肝细胞肝癌患者血清PF4、VEGF、HIF-1α及Lp（a）的表达及临床意义*

唐永华 许海涛 刘小君 刘良田 李阳华

肝细胞肝癌患者血清PF4、VEGF、HIF-1α及Lp（a）的表达及临床意义*

唐永华 许海涛 刘小君 刘良田 李阳华

目的 探讨血小板第4因子（PF4）、血管内皮生长因子（VEGF）、乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）及脂蛋白（a）[Lp（a）]在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者血清中的表达及其临床意义。方法 收集2014年3月～2016年12月年本院确诊的慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）102例、肝硬化（1iver cirrhosis，LC）51例、HCC患者37例及健康对照组（health control，HC）186例，采用免疫增强比浊法测定受试者血清中Lp（a）浓度，同时采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清PF4、HIF-la和VEGF含量，并对检测结果进行统计分析。结果 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）浓度在HCC组明显高于CHB、LC和HC组，差异均有统计学意义（t=6.185～15.916，P＜0.001～0.05），且III期HCC明显高于I期和II期，差异均有统计学意义（t=7.951～19.086，P＜0.001～0.05），CHB、LC和HC组血清PF4、VEGF及HIF-1α浓度的差异无统计学意义（t=0.371～0.892，P＞0.05）；LC组Lp（a）浓度明显低于其他组，差异均有统计学意义（t=6.176～9.452，P＜0.05），且III级LC明显低于I级和II级，差异均有统计学意义（t=4.945～6.067，P＜0.05）。结论 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）浓度在HCC血清中明显增高，且随临床分期/级越大，浓度增幅越高，可作为临床HCC诊断及分期依据；Lp（a）浓度LC组明显降低，可作为LC诊断及与HCC鉴别诊断依据。

血小板第4因子 血管内皮生长因子 乏氧诱导因子-1α 脂蛋白a 肝细胞肝癌

肝细胞肝癌（hepatocel lularcarcinoma，H C C）占原发性肝癌的8 5%，是致死率位居第三的恶性肿瘤[1]。由于起病隐匿，仅有10%～15%HCC患者能被早期确诊和给予积极的外科切除、肝移植等根治性治疗[2]。据最新统计，在HCC的新发和死亡病例中，中国人均占50%以上，且正处于不断上升中，5年生存率仅为0～10%[3，4]。因此，不断探讨HCC发病早期诊断血清标志物是提高HCC诊断和治疗的重要手段[5]。本研究对CHB、LC、HCC和HC患者血清中PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）浓度进行分析，探讨它们在HCC诊断和分期中的应用价值，现报道如下。

材料与方法

1 一般资料 收集2014年3月～2016年12月本院确诊的CHB患者102例，其中男57例，女45例，年龄35～71岁，平均43.6±19.37岁；LC患者51例，其中男30例，女21例，年龄32～73岁，平均41.9±20.75岁，按PUgh的改良计分法将LC患者分为三级，其中I级19例、II级23例和III级9例；HCC患者37例，其中男23例，女14例，年龄39～78岁，平均52.7±21.85岁，诊断标准符合中华医学会2012版《肝癌规范化诊治指南》，所有病例术后病理检查证实为HCC，根据UICC标准，组织病理分期：I期7例、II期13例、III期17例，所有HCC患者检测前均未接受放化疗与抗肿瘤药物治疗。同时选择同期健康志愿者186例，其中男112例，女74例，年龄32～69岁，平均40.2±18.79岁，均无重要器官疾病史，谷丙转氨酶均正常。本临床研究已经通过医院伦理委员会批准，且所有患者均签署知情同意书。

2 仪器与试剂 C16000全血动生化分析仪、校准品、质控品及配套试剂均由美国雅培公司提供，Lp（a）试剂由浙江宁波美康公司提供；ELX800全自动酶免分析仪由美国BioTek Instruments，Inc公司提供，PF4、HIF-1a和VEGF试剂盒由上海蓝基生物科技有限公司提供。

3 方法

3.1 标本采集和保存：所有受试者均于治疗前清晨空腹用一次性无抗凝剂真空采血管采集静脉血3～4 ml，置室温30 min后于3 000 r/min离心机内离心15 min，分离血清及时检测，4 h内检测完毕，不能及时检测的标本于–20℃保存，需检测时取出室温复溶，等复溶后30 min后进行检测。

3.2 检测：Lp（a）检测前对C16000全自动生化分析仪进行维护、保养、校准及室内质控物检测，待质控结果在控后才进行受试者标本检测；PF4、HIF-1a和VEGF检测前对ELX800全自动酶免分析仪进行维护和保养，并对比色灵敏度进行校正，且每批均设置空白、阴性、阳性和质控检测孔，待以上各质控孔的OD值均达试剂盒说明书规定的有效范围内，才进行标本结果判读，否则重新试验。所有操作均严格按实验室SOP操作规程及仪器和试剂盒说明书进行。

4 统计学处理 所有数据采用SPSS20.0软件包处理，计量资料以平均值±标准差表示，组间比较采用t检验，P＜O.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 CHB、LC、HCC及HC各组血清标记物结果比较 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）浓度在HCC组明显高于CHB、LC和HC组，差异均有统计学意义（t=11.685，15.916，12.061，6.176，P＜0.001～0.05），CHB、LC和HC组血清PF4、VEGF及HIF-1α浓度的差异无统计学意义（t=0.371，0.892，0.726，P＞0.05），HB和HC组Lp（a）浓度间差异无统计学意义（t=1.062，P＞0.05），而LC组明显低于其他组，差异均有统计学意义（t=6.176，9.452，P＜0.05），结果见表1。

2 LC不同分级血清中Lp（a）的结果比较 I级和II级LC血清Lp（a）浓度（mg/L）分别为135.23±51.08和117.64±42.63，差异无统计学意义（t=1.594，P＞0.05），而III级LC血清中Lp（a）浓度为 71.52±29.14，明显低于I级和II级，差异均有统计学意义（t=4.945，6.067，P＜0.05）。

3 HCC不同分期血清各标记物结果比较 I期和II期HCC血清中VEGF和 HIF-1α浓度间差异无统计学意义（t=1.094，1.315，P＞0.05），I期HCC血清中PF4和Lp（a）浓度低于II期，差异均有统计学意义（t=3.045～3.791，P＜0.05），而III期HCC血清中的PF4、VEGF、HIF-1α和 Lp（a）浓度均明显高于I期和II期，差异均有统计学意义（t=19.086，13.782，12.564，7.951，P＜0.001～0.05），结果见表2。

表1 CHB、LC、HCC及HC各组血清标记物结果

表2 37例HCC不同分期受试者血清中各标记物的结果

讨 论

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发病隐匿，早期症状不明显，大多数HCC患者发现时已处于中晚期，且肝脏血流极为丰富，肿瘤细胞生长迅速，极易发生转移。这些特点给临床上HCC的早期诊断和治疗带来极大困难[6]。因此，研究和发现新的HCC早期血清诊断标记物或标记物联合检测，对HCC早期诊断、治疗、提高HCC患者生存率和治愈机会具有非常重要的临床意义[7]。

血小板第4因子（platelet factor-4，PF4）是一种血小板衍生因子，由巨核细胞生成。有研究证实，PF4具有抑制肿瘤血管生成的作用，与肿瘤的发生、发展及转移有密切关系。本研究结果显示，HCC组血清中PF4浓度明显高于CHB、LC及HC组，差异有统计学意义（t=6.185～7.356，P＜0.05），而CHB、LC及HC组之间的差异均无统计学意义（t=0.371～0.416，P＞0.05），这可能与PF4通过抑制VEGF的作用来发挥其抑制血管生成等有关。

血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是迄今发现的功能最强、特异性最高的血管生成调控因子。已有研究表明恶性肿瘤患者血清中VEGF含量与肿瘤的发生、发展及转移密切相关[8，9]。本研究结果显示，HCC组血清中VEGF浓度明显高于CHB、LC及HC组，差异有统计学意义（t=14.625～15.916，P＜0.01），而CHB、LC及HC组之间差异均无统计学意义（t=0.401～0.892，P＞0.05），这可能与VEGF与受体结合刺激血管内皮细胞生长和增殖，从而促进肿瘤血管内皮细胞分裂、增殖及诱导血管形成等因素有关。

乏氧诱导因子-la（hypoxia inducible factor-1a，HIF-1a）是细胞应对缺氧微环境状态的一种关键转录因子，由HIF-la和HIF-1β两个亚基构成的异二聚体，其中HIF-la位于细胞核，对多种缺氧反应具有调控作用，其中最主要的是PF4。已有研究表明HIF-1a与人体大多数恶性肿瘤相关，在维持肿瘤细胞的新陈代谢、肿瘤血管生成、肿瘤组织的侵袭性和转移增殖等方面具有重要作用[10，11]。本研究结果显示，HCC组血清中HIF-la浓度结果明显高于CHB、LC及HC组，差异有统计学意义（tt=6.612～7.913，P＜0.05），而CHB、LC及HC组之间差异均无统计学意义（t=0.439～0.702，P＞0.05），这可能与机体在缺氧微环境状态下，HIF-la与VEGF等缺氧反应元件结合并激活其功能参与血管生成有关。

脂蛋白（a）[1ipoprotein（a），Lp（a）]是一种与低密度胆固醇相似的特殊脂蛋白，由载脂蛋白A[apo（a）]和载脂蛋白B（apoB）通过二硫键连接而成。有研究证实，Lp（a）浓度升高与肿瘤的发生、进展和转移有密切关系[12]。本研究结果发现LC组血清中Lp（a）浓度明显降低，且随LC分级增加而下降，这可能与慢性肝损害引起肝脏合成蛋白及脂质功能障碍有关。但HCC组却明显升高，明显高于LC组，且随HCC分期增加而升高，这可能与Lp（a）能抑制纤溶酶原活化，导致局部容易形成纤维蛋白网和血栓，有利于恶性肿瘤细胞黏附于血管相应部位，亦可能与激活血小板释放血小板源性生长因子，促进恶性肿瘤细胞的增殖及生长等因素有关[13]。可见，Lp（a）测定有助于LC和HCC的诊断、鉴别及分级或分期诊断。

综上所述，PF4、VEGF、HIF-1a及Lp（a）浓度在HCC患者血清中均明显升高，且随分期或分级增加而升高，且Lp（a）在LC患者血清中降低，且随分级增加而降低。因此，联合检测PF4、VEGF、HIF-1a和 Lp（a）浓度，对HCC疾病的诊断、鉴别及分期诊断具有重要的意义，值得临床推广应用。

1 杨立新，魏强，马芝倩，等.超声造影在肝癌残存病灶微波消融治疗中的应用[J].现代医学，2014，42（2）：395-397.

2 LLLOVET J M，SCHWARTZ M，MAZZAFERRO V.Resection and liver transplantation for hepatocellular carcinoma[J].Semin Liver Dis，2005，25（2）：181-200.

3 Song P，Tang W，Tamura S，et a1．The management of hepatocellular carcinoma in Asia：a guide line combining quantitative and qualitative evaluation[J]．Biosci Trends，2010，4（6）：283-287．

4 Jemal A，Bray F，Center MM，et a1．Global cancer statistics[J]．CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90

5 王芳胜，熊敦勇，寇 辉，等.血清AFP，CEA，CA-199与TAP在肝癌诊断中的应用价值[J].现代检验医学杂志，2015，3O（5）：148-150.

6 吕秀芳，赵奉波，巩秀，等.血清神经肽Y和骨桥蛋白在肝细胞肝癌诊断中的应用研究[J].交通医学，2015，29（5）：425-428.

7 李芒会，张利侠，李亚娥.肿瘤标志物检测对原发性肝癌早期诊断的分析[J].现代检验医学杂志，2014，29（3）：149-151.

8 GUBA M，von BREITENBUCH P，STEINBAUER M，et al.Rapamycin inhibits primary and metastatic tumor growth by anti-angiogenesis：involvement of vascular endothelial growth factor[J].Nat Med，2002，8（2）：128-135.

9 Peifer M．Fernandez-Cuesta L，Sos ML，et a1．Integrative genome analyses identify key somatic driver mutations of small cell lung cancer[J]．NatGenet，2012，44（10）：1104-1110．

10 DAI F，ZHANG X M，SHEN W R，et a1.Liposomal curcumin inhibits hypoxia-induced angiogenesis after transcatheter arterial embolization in VX2 rabbit liver tumors [J].Onco Targets Ther，2015，15（8）：2601-2611.

11 戴峰，张秀明，陈駿，等.肝细胞肝癌TAE前后血清HIF-la、VEGF表达与疗效的相关性研究[J].东南大学学报（医学版），2016，35（4）：537-540.

12 Lippi G，Targher G，Franchini M，et a1．Biochemical correlates of lipoprotein（a） in a general adult population．Possible implications for cardiovascular risk assessment[J].J Thromb Thrombolysis，2009，27（1）：44-47．

13 曹纯，马代远，杜小波，等．肺癌患者血清脂蛋白a表达水平及其临床意义[J].实用医院临床杂志，2014，l1（5）：175-176．

O bjective To investigate the levels and clinical significance of platelet factor 4 （PF4），vascular endothelial growth factor（VEGF），hypoxia inducible factor-1α（HIF-1α） and lipoprotein α（Lp α） in hepatocellular carcinoma （HCC）. Method The investigation included 102 inpatients of chronic hepatitis B（HCB），51 of liver cirrhosis，37 of HCC，and 186 subjects of healthy controls（HC） between 2014 and 2016. All samples were detected with immune enhanced turbidimetric method for serum concentration of Lpα and with ELISA for seral PF4，HIF -la and VEGF. Results The PF4，VEGF，HIF-1a and Lpα concentrations in HCC patients were obviously higher than those of CHB and LC patients，and HC as well （P＜0.001～0.05），showing a stage-dependent increase of the markers tested（t=7.951-19.086，P＜0.001-0.05）. No remarkable variation was noted of PF4，VEGF，and HIF-1α in the three groups（P＞0.05）. Lpαlevel，however，was found to be higher in LC group than in the other groups（P＜0.05），reversely showing a stage-dependent decrease（P＜0.05）. Conclusions PF4，VEGF，HIF-1α and Lpαlevels are significantly elevated in the sera of HCC patients，based on which a differential diagnosis between LC and HCC can be made.

Platelet factor-4 Vascular endothelial growth factor Hypoxia inducible factor-1α Lipoprotein（a） Hepatocellular carcinoma

R446.11 R735.7

A

1671-2587（2017）05-0478-04

Clinical Significance of PF4，VEGF，HIF-1a and Lpα in Sera of Patients with Hepatocellular Carcinoma TANG Yong-hua，XU Hai-tao，LIU Xiao-jun et al. Clinical Laboratory and Department of Internal Medicine of Shenzhen Guangming New District Hospital，Guangdong province，Shenzhen 518108

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.021

*本课题受广东省深圳市宝安区科技创新项目（No.2016CX106）资助

518106 广东省深圳市光明新区人民医院（唐永华，许海涛，刘小君，李阳华）；宝安区石岩人民医院输血科（刘良田）

唐永华（1977–），男，主管技师，学士，主要从事临检及生化免疫工作，（Tel）18126081835（E-mail）tangyonghua1977@163.com。

2017-06-02）

（本文编辑：潘健）