乳胶凝集法检测唾液酸化糖链抗原KL-6的性能观察及其对间质性肺病的诊断价值

吴 悦， 吴 炯， 王蓓丽， 郭 玮， 潘柏申

复旦大学附属中山医院检验科，上海 200032

·短篇论著·

乳胶凝集法检测唾液酸化糖链抗原KL-6的性能观察及其对间质性肺病的诊断价值

吴 悦， 吴 炯， 王蓓丽*， 郭 玮， 潘柏申

复旦大学附属中山医院检验科，上海 200032

目的探讨乳胶凝集法检测唾液酸化糖链抗原KL-6的性能，并评估KL-6对间质性肺病的诊断价值。方法检测44例表面健康人血清KL-6水平，验证试剂盒厂商提供的参考区间。比较间质性肺病(interstitial lung disease, ILD)组、其他肺病组和表面健康人组血清KL-6水平，通过绘制ROC曲线评价KL-6对ILD的诊断性能。结果44例表面健康人血清KL-6水平有43例在厂商提供的参考范围内(>90%)，通过验证。ILD组、其他肺病组和表面健康人组KL-6中位浓度分别为824(187.9～8 214)、246(101～2 129)、168(98～416) U/mL，差异有统计学意义(P<0.001)。以500 U/mL为临界值，KL-6诊断ILD灵敏度和特异度分别为75%、89.8% 。KL-6诊断ILD的ROC曲线下面积(AUC)为0.852(95%CI 0.793 ～ 0.911，P<0.000 1)。结论乳胶凝集法检测血清KL-6的性能符合要求；KL-6对ILD具有较好的诊断效能,是潜在的诊断指标。

KL-6;乳胶凝集法;间质性肺病；诊断价值

间质性肺病(interstitial lung disease, ILD)是一组疾病的统称，以多种形式的肺间质炎症和纤维化为特征，包括特发性间质性肺炎、胶原血管病引起的间质性肺炎、过敏性肺炎、放射性肺炎、急性呼吸窘迫综合征等。ILD多为散发，见于各年龄组，以40～70岁较多见，各国ILD发病率为(20～40)/10万人[1-3]。

临床上诊断ILD常用高分辨率计算机断层扫描、支气管镜检查和(或)肺活检来确诊ILD，用肺功能检测来监控疾病活动性和ILD患者预后。然而，这些检查需要特定的医疗设备，且会给患者带来较强的不适感。而目前国内ILD实验室检查中尚缺乏具有高灵敏度(>80%)和高特异度(>90%)的指标[4]。

KL-6是一种唾液酸化糖链抗原，属于Ⅰ类跨膜高相对分子质量黏蛋白(MUC)，主要由增殖、受激发或受损的Ⅱ型肺泡上皮细胞分泌，对判断Ⅱ型肺泡上皮细胞的功能有特异性。乳胶凝集法检测KL-6易操作、成本低、重复性高、侵入性低。目前国内鲜有用乳胶凝集法检测血清KL-6的性能及其对ILD诊断价值的相关研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年3月至2016年7月在复旦大学附属中山医院经病理、影像和临床确诊为ILD的患者80例，作为ILD组。其中，男性38例，女性42例；年龄36～89岁，平均(64.83±16.45)岁。

选择同期在复旦大学附属中山医院住院的肺癌(23例)、肺结节(31例)、非间质性肺炎(14例)、肺隐球菌病(4例)、肺结核(4例)、肺栓塞(2例)、支气管炎(5例)患者共83例作为其他肺病组。其中，男性47例，女性36例；年龄26～85岁，平均年龄(57.14±17.24)岁。排除ILD可能，且年龄、性别的分布情况与ILD组相匹配。

选择2016年3月在复旦大学附属中山医院体检中心排除肺部疾病进行体检的健康人44例，作为表面健康人组。其中，男性24例、女性20例；年龄35～82岁，平均(55.14±26.24)岁。排除ILD病史，年龄、性别与疾病组相匹配。

1.2 方 法

1.2.1 检测方法 血清KL-6检测采用唾液酸化糖链抗原检测试剂盒(乳胶凝集法，批号：C002)以及Hitachi型全自动7600生化分析仪。步骤如下：使用惰性分离胶真空管，采集各组患者静脉血5 mL，室温下自然凝集10 min，4～8℃、7 610×g离心10 min。新鲜标本于2 h内检测。批间实验使用的混合标本于-80℃保存，检测前于15～30℃解冻，并于24 h内检测。

1.2.2 生物参考区间的验证 统计44例表面健康人的血清KL-6检测结果。根据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)C28-A2标准，如果检测结果不超过10%在厂家建议的参考区间以外，则厂商提供的参考区间通过验证。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0和GraphPad Prism 5进行数据分析。3组间KL-6水平的比较采用Mann-Whitney检验。利用受试者工作特征曲线 (receiver operating characteristic curve，ROC)评估KL-6对ILD的诊断价值。检验水准(α)为0.05。

2 结 果

2.1 生物参考区间验证 44例表面健康人中，只有1例KL-6的检测值不在试剂盒提供的生物参考区间内(105～435 U/mL)，符合率为97.7%(图1)，说明试剂盒提供的生物参考区间结果可采用。

图1 表面健康人血清KL-6浓度的分布

2.2 3组KL-6浓度比较 207例入组对象中，男性109例，女性98例。ILD组、其他肺病组和表面健康人KL-6中位浓度分别为824(187.9～8 214)、246(101～2 129)、168(98～416)U/mL，差异有统计学意义(图1)。ILD组KL-6水平大于其他两组(P<0.001)，其他肺病组KL-6水平大于表面健康人组(P<0.01)。

图2 3组人群KL-6的浓度比较

2.3 诊断价值评估 KL-6诊断ILD的ROC曲线下面积为0.852。以500 U/mL为临界值，KL-6诊断ILD的灵敏度和特异度分别为75.0%、89.8%(图3)。

图3 KL-6诊断ILD的ROC曲线

3 讨 论

乳胶凝集法检测KL-6试剂盒厂商推荐的KL-6浓度的参考区间是依据171例日本表面健康志愿者的检测结果所建立的，但参考范围会随地区、人种及年龄等改变。本研究中，中国人群的KL-6参考区间与日本人群相近，厂商提供的参考区间得到验证。通过比较ILD组、其他肺病组与表面健康人组得出：KL-6对ILD的诊断，对ILD与非间质性肺病的鉴别诊断具有一定的参考价值。

ILD以弥漫性肺实质、肺泡炎和间质纤维化为基本病理改变，其种类多样。目前缺乏理想的ILD血清学标志物。KL-6主要由Ⅱ型肺泡上皮细胞分泌，定位于Ⅱ型上皮细胞、支气管上皮细胞的细胞质和细胞膜，部分细支气管基底细胞、Clara细胞的细胞质，支气管腺细胞也有表达。当出现ILD时，Ⅱ型肺泡上皮细胞大量增殖，释放大量KL-6入血，导致血清KL-6升高[5]。本研究中，ILD组患者血清KL-6大于其他两组(P<0.01)。

除KL-6外，常用的ILD血清学标志物还有SP-A、SP-D、MCP-1。本研究中KL-6诊断ILD的AUC为0.852，优于有关研究[6]中SP-A、SP-D、MCP-1的诊断效能。有研究表明，肺组织的纤维化损伤程度越严重，KL-6的水平越升[7]，且ILD患者血清及肺泡灌洗液中KL-6水平较健康人和其他呼吸系统疾病患者明显升高[8]。在ILD中，KL-6不仅可作为诊断的参考指标，而且对评估疾病活动性和预后具有重要作用[9]。

此外，细菌性肺炎患者血清KL-6水平不会升高[10]，但细菌性肺炎及肺结核患者血清SP-A和SP-D升高[11]，表明KL-6诊断ILD有一定优越性。但是，肺纤维化感染(军团菌肺炎、严重肺结核、卡氏肺孢子虫肺炎等)和恶性肿瘤患者血清KL-6也会升高[12-13]。

综上所述，血清 KL-6在检测ILD中具有高灵敏度和特异度，是ILD诊断、监测和预后较好的指标，具有较高的临床应用价值，但本研究并未对治疗前后的KL-6水平变化进行分析，无法探讨疾病活动度与KL-6的相关性。此外，本研究对其他非ILD组未进行细分且样本量较小。因此，不同阶段ILD患者中的血清KL-6水平有待进一步扩大样本量进行研究。

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Efficiency of latex agglutination method in detecting Krebs von den Lungen-6 and its diagnostic value in patients with interstitial lung disease

WU Yue, WU Jiong, WANG Bei-li*, GUO Wei, PAN Bai-shen

Department of Clinical Laboratory, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China

Objective： To explore the detect in efficiency of Krebs von den Lungen-6 (KL-6) by latex agglutination method and evaluate its diagnostic value in patients with interstitial lung disease.MethodsThe serum KL-6 levels of 44 healthy subjects were detected, and the reference interval provided by the kit manufacturer was verified. Serum KL-6 levels were compared between the ILD group, the other lung diseases group and the healthy subjects group. The diagnostic value of KL-6 for interstitial lung disease (ILD) was evaluated by drawing the ROC curve.ResultsThe serum KL-6 level of 43 in 44 healthy people (>90%) was within the reference range provided by the manufacturer. The median concentrations of KL-6 in the ILD group, the other lung diseases group and the healthy subjects group were 824 (187.9-8 214), 246 (101-2 129), and 168 (98-416) U/mL, respectively, and the differences were statistically significant (P<0.001). The sensitivity and specificity of KL-6 in diagnosis of ILD was 75% and 89.8%, respectively, with 500 U/mL as the cutoff value. The area under the ROC curve (AUC) of KL-6 for ILD diagnosis was 0.852 (95% CI 0.793-0.911,P<0.0001).ConclusionsThe latex agglutination method for detecting serum KL-6 has good performance and KL-6 is a potential diagnostic index of ILD.

Krebs von den Lungen-6; latex agglutination method; interstitial lung disease； diagnostic value

2017-03-27接受日期2017-07-06

上海市卫生和计划生育委员会重要薄弱学科建设项目(2015ZB0201). Supported by Key Developing Disciplines of Shanghai Municipal Commission of Heath and Family Planning (2015ZB0201).

吴 悦, 技师. E-mail: wu.yue@zs-hospital.sh.cn

*通信作者(Corresponding author). Tel: 021-64041990-2376, E-mail:wang.beili1@zs-hospital.sh.cn

10.12025/j.issn.1008-6358.2017.20170253

R -331

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[本文编辑] 姬静芳