高浓度蛋白穿刺液直接涂片法与离心集菌涂片法镜检效果的研究*

杨剑锋 钟清兰 熊熙

高浓度蛋白穿刺液直接涂片法与离心集菌涂片法镜检效果的研究*

杨剑锋 钟清兰 熊熙

目的 应用含高浓度蛋白穿刺液洗涤处理前后检菌效果的对比观察。方法 对2015年7月1日～2016年12月31日所有粘稠脓性穿刺液标本118例进行细菌学的常规涂片和培养，同时对118例标本进行洗涤、离心集菌后涂片镜检，并平行进行常规细菌培养。结果 118例粘稠脓性穿刺液标本直接涂片革兰染色检出细菌36例，抗酸染色镜检无1例阳性。118例标本经洗涤、离心后涂片，革兰染色镜检检出细菌82例，检出抗酸杆菌2例。洗涤、离心集菌涂片法镜检还发现漏检了G-杆菌8例和G+球菌4例。洗涤、离心集菌涂片法的镜检阳性率与细菌培养具有高度的符合率。结论 洗涤、离心集菌涂片法可提高细菌检出率，并避免漏检，可为临床医生的诊断与治疗提供极有价值的参考信息。

穿刺液 直接涂片法 离心聚菌涂片法 镜检

穿刺液是细菌学检验最常采用的标本，此类标本只要检测到细菌，临床医生就可确立感染的存在。然而，受多种因素的影响，无论是细菌培养还是涂片镜检都有较高的假阴性率。直接涂片法染色时涂膜容易被冲掉，且脱色不好，显微镜镜检背景太深，白细胞边界不清，细胞着色太深，细胞内细菌乃至胞外细菌易被掩盖，因而镜检阳性率不高，严重影响临床诊断的确立与后续治疗。通过比较直接涂片法和洗涤、离心集菌涂片法染色镜检的检菌效果，认为洗涤、离心集菌涂片法的镜检效果理想，现报道如下。

材料与方法

1 材料 2015年7月1日～2016年12月31日所有粘稠的脓性穿刺液标本118例，标本由临床医生按无菌操作技术采集后立即送检，分别为脓液71例，分泌物13例，胆汁11例，引流液8例，腹水6例，切口分泌物6例，胸水2例，脓尿1例，分别以直接涂片和洗涤、离心集菌涂片法染色镜检，同时进行常规细菌学培养。两种方法各涂片3张，1张革兰染色，1张抗酸染色，第3张备用。

2 方法

2.1 直接涂片与检菌：对临床送检的所有粘稠的脓性穿刺液标本直接涂片，火焰固定，革兰染色和抗酸染色镜检至少300个视野。

2.2 集菌涂片法与检菌

2.2.1 集菌方法：①将穿刺液5 ml置于无菌试管，3 000 r/min离心10 min；用无菌吸管吸去上清液，留下细胞沉渣。②细胞沉渣加入0.9%氯化钠注射液5 ml，颠倒混匀；第2次3 000 r/min离心10min；取出试管，吸去上清液，留下细胞沉渣。③细胞沉渣再加0.9%氯化钠注射液5 ml，颠倒混匀，第3次3 000 r/min离心10 min；吸去上清液，留下细胞沉渣，震荡混匀。

2.2.2 涂片：用接种环沾取一环细胞沉渣，点至载玻片上，推片或压片（注意：力度不可太大），干燥，分别进行革兰染色和抗酸染色与检菌。

3 细菌培养 标本接种至血、巧克力、中国兰和沙保弱琼脂平板。血、巧克力琼脂平板于35℃、5%CO2环境中培养；中国兰和沙保弱琼脂平板于35℃、空气环境培养箱中培养。

结 果

1 118例粘稠的脓性穿刺液标本采用直接涂片革兰染色镜检仅检出细菌36例（阳性率30.51%，36/118），阴性率69.49%（82/118）；抗酸染色镜检阳性率0。除直接涂片法革兰染色36例使用洗涤、离心聚菌涂片法仍为阳性外，82例直接涂片镜检阴性者经洗涤、离心集菌后涂片，革兰染色镜检检出细菌46例，即洗涤、离心聚菌涂片法革兰染色的阳性率为69.49%（82/118），阴性率30.51%（36/118）。两种涂片法镜检与细菌培养结果见表1。

表1 直接涂片法和洗涤离心集菌涂片法镜检与细菌培养检测结果

2 洗涤、离心聚菌涂片法革兰染色发现不稳定L型细菌5例，酵母样孢子1例；抗酸染色镜检检出抗酸杆菌2例。直接涂片法36例阳性标本在洗涤、离心集菌涂片法镜检后发现了白细胞内的G-杆菌8例，G+球菌4例，疑似放线菌1例。可见，直接涂片镜检法存在漏检现象。

3 82例洗涤、离心集菌涂片法革兰染色镜检阳性者经普通细菌培养阳性（有细菌生长）的有46例，其余36例普通细菌培养阴性者中22例为厌氧菌（耳鼻喉脓肿与普外科腹腔脓液标本），14例可能与取标本前已使用抗菌药物等有关。

讨 论

标本直接涂片的固定与蛋白含量有很大关系，过高或过低都不易固定。此时采用细胞沉渣涂片，标本更容易被固定，更多标本中的目的检出物被涂在单位面积载玻片上，故能获得很好的效果。洗涤、离心集菌涂片法可提高革兰染色阳性率，可使直接涂片法革兰染色的阳性率30.50%提高到69.49%，提高阳性率约39%。显然，洗涤、离心聚菌涂片法用于含高蛋白体液标本的镜检，相比直接涂片有助于避免医生的误诊误治，使患者得到及时而正确的治疗，无疑具有重要的临床实用价值。

直接涂片法抗酸染色阳性率为0，而洗涤、离心聚菌涂片法不但可检出抗酸杆菌（1.69%），还可检出白细胞内的G-杆菌、G+球菌和放线菌等，从而避免直接涂片法的漏检现象，为临床医生诊断细菌感染及后续进行正确的抗感染治疗提供了极有价值的参考依据。

本文36例直接涂片法革兰染色阳性的标本使用洗涤、离心聚菌涂片法也是阳性。因此，在平常的标本检测工作中，只需对直接涂片法阴性的标本进行洗涤、离心聚菌涂片法补充即可，这样可达到快速（提高工作效率）、准确（避免误诊误治）的目的。

本文118例细菌培养阳性率只有38.98%，而洗涤、离心聚菌涂片法的阳性率则有69.49%，说明取样前就可能在本院或他院进行了抗菌药物的经验性治疗。本文结果说明两点：抗菌药物经验治疗前正确取样非常必要，洗涤、离心聚菌涂片法可避免细菌培养的假阴性率，两法形成互补。

虽然有学者[1]推荐差速离心集菌法，虽然阳性率提高了，但仅是集菌，细胞却被丢弃了。本文采用的洗涤、离心集菌涂片法可将细胞和细菌更真实的保留下来，标本更易被固定，能更真实的反映细菌与细胞之间的关系，有助于提高细菌检出率，为临床医生的诊断与治疗提供极有价值的参考信息。

由于胸水、腹水、淋巴液、关节液、前列腺液、胆汁等穿刺液蛋白质含量较高。存在既不好固定，染色时涂膜又容易冲掉，且脱色不好、背景太深等问题。我科细菌室以前均采用直接涂片法镜检，虽然耗时少、操作简单，但阳性率低。临床检验实践中经常出现直接涂片找到大量G+球菌，培养后却无细菌生长或只有G-杆菌生长；有时则发生直接涂片未找到细菌，但细菌培养又有细菌生长的现象；有时遇到需要数日才长出慢生长细菌时，还容易漏检（如漏检分枝杆菌、放线菌等）。

对无菌部位采集的穿刺液标本进行细菌学检验是临床细菌学检验十分重要的项目，检验中任何阳性结果对临床诊治都有重要的参考价值。由于直接涂片检菌用时短，故条件较好的细菌室都会采用直接涂片检菌阳性的结果作为危急值报告给临床医生[2-5]。由于此类标本的细菌学检验结果十分重要，因此探讨适合细菌学检验的新方法，以提高细菌检出阳性显得十分重要。本文结果表明，与直接涂片法比较，洗涤、离心聚菌涂片法镜检高蛋白穿刺液具有阳性率高，可与直接涂片法和细菌培养形成有效的互补，提高细菌检出率，为临床医生的诊断和抗感染治疗提供极有价值的参考信息，值得在各级医疗机构推广应用。

1 蔡静清，张敏，张迎春.穿刺液差速离心抗酸茵涂片检查效果观察[J].河北医学，2010，16（10）：1278-1280.

2 张敏，王宁，张迎春，等.穿刺液标本差速离心与甩片方法检菌效果观察[J].河北医学，2012，18（1）：71-73.

3 王辉，任健康，王明贵.临床微生物学检验[M].北京，人民卫生出版社，2015：6.

4 陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].北京：人民卫生出版社，2010：5.

5 齐桂娟，张敏.脓性穿刺液集菌涂片方法检菌效果观察[J].河北医学，2013，19（1）：160-161.

R446.5

A

1671-2587（2017）05-0454-03

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.013

*本课题受宜春市科技局2016年市科技计划项目（No.JXYC2016KSC043）资助

331100 江西省丰城市人民医院检验科

杨剑锋（1979–），男，江西丰城人，主管技师，学士，主要从事临床检验工作，（E-mail）fcslzb@163.com。

2017-03-20）

（本文编辑：王虹）