统计4个批次试剂使用期内检测标准血清的结果，计算总体均值=4.38，标准差S=0.38，变异系数CV=8.7%。

讨 论

HTLV可以导致感染者出现成人T淋巴白血病、热带痉挛性下肢轻瘫等疾病，该病毒主要通过母婴传播、性传播和输血传播[3]，我国福建宁德地区无偿献血人群HTLV感染率达到0.34%[4]。2016年3～11月对我市30 019份无偿献血者的血液标本进行抗-HTLV监测。试剂稳定性作为试剂性能评价的内容之一，对血液检测结果非常重要，性能稳定的检测试剂是开展血液感染性标志物检测的重要基础。

图2 日间稳定性箱式图分析结果

本研究选用的标准血清含量为2 U/mL，采用本试剂盒检测的S/Co值在4～5，能够较灵敏地反映试剂盒的稳定性[5]。采用同一批号的标准血清作为评价材料，同时对冻存的标准血清每次检测前的复融温度、复融时间、混匀方式和颠倒混匀次数进行严格控制，可以减少材料不均一对检测结果的影响，达到客观评价试剂盒稳定性的目的。

本研究除使用传统的CV值判断试剂稳定性外，还使用了箱式图分析判断检测结果中的极值，结果S/Co值＞3倍四分位数间距时判定为极值。使用CV值判断试剂稳定性可以对试剂的总体稳定性做出评价[6]，箱式图分析能够更敏感地发现试剂在使用过程中出现的某一次检测结果的异常现象[7]。综合两个指标来评价试剂盒在使用过程中的稳定性更加科学、有效。

批内稳定性代表酶标板的孔间差异[8]。本研究同一次混匀的标准血清40孔重复检测结果S/Co值的变异系数CV=4.9%，试剂盒在对标准血清的检测中未出现极值，说明被评价的试剂盒孔间差异较小，具有较好的批内稳定性。试剂盒日间精密度反映试剂的日间稳定性[9]，代表试剂盒在本实验室储存条件和检测条件下维持检测性能的能力。本研究统计4个批次试剂盒使用期内连续检测同一批号标准血清的结果，4批试剂CV值均小于10%，满足常规质控标准。箱式图分析结果中，T20160101和T20160502两个批次试剂没有出现极值；T20160503批次试剂在第3天、第33天和第45天出现3个极值，概率为3.2%；T20160804在第16天和第45天出现2个极值，概率为5.3%。结果说明试剂盒在本实验室的储存条件下能够维持稳定的检测能力，具有较好的日间稳定性。批间稳定性反映试剂盒每批试剂之间的差异，受试剂盒原材料、制备工艺、运输条件等因素的影响[10]。本研究统计4个批次试剂使用期内检测标准血清的结果，总体变异系数CV=8.7%，满足批间差异小于20%的质控标准，说明试剂盒具有较好的批间稳定性。

血站在选择酶免诊断试剂时应以参考品试验为依据，注重试剂的灵敏度、特异性和稳定性[11，12]。本研究结果显示，连续监测室内质控批内、批间和日间结果，能够评价抗-HTLV酶联免疫诊断试剂盒使用期间的批内稳定性、日间稳定性和批间稳定性三方面性能。

1 国家卫生和计划生育委员会，血站技术操作规程，2015.

2 吴瑜燕，高源，邵祝军. 检测百日咳抗毒素免疫球蛋白G的酶联免疫吸附试验试剂盒的稳定性评价[J].中国疫苗和免疫，2013，19（4）：304-307.

3 林铁辉，许海.莆田地区无偿献血人群HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染调查与分析[J].中国输血杂志，2014，27（7）：754-756.

4 徐冬峰，李海华，汤纯柳.宁德市无偿献血人群HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染情况调查[J].中国输血杂志，2 0 1 5，2 8（1）：63-64.

5 段友斌，寸伟.ELISA实验室内质控失控的回顾性分析[J].临床输血与检验，2014，16（1）：72-74.

6 赵欣，任东升，徐丽.两种白喉IgG抗体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的评价[J].中国疫苗和免疫，2008，14（1）：44-47.

7 周月兰，苏武锦.汉佩尔辨识法在酶联免疫吸附试验室内质控中的应用[J].检验医学与临床，2015，12（11）：1555-1556.

8 梁佩贤，梁惠兰，郭如华.血站用部分ELISA试剂的稳定性分析与评价[J].实用预防医学，2014，21（8）：999-1000.

9 陶青，吴炯，潘柏申.抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价[J].检验医学，2004，19（3）：185-187.

10 周静宇.血站用部分国产ELISA试剂批内和批间变异[J].临床输血与检验，2011，13（1）：53-55.

11 葛红卫，王鸿捷，常缨，等．血液检测实验室ELISA试剂的选择评价[J]．中国输血杂志，2004，17（6）：422-423．

12 胡维，陈红，刘春兰.乙肝表面抗原ELISA试剂2次评估结果分析[J].中国输血杂志，2013，26（12）：1268-1269.

R373.9 R446.61

A

1671-2587（2017）05-0510-04

Evaluation of Stability of Enzyme-linked Immunosorbent Assays Kit for Anti-HTLV YANG Jun-hong，DAI Huayou，HUANG Xia，et al. Chongqing Blood Center，Chongqing 400015

【Abastract】 Objective To evaluate the stability of a enzyme-linked Immunosorbent Assays Kit for Anti-HTLV，and to provide references for choosing Anti-HTLV ELISA kits which used in blood screening. Methods Coefficient of variation was used toevaluate intra-assay variation，day-assay variation and inter-assay variation of 4 Lot Numbers. Boxtype diagram was used to analyze extreme value. Results The intra-assay variation was 6.5%，none extreme value in all intra-assay results. Coefficients of variation were 6.8%，7.1%，8.8% and 8.6，respectively. Conclusion The reagent has shown reasonably stability in intra-assay，day-assay and inter-assay，which can satisfy the requirement of blood screening kit.

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.031

*本课题受重庆市卫生计生委医学科研计划面上项目（No.2016MSXM109）资助

400015 重庆市血液中心

杨俊鸿（1987–），男，重庆人，检验师，学士，主要从事输血安全工作，（E-mail）359846288@qq.com。

陈政，男，主管技师，主要从事输血管理研究，（Tel）023-89887301（E-mail）973519080@qq.com。

2017-05-08）

（本文编辑：王敏）