小檗碱联合头孢他啶对产AmpC酶大肠埃希菌体外抑制作用研究

庾凤娟　张晓媚

【摘要】 目的：探讨小檗碱联合头孢他啶对产AmpC酶大肠埃希菌体外的抑制作用，为临床中西医结合治疗提供用药依据。方法：分别检测小檗碱和头孢他啶对20株产AmpC酶大肠埃希菌株的MIC；采用K-B法对20株产AmpC酶大肠埃希菌做单独小檗碱、单独头孢他啶及头孢他啶+小檗碱的联合药敏试验。结果：头孢他啶对产AmpC酶大肠埃希菌MIC 8～256 g/L；小檗碱对产AmpC酶大肠埃希菌MIC 31.25～250 g/L；头孢他啶+小檗碱联合药敏试验对耐药菌FIC表现均为相加作用；20株产AmpC酶大肠埃希菌药敏试验表现为头孢他啶联合小檗碱比单用头孢他啶的药敏抑菌环直径增大，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：小檗碱对产AmpC酶大肠埃希菌具有抑制作用；小檗碱联合头孢他啶对产AmpC酶大肠埃希菌联合药敏结果呈相加作用。

【关键词】 小檗碱； 头孢他啶； 产AmpC酶大肠埃希菌； 抑菌作用

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.18.081 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）18-0155-02

Inhibitory Effect of Berberine Combined with Ceftazidime on AmpC-producing Escherichia Coli in Vitro/YU Feng-juan，ZHANG Xiao-mei.//Chinese and Foreign Medical Research，2017，15（18）：155-156

【Abstract】 Objective：To explore the effect of Berberine combined with Ceftazidime on AmpC-producing escherichia coli in vitro，to provide medication basis for the clinical treatment of traditional Chinese and western medicine.Method：The MIC of Berberine and Ceftazidime to 20 AmpC enzyme escherichia coli were detected separately.The combined susceptibility test of 20 strains of AmpC-producing escherichia coli were detected separately with Berberine，Ceftazidime and Ceftazidime+Berberine by K-B method.Result：The MIC of Ceftazidime to AmpC enzyme escherichia coli was 8-256 g/L，the MIC of Berberine to AmpC enzyme Escherichia coli was 31.25-250 g/L.The FIC of Ceftazidime+Berberine drug susceptibility test to the drug-resistant bacteria performed additive effect.The diameter of the antimicrobial ring by Ceftazidime combined with Berberine were increased than the single use of Ceftazidime，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Berberine can inhibit the AmpC-producing escherichia coli，and Berberine combined with Ceftazidime shows additive effect on the drug sensitivity of escherichia coli producing AmpC enzyme.

【Key words】 Berberine； Ceftazidime； AmpC enzyme producing escherichia coli； Antimicrobial effects

First-authors address：Guangzhou Haizhu Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510220，China

随着质粒介导的ESBLs、AmpC酶的出现，药物剂量增加的同时，也增加了毒副作用，头孢类和单胺类抗生素的耐药率也不断增加，这给临床的治疗和医院感染的控制带来巨大严重的困难[1]。中药成分复杂，许多中药都有较强的抑菌作用，如小檗碱为我国常用中药之一，能清热泻火，燥湿解毒，是一种很好的清热解毒消炎药[2]，它作用于细菌（如大肠埃希氏、肺炎克雷伯菌等）的多个位点，未见报道有明显的抗药性[3]。小檗碱的抗菌谱广[4]，对多种细菌有抑制作用[5]，但对产AmpC酶大肠埃希菌的研究较少。本实验探讨小檗碱、头孢他啶单用和联合应用时对产AmpC酶大肠埃希菌的影响，为临床提供中西药合理、有效应用的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 細菌 菌株为2015年6月-2016年12月从笔者所在医院临床标本中分离出的产AmpC酶大肠埃希菌20株。阴性质控菌株和AmpC酶阳性质控菌株均由中国疾病预防控制中心提供。

1.1.2 主要试剂 M-H琼脂粉、氯唑西林（CLO，2 mmol/L）、克拉维酸（CA，2 mmol/L）、头孢他啶药（30 μg）、血平板。小檗碱由中国药品生物制品鉴定所提供。endprint

1.1.3 主要仪器设备 VITEK-2微生物鉴定及药敏分析仪、BSC-1500ⅡB2-X生物安全柜、AVC-4AI型净化工作台。

1.2 方法

采用K-B法初筛产AmpC酶大肠埃希菌，采用改良三维试验确认。采用琼脂稀释法测定小檗碱MIC，采用液体两倍稀释法测定头孢他啶MIC。采用K-B法对产AmpC酶大肠埃希菌做单独小檗碱、单独头孢他啶及头孢他啶+小檗碱的联合药敏试验。

1.3 统计学处理

本研究所的数据采用SPSS 13.0软件进行处理，计量资料用（x±s）表示，比较用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 产AmpC酶大肠埃希菌确认

20株产AmpC酶大肠埃希菌进一步确认为阳性菌株。

2.2 头孢他啶和小檗碱MIC

头孢他啶对产AmpC酶大肠埃希菌MIC 8～256 g/L，MIC90为64 g/L。小檗碱对产AmpC酶大肠埃希菌MIC 31.25～250 g/L，MIC90为62.5 g/L。

2.3 体外联合药敏试验

2.3.1 K-B法测定结果 20株产AmpC酶大肠埃希菌单独应用头孢他啶的抑菌圈直径为10～21.5 mm，小檗碱+头孢他啶抑菌圈直径为12～24 mm，两种药物抑菌圈直径比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3.2 4号和10号菌株联合药敏结果 头孢他啶+小檗碱联合药敏试验对4、10号产AmpC酶大肠埃希菌的FIC指数均表现为相加作用，见表2、表3。

3 讨论

大肠埃希菌随着第三代头孢菌素的广泛应用如头孢曲松，头孢他啶等，继产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）之后，又出现产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌，其水解底物范围更广，常呈现多重耐药的特点。本实验拟利用中药单体与西药联合用药，可收到单一用药不能获得的效果，联合用药，改变了药物原来的体内过程或药物的理化性质，以及药效学和药动学等方面的作用关系。古代中医常用小檗碱治疗腹泻，近年来也有很多关于其抗菌活性的研究。有研究指出，小檗碱浓度低时抑菌，高浓度有杀菌作用，这与本文研究相符，小檗碱浓度在31.25 g/L以上具有抑菌作用，其MIC90为62.5 g/L，其抗菌效果显著。实验对4、10号菌株进行联合抑菌的测定，结果均表现为相加作用。头孢他啶+小檗碱联合用药抗菌作用明显，可能是小檗碱具有抗菌增效的作用[6]。其抗菌活性可能和这几个方面有关：（1）头孢他啶的抗菌作用机制为影响细菌细胞壁的合成，而小檗碱可干扰DNA自我复制功能和消质粒的作用[7-8]，抑制蛋白质和核酸的合成，两者联合增加抑菌效果；（2）第三代头孢菌素耐药多数由于广谱酶的产生，小檗碱可能有抑制广谱酶的生成量或其活性的作用[9]；（3）小檗碱可使细胞中隔变形，直接破坏细菌内部超微结构；（4）中药如小檗碱抑菌成分较多，可作用于细菌的不同部位和繁殖的不同阶段，并对细菌的多个代谢环节，如丙酮酸的氧化脱羧过程，故不易产生耐药性。

中西藥联用可以发挥其各自优势，优于单独使用中药或西药的综合疗效。本实验结果显示小檗碱+头孢他啶联合使用，对产AmpC酶大肠埃希菌的FIC指数均表现为相加作用。更深一层思考：产AmpC酶大肠埃希菌经小檗碱+头孢他啶培养后是否会诱导蛋白质发生变化？蛋白质研究是日后的一个研究方向，相当多种细胞的蛋白质组数据库已经建立，蛋白质研究无论是基础理论还是技术方法都进展十分迅速和日渐完善[10-11]。

参考文献

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（收稿日期：2017-02-15）endprint