葛芪颗粒的质量标准研究

吕玲玲 郑 岚 谢 松

(1 上海交通大学医学院附属瑞金医院中医科，上海，200025； 2 上海医药集团股份有限公司中央研究院，上海，201203)

葛芪颗粒的质量标准研究

吕玲玲1郑 岚1谢 松2

(1 上海交通大学医学院附属瑞金医院中医科，上海，200025； 2 上海医药集团股份有限公司中央研究院，上海，201203)

目的：建立葛芪颗粒的质量标准。方法：使用薄层色谱法对黄芩和川芎进行鉴别。采用高效液相色谱法(HPLC)分离并测定了黄芪甲苷的含量。色谱条件：Diamnosil C18柱(460 mm×250 mm,5 μm)，以乙腈：水(体积比34∶66)为流动相；蒸发光散射检测器。结果：此方法线性为0.35～7.02 μg，平均加样回收率为99.1%。结论：该方法操作较为简单、重复性好、专属性强，可作为葛芪颗粒的质量标准。

葛芪颗粒；黄芪甲苷；川芎；黄芩；薄层色谱法；高效液相色谱

胰岛素抵抗(IR)在中医理论体系中尚无相对应的中医病名，在辨证分型上，亦无标准可循。中心性肥胖患者存在IR已被大量临床研究和流行病学调查所证实。现代医学认为，2型糖尿病患者早、中期当属于中医“脾瘅”范畴，核心病机为中满内热，治疗应清热泻火、化浊降脂为主[1]。动脉粥样硬化(As)是一种慢性的、进展性的、系统性的疾病，中医认为其病机主要为气血津液的紊乱，脏腑功能失调而形成的，属痰证、瘀证等，故属本虚标实之证[2]。现代医家对As的治疗主要是从两大方面着手：一是清源，即清除体内之痰瘀等有形实邪；二是固本，即通过健脾、补肾、调肝等从而达到泻浊、降脂的主要目的[3]。这与糖尿病IR的中医病因病机方面有着相通之处，因而治法相似。

葛芪颗粒是上海交通大学医学院附属瑞金医院研制,由黄芪、黄芩，川芎、麦冬和葛根五味药材制成的中药复方制剂，具有益气养阴，活血清热的功效，临床主要用于治疗IR和As，体现了中医异病同治的特点，疗效确切。方中黄芪是葛芪颗粒的君药，其药用有效成分主要是黄芪甲苷。为了控制药品的质量，本试验选择黄芪甲苷作为含量测定指标，建立HPLC-ELSD法分离测定葛芪颗粒中黄芪甲苷含量的方法；且采用TLC法对处方中黄芩，川芎进行鉴别，从而建立葛芪颗粒质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-10AT高效液相色谱仪；Alltech蒸发光散射检测器；赛多利斯CP-225D型电子天平；KQ-100B型超声波清洗仪。

1.2 试剂 蒸馏水、乙腈为色谱纯，其余试剂分析纯。

1.3 试药 黄芪甲苷(含量测定用)，黄芩对照药材，川芎对照药材，均来源于中国药品生物制品检定所；葛芪颗粒，上海交通大学医学院附属瑞金医院研制，批号为：20150401。

2 方法与结果

2.1 黄芩薄层色谱鉴别 称取本品3 g，研细，加乙酸乙酯-乙醇(3∶1)混合溶液30 mL,加热回流30 min，放冷滤过，滤液减压蒸干，加乙醇5 mL溶解，作为供试品溶液；取空黄芩样品3 g，同法制备，得空白空黄芩样品溶液；另取黄芩对照药材1 g，同法制备，得对照药材溶液。吸取上述样品溶液、对照药材溶液各5 μL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以二甲苯-乙酸乙酯-乙醇-甲酸(10∶3∶0.8∶1)为展开剂，展开，取出晾干，紫外365 nm下检视。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；空白样品无干扰(图1)[3]。

图1 黄芩薄层鉴别图

注：从左到右依次为空白溶液、供试品溶液、对照药材溶液、供试品溶液和空白溶液

2.2 川芎薄层色谱鉴别 称取本品3 g，研细，加二氯甲烷20 mL,加热回流30 min，滤过，滤液水浴蒸干，用乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液；取空川芎样品3 g，同法制备，得空白空川芎样品溶液；另取川芎对照药材1 g，同法制成为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述样品溶液、对照药材溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8.5∶0.5)为展开剂，展开，取出晾干，紫外365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；空白样品无干扰(图2)。

2.3 黄芪甲苷含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Dianmonsil C18(规格4.6 mm×200 mm;5 μm)；流动相：乙腈-水(34∶66)；柱温：30 ℃；流速：0.8 mL/min；蒸发光散射检测器条件：雾化器温度48 ℃；漂移管温度为106 ℃；载气：氮气；气体流量为2.50/min。理论塔板数为2 500。

2.3.2 溶液的制备

2.3.2.1 供试品溶液的制备 取本品12 g,研细，混匀，精密称取9 g,放置索氏提取器中，用100 mL甲醇加热提取2 h，减压蒸干甲醇，残渣加水15溶解，用30 mL水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，20 mL/次，氨试液弃去，正丁醇液减压蒸干，用乙腈溶解并定容至5 mL量瓶，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。

2.3.2.2 空白样品溶液的制备 取空黄芪样品9 g，放置索氏提取器中，用100 mL甲醇加热提取2 h，同法制备。

2.3.2.3 对照品溶液制备 精密称取黄芪甲苷的对照品适量，加乙腈制成每1 mL含黄芪甲苷约0.35 mg的对照品溶液。

2.3.3 专属性试验 分别取上述3种溶液,按照2.3.1色谱条件进样10 μL，结果对照品溶液的保留时间分别约为16 min左右(见图I)，样品图谱在此保留时间16 min左右同样发现有峰(见图II)，空白样品在此保留时间16 min左右没有相同的峰(见图III)，阴性样品无干扰。

图2 川芎薄层鉴别图

注：从左到右依次为供试品溶液、对照药材溶液、供试品溶液、空白溶液和供试品溶液

图3 黄芪甲苷HPLC图谱

注：对照品(Ⅰ)、供试品(Ⅱ)和阴性样(Ⅲ)

2.3.4 精密度试验 精密量取同一对照品溶液10 μL，按2.3.1分离色谱条件进样测定6次，结果：黄芪甲苷峰面积的相对标准偏差为1.12%。

2.3.5 线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加乙腈制成每毫升含黄芪甲苷0.702 4 mg的对照品母液。分别精密移取对照品母液适量，加乙腈制成每毫升含黄芪甲苷0.035 mg、0.140 5 mg、0.351 2 mg、0.561 9 mg的对照品溶液。取上述不同浓度黄芪甲苷对照品溶液按2.3.1分离色谱条件进样10μL，以峰面积自然对数为纵坐标Y，进样量自然对数为横坐标X，做回归标准曲线，结果：黄芪甲苷：Y=6.309 7+0.792 2X r=0.999 9。表明黄芪甲苷在0.35～7.02 μg的范围内，线性关系良好。

表1 加样回收率试验

2.3.6 稳定性考察 取本品，按2.3.2溶液制备项下的方法制备供试品溶液，按2.3.1色谱条件分别在0、2、4、6、8 h内测定黄芪甲苷峰面积，结果峰面积相对标准偏差为0.77%。表明供试品溶液在0～8 h内稳定。

2.3.7 加样回收率试验 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加乙腈制成每1 mL含黄芪甲苷0.860 4 mg的对照品母液。取本品颗粒适量(批号为20150401，黄芪甲苷含量为0.191 5 mg/g)，研细，分别精密称取约4.5 g，精密加入对照品溶液适量，按2.3.2供试品溶液制备项下的方法制备，按2.3.1分离色谱条件测定，结果回收率良好。见表1。

2.3.8 重复性试验 取本品颗粒(批号为20150401),平行5份，按2.3.2供试品溶液制备项下的方法制备，按2.3.1分离色谱条件测定，结果平均含量为每克颗粒含黄芪甲苷0.191 5 mg，相对标准偏差为1.16%。

2.3.9 样品测定 取3批不同批号样品颗粒(批号分别为20150401，20150501和20150502)，按2.3.2供试品溶液制备项下的方法制备，按2.3.1分离色谱条件测定。见表2。

表2 3批样品黄芪甲苷含量

3 讨论

本试验曾经采用索氏提取、水浴加热回流提取、超声提取等不同提取方法和不同提取时间以及不同正丁醇提取次数来提取黄芪甲苷进行测定，含量有高低不同，最后选择本文章的索氏提取加热回流的方法，加样回收率和重复性符合要求。

黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法(TLC)[4-7]，高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)[8-11]及高效液相色谱蒸发光散射法(HPLC-ELSD)[12-17]，由于薄层扫描法(TLC)测定黄芪甲苷的含量重复性比较差，紫外检测的高效液相法则需要近200 nm的末端吸收波长测定，空白干扰大，故本试验采用及高效液相色谱蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定，此方法减少了误差，重复性较好，专属性较强，加样回收率满足了含量测定的要求。

在色谱条件的优化过程中，曾分别对不同流速：0.8～1.2 mL/min，不同流动相体系：乙腈-水(32∶68)、乙腈-水(37∶63)等做了系列比较考察，结果采用乙腈-水(34∶66)作为流动相，流速为0.8 mL/min，主峰与其他峰能够达到基线分离，保留时间在16 min左右，空白无干扰。因此，本研究采用乙腈-水(34∶66)作为流动相，流速为0.8 mL/min。

本试验曾对麦冬和葛根进行薄层鉴别TLC试验，结果空白样品均有干扰。

本文以高效液相色谱蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定葛芪颗粒中主要成分黄芪甲苷的含量，以薄层色谱法(TLC)对黄芩和川芎进行鉴别，方法分析条件易于操作，控制精确，3种待测成分分离度良好，空白均无干扰，重现性较好，为中药葛芪颗粒的质量标准的制订提供了依据。

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StudyonQualityStandardofGeqiGranules

Lyu Lingling1，Zheng Lan1，Xie Song2

(1TCMDepartment，RuijinHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200025，China; 2CentralResearchInstitute，ShanghaiPharmaceuticalsHoldingCo.，Ltd.Shanghai201203，China)

Objective:To develop the quality standard of Geqi granules.MethodsThe identification of Radix Scutellariae and Rhizoma Chuanxiong was used by TLC.Astragaloside IV was analyzed on an HPLC Diamnosil C18column (4.6 mm×250 mm，5 μm) using acetonitrile with water (34:66) as mobile phase，evaporative light-scattering detector.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.35-7.02 μg，and the average recovery was 99.1%.ConclusionThis method is simple，reliable with good specificity and reproducible，which can be used for the quality control of Geqi granule.

Geqi granules; Astragaloside IV; Radix Scutellariae; Rhizoma Chuanxiong; TLC; HPLC

吕玲玲(1986.04—)，女，硕士研究生，研究方向：中西医结合治疗肿瘤研究

郑岚(1969.07—)，主任医师，研究方向：中西医结合治疗老年病及肿瘤临床研究，E-mail:windy9453@126.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.10.051

(2017-09-25收稿 责任编辑：徐颖)