云南傣族人群红细胞Rh、Duffy血型抗原多态性调查*

陈婉璐 张婵 李琦 程瑜静 唐慧

云南傣族人群红细胞Rh、Duffy血型抗原多态性调查*

陈婉璐 张婵 李琦 程瑜静 唐慧

目的 调查云南傣族人群的Rh、Duffy血型系统抗原表现型的分布及抗原频率，为云南傣族血型分布的多态性及防治Rh、Duffy血型系统引起的溶血症提供科学依据。 方法 采集云南省境内3代内无血缘的傣族人群200例（男女各100例）、汉族对照组100例（男女各50例）为无关人群，采集血样3 ml（EDTA抗凝），采用微柱凝胶法检测Rh、 Duffy及抗体筛选，Duffy血型系统基因分型检测采用PCR-SSP法，对比分析两人群间的差异。 结果 200例傣族人群中RhD阳性率为98.5%，RhD阴性率为1.5%，100例汉族人群100例（男女各50例）中RhD阳性率99.0%，RhD阴性率1.0% 。Duffy基因分型检测结果：傣族200份样本中，Duffy血型各种表型分布为：Fy（a+b-）表型187例（93.5%），Fy（a+b+）表型12例（6.0%），Fy（a-b+）表型 1例 （0.5%），未发现 Fy（a-b-）表型。基因频率为：Fya（0.965），Fyb（0.035）；汉族100份样本中，Duffy血型各种表型分布为：Fy（a+b-）表型92例（92.0%），Fy（a+b+）表型 5例（5.0%），Fy（a-b+）表型 3例 （3.0%），未发现 Fy（a-b-）表型。基因频率为：Fya（0.945），Fyb（0.055）。傣族人群抗体筛选阳性率为1.5%，均为同种抗体，其中2例E抗体。 结论 云南傣族人群的Duffy血型系统抗原分布状况及抗原分布特征与当地汉族人群基本相符，但也有本民族的自身特点，傣族族人群的RhD阴性率和不规则抗体检出率比当地汉族人群的不规则抗体检出率高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

Rh血型 Duffy血型 抗原分布 基因频率 云南傣族

云南是我国少数民族最多的省份，人口在5 000人以上的民族有26个，除汉族外的少数民族有25个，各民族分布呈大杂居、小聚居的特点。其中，傣族是云南的世居民族，也是世界上人口较多的民族之一；分布在泰国、老挝、缅甸、越南、柬埔寨、印度、中国等多个国家，总人口约6 600万，中国境内约126万。血型是人类的一种遗传性状，具有多态性和复杂性的特征。红细胞血型系统在临床输血医学中具有重要的意义，当前，国际输血协会已确认了33 个红细胞血型系统[1]，而Rh和Duffy血型系统具有重要的临床意义[2，3]。本研究通过研究云南省傣族人群的Rh、Duffy血型系统抗原的分布特征，同时研究其不规则抗体产生的几率，将为云南傣族群体稀有血型库的建立、溶血病的防治、输血治疗和疾病诊断提供科学数据。同时，为遗传学研究，司法判定和组织移植等工作提供便利，具有一定的科研和临床指导意义。

对象与方法

1 研究对象 选取云南省境内3代内无血缘关系的傣族健康人群200例，其中男性100例，女性100例，18～55岁，平均34岁。采集云南汉族无关健康对照人群100例人，其中男性50例，女性50例，18～55岁，平均28岁。标本为静脉血3 ml，EDTA抗凝。

2 试剂与仪器 全血基因组 DNA 提取试剂盒（大连宝生物公司），Rh-C、c、D、E、e 基因分型卡和全自动血型分析仪（江阴力博医药生物技术有限公司），抗-Fya、抗-Fyb（上海血液生物医药有限责任公司），Duffy 血型基因 PCR-SSP 分型试剂盒试剂盒（美国 G&T 公司），3种抗-D 试剂（北京金豪、上海血液生物和 BIOSCOT），血清学离心机（久保田）、–20℃海尔冰箱：BCD-251WBSV型、4℃海尔冰箱：BCD-251WBSV型、台式低速离心机：TDZ5-WS型、日立高速冷冻离心机、Sigma960酶标仪、 Eppendorf PCR仪、电泳仪、Bio-Rod凝胶成像仪等，所有试剂均在有效期内使用 。

3 方法

3.1 鉴定Rh血型分型和抗体筛选：Rh血型鉴定按文献[4]进行，不规则抗体采用抗人球蛋白检测卡法[5]，所有试验均严格按照仪器和试剂使用说明书要求进行操作。

3.2 微柱凝胶法检测 Duffy表型：使用 IgG 型抗-Fya和抗- Fyb，采用间接抗球蛋白法进行 Duffy血型表型鉴定，参照试剂说明书操作； 血清学反应强度的评价参照文献[6]。

3.3 Duffy血型系统的基因分型：采用美国 G&T公司Duffy血型基因 PCR-SSP 分型试剂盒。Fya、Fyb和Fy基因扩增产物片段均为232 bp 。内对照为人类生长激素（Human growth hormone，HGH）基因，扩增产物429 bp。PCR 扩增条件为95℃ 5 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 90 s，共 30 个循环； 最后72℃延伸 5 min。PCR 产物经 2.0% 琼脂糖凝胶电泳（10V，30 min）后，在凝胶成像系统下通过与标准分子量对比，观察是否产生特异性 PCR 产物，从而判断相应基因型，并拍照保存。

4 基因频率的计算 按照文献[7]计算基因频率。

5 统计学处理 比较汉族与傣族人群的Rh和Duffy血型系统抗原分布差异，用卡方检验比较表型分布的期望值与观察值是否符合Hardy-Weinberg平衡法则，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 D抗原的分布200例傣族标本检测出 Rh（D）阴性 3 例，100例汉族标本检测出Rh（D） 阴性 1例。傣族人群中Rh阴性率为：1.5%，高于汉族的1%。经χ2检验（P＜0.05），差异有统计学意义，见表1。

2 Rh血型表型分布情况 200例傣族和100例汉族受检者的Rh表型以CCDee最多，CcDEe其次，见表2；其中200例傣族的抗原分布见表3，傣族和汉族Rh血型表型分布比较见表4。

3 Duffy血型分布情况 傣族2 0 0份样本中，Duffy血型各种表型分布为：Fy（a+b-）表型187例（93.5%），Fy（a+b+）表型12例（6%），Fy（a-b+）表型1例（0.5%），未发现Fy（a-b-）表型。基因频率为：Fya（0.965），Fyb（0.035），与PCR-SSP方法检测结果一致，见图1。汉族100份样本中，Duffy血型各种表型分布为：Fy（a+b-）表型 92例（92%），Fy（a+b+）表型5例（5%），Fy（a-b+）表型3例（3%），未发现 Fy（a-b-）表型。基因频率为：Fya（0.945），Fyb（0.055），见表3。

表1 D抗原在云南傣族及汉族中的分布

表2 Rh血型表型在云南傣族及汉族中的分布

表3 傣族和汉族Duffy血型结果

表4 不规则抗体筛选结果

4 抗体筛选结果 傣族200份标本中，抗体筛选阳性率为1.5%，均为同种抗体，其中2例E抗体，1例为M抗体。汉族100份标本中抗体筛选阳性率为0%。见表4。

讨 论

图1 Duffy血型基因检测分型凝胶成像图

Rh血型系统与Duffy血型系统类似，都可通过输血和妊娠产生免疫性抗体，继而产生严重的临床后果[8]；且在种族地域分布上具有很大差异[9]，这两个血型系统首先具有抗原多态性；其次，在不同人群，甚至同一国家不同地区，等位基因频率也存在差异。因此，对某地区聚居的少数民族相关指标进行研究，对该地区临床输血、疾病诊断治疗具有重要意义[10]。根据目前的临床输血技术规范所进行的同型输血仅是 ABO 和 Rh（D）同型，因此，受血者输入自身红细胞没有的抗原可能会刺激机体产生相应的抗体，从而导致再次输血时配血不合。目前的应对方法多为在输血前进行抗体筛查试验，可以有效减少抗体筛查阳性患者因输入含相应抗原红细胞而引起的溶血性输血反应，以保证输血安全[11]。孕妇妊娠由于胎儿的抗原与母亲不合，也可以通过输血或胎儿出血的方式免疫母体，产生相应的同种抗体，引起新生儿溶血病[12，13]。

本次研究结果表明，当地傣族人群RhD阴性血型分布与汉族存在差异，与其他文献中相关数据差异的原因符合受种族地域分布影响所致[14，15]。傣族和汉族受检者的Rh表型为CCDee＞CcDEe＞CcDee＞ccDEE＞ccDEe＞CCDEe＞CcDEE。当地傣族和汉族Duffy血型系统基因频率：傣族Fya：0.965，Fyb：0.035，汉族Fya：0.945，Fyb：0.055，与国内其他人群[1]：西藏藏族Fya：0.9218，Fyb：0.0782；江苏汉族Fya：0.9400，Fyb：0.0600；洛阳汉族Fya：0.9527，Fyb：0.0473；浙江汉族Fya：0.9412，Fyb：0.0588；上海汉族Fya：0.9649，Fyb：0.0351的分布基本相似。而傣族人群在抗筛阳性率上比汉族人群要高，输血前有必要进行抗体筛选以确保输血安全。研究血型系统抗原表型分布，掌握血型抗原的基因分型，为无偿献血工作、为该民族群体稀有血型库的建立、组织配型和免疫性输血反应的预防提供科学数据[16]，确保输血安全，也为遗传学研究、血缘判定提供便利。

1 张嵘，田力，李晓娟，等.西藏藏族人群多个红细胞血型系统基因多态性研究[J].中国输血杂志，2014，（05）：505-507.

2 张钦辉.临床输血学[M] .上海：上海科学技术出版社，2000 ：59.

3 赵桐茂，张工梁．中国Duffy血型分布[M]．中华血液学杂志，1982，3（1）：32.

4 中华人民共和国卫生部．中国输血技术操作规程[M]．天津．天津科学技术出版社，1997：60-72.

5 刘达庄．免疫血液学[M]．上海：上海科学技术出版社，2002：190-191.

6 American Association of Blood Banks.Section 1/ /Technial Manu-al，12th，Bethesda：AABB.Arlington，1987：254

7 赵桐茂．人类血型遗传学[M]．北京：科学出版社，1987：226-234．

8 李勇，马学严.实用血液免疫学血型理论和实验技术[M].北京：科学出版社，2006：396-398.

9 Bauduer F，Touinssi M，Degioanni A，et al.Duffy blood group genotyping in French Basques using polymerase chain reaction with allele-specific primers（ PCR-ASP） [J].Am J Hum Biol，2004，16（1）：78-81.

10 Skaik YA.The Rh allele frequencies in Gaza city in Palestine[J].Asian J Transfus Sci，2011，5 （2）：150-152.

11 姚建云，张欢，戴学军，倪卫英，费梅君，彭敬红.输血前不规则抗体检查结果分析[J].临床输血与检验，2016，（03）：286-287.

12 马晓旭，任忠国．抗-c、抗-E引起交叉配血不合1例[J]．现代中西医结合杂志，2009，18（15） ：1780．

13 王兰芳，王秀，何刘媛，等.90例RhD阴性孕妇血型不合对胎儿和新生儿的影响[J].临床输血与检验，2015，（06）：495-498.

14 张雄民，王晨，刘曦，刘青宁，沈行峰.上海地区稀有血型Duffy系统Fy～a阴性献血者筛查和临床应用[J].中国输血杂志，2010，（04）：293-294.

15 邢焕云，沈建军.全民开展Rh血型普查意义探讨[J].中国误诊学杂志，2006，（11）：2223.

16 宋宁，郑世荣，姚志强，等．四川地区汉族人群Kidd血型系统基因频率调查[J]．中国输血杂志，2008，21（12） ：926-927．

Objective To investigate the distribution and antigen frequencies of Rh and Duffy blood group antigens in Dai nationality in Yunnan，so as to provide an evidence for the prevention and treatment of blood type-associated hemolytic diseases. Methods Two hundred cases （100 male and 100 females） of Dai people without consanguinity were collected and 100 Han people were taken as control. Blood samples （5 ml，EDTA anticoagulants） were detected for Rh，Duffy and antibody screening. Duffy blood group genotyping was performed using PCR-SSP. Results The RhD positive rate was 98.5% and the negative rate was1.5% in 200 Dai persons compared with the positive rate of 99.0% and negative rate of 1.0% in Han population. Duffy genotyping revealed the distribution of phenotypes of Fy（a+b-）（187/200，93.5%），Fy（a+b+）（12/200，6.0% ），and Fy（a-b+）（1/200，0.5% ），no Fy（a-b-）phenotype was seen，and the genetic frequencies were found to be Fya（0.965） and Fyb（0.035）. In Han population，Duffy phenotypes include Fy（a+b-）（92/100，92.0% ），Fy（a+b+）（5/100，5.0% ），and Fy（a-b+）（3/100，3.0% ），no Fy（a-b-）phenotype was noted，and the genetic frequencies are Fya（0.945） and Fyb（0.055）. The Dai population presented the prevalence of positive antibodies of 1.5%，among them 2 cases showed E antibodies. Duffy genotyping results showed that，in the 200 samples of Dai nationality，the gene frequency was Fya（0.965），and Fyb（0.035）. The frequency of the gene was Fya（0.945）and Fyb（0.055） in 100 samples of Han nationality. Conclusion The antigen distribution of Duffy blood group system in Dai nationality is similar to those in Han population although the negative RhD and irregular antibodies are slightly higher in Dai people（P＜0.05）.

Rh Duffy blood group Antigen distribution Gene frequency Dai nationality in Yunnan

R457.1+1 R392.13

A

1671-2587（2017）05-0487-04

Polymorphism of Rh and Duffy Bl ood Group Antigens in Erythrocytes of Dai Population in Yunnan CHEN Wanlu，ZHANG Chan，Li Qi，et al. Department of Blood Transfusion，the First Hospital of Yunnan Province，Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology，Kunming Yunnan 650032

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.023

*本课题受2016年度云南省教育厅科学研究基金（No.2016ZDX017），云南省教育厅理工类重点项目基金（No.2014Z038）资助

650032 昆明，云南省第一人民医院、昆明理工大学附属医院输血科（陈婉璐，张婵，李琦，程瑜静）；云南省第一人民医院、昆明理工大学附属医院 临床基础医学研究所（唐慧）

陈婉璐（1982–），女，云南昆明人，主管技师，在读硕士研究生，主要从事临床输血检验，（Tel）13608803742（E-mail） 282210895@qq.com。

唐慧，（E-mail） htang1122@aliyun.com。

2017-02-16）

（本文编辑：潘健）