带状疱疹患者疱液及外周血病毒载量与血浆S100β和神经元特异性烯醇化酶水平的研究

张馨月 钟婷婷 钟建桥 许飏

646000四川泸州，西南医科大学附属医院皮肤科（第一作者现在重庆医科大学附属大学城医院皮肤科，401331）

·论著·

带状疱疹患者疱液及外周血病毒载量与血浆S100β和神经元特异性烯醇化酶水平的研究

张馨月 钟婷婷 钟建桥 许飏

646000四川泸州，西南医科大学附属医院皮肤科（第一作者现在重庆医科大学附属大学城医院皮肤科，401331）

目的 检测带状疱疹患者疱液、血液水痘-带状疱疹病毒（VZV）DNA载量及血浆S100β蛋白、神经元特异性烯醇化酶（NSE）浓度变化，并探讨其相关性。方法 在西南医科大学附属医院皮肤科收集50例急性期带状疱疹住院患者疱液、治疗前后外周血标本和20例健康对照外周血标本。采用实时荧光定量PCR检测疱液及外周血病毒载量，ELISA检测血浆S100β蛋白、NSE浓度。结果 50例带状疱疹患者疱液中均检测到VZV；治疗前18例、治疗后5例血液中测出VZV。对照组血液中均未测出VZV。急性期带状疱疹患者疱液病毒载量与血浆S100β、NSE含量均呈正相关（r=0.535、0.430，均P＜0.05）。治疗前血VZV阳性患者较血VZV阴性患者血浆S100β、NSE水平升高（均P＜0.05），血VZV DNA载量与血浆S100β、NSE均呈正相关（r=0.711、0.645，均P＜0.05）。结论 带状疱疹患者可检测出VZV DNA，且急性期带状疱疹患者疱液、治疗前血VZV DNA载量越高，血浆S100β、NSE水平越高。

带状疱疹；病毒载量；S100蛋白质类；磷酸丙酮酸水合酶；神经损伤；S100β

带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒（VZV）感染引起的以神经炎症、皮肤疱疹为特征的皮肤病，可伴有不同程度的神经损伤。S100、神经元特异性烯醇化酶（NSE）是早期评估神经损伤及预后的重要因子［1⁃2］，但目前未见带状疱疹与S100β和NSE的研究。研究表明，VZV病毒载量与带状疱疹临床表现的严重程度有关，但是否与神经损伤也存在相关性，目前尚不清楚。我们通过检测急性期带状疱疹患者疱液、血液病毒载量及血浆S100β和NSE的变化，探讨病毒载量与血浆S100β、NSE的关系，为临床早期评估及预防带状疱疹神经损伤提供依据。

对象与方法

一、对象

2014年5月至2014年10月，西南医科大学附属医院皮肤科病房住院的带状疱疹患者50例，设为带状疱疹组，其中男26例，女24例，年龄33～83（59.61±13.88）岁。20例本院体检中心体检健康者设为对照组，其中男10例，女10例，年龄42～61（52.55±5.69）岁。其中带状疱疹组入组标准为：①具有典型的临床症状及体征，符合带状疱疹诊断标准［3］；②具有疱壁完整、疱液总量≥200 μl的水疱；③患者病程＜7 d，发病后未经任何治疗。排除标准：①合并其他引起中枢或周围神经损伤的疾病的患者；②妊娠及哺乳期妇女；③合并严重的心、肺等系统性疾病的患者；④其他原因导致免疫力低下的患者，如恶性肿瘤、HIV感染、红斑狼疮等自身免疫性疾病患者，以及长期应用免疫抑制剂者；⑤精神病患者，或既往有精神病史和精神病家族史的患者；⑥住院时间不够、住院期间发生其他重大事件（如过敏性休克、心跳骤停、严重感染等）、未抽取治疗后血液标本或未完成随访等；⑦近期有消化道溃疡、出血、精神症状及严重高血压、高血糖或拒绝使用的个别患者；⑧两次及以上的复发性带状疱疹、播散性带状疱疹、泛发性带状疱疹等特殊带状疱疹患者。两组年龄、性别差异均无统计学意义。

本研究通过西南医科大学附属医院医学伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

带状疱疹组患者入院后口服伐昔洛韦0.3 g，每日2次，共9 d；维生素B1，每日100 mg肌内注射，共14 d；维生素B12每日0.5 mg肌内注射，共14 d；加巴喷丁每晚300 mg（据疼痛程度及反应调整剂量），共14 d。配合皮损处局部处理及红光治疗，泼尼松每日30 mg口服共7 d，并辅以免疫调节剂及活血止痛中药联合治疗，14 d为1个疗程。

二、主要试剂

人S100β蛋白酶联免疫检测试剂盒购自北京诚林生物科技有限公司，人NSE酶联免疫检测试剂盒购自北京诚林生物科技有限公司，VZV核酸测定试剂盒（PCR⁃荧光探针法）购自上海之江生物科技有限公司。

三、方法

1.疱液采集：经无菌消毒后，采集患者入院第1天的疱液（不少于200 μl）于微量离心管，置于-80℃保存待检。

2.血液采集及处理：分别用含乙二胺四乙酸（EDTA）的一次性采血管于治疗前、治疗14 d后无菌采集带状疱疹患者及对照组肘静脉血8 ml，提取血浆和外周血淋巴细胞置于EP管内，放入-80℃冰箱冻存待检。

3.疱液及外周血淋巴细胞VZV DNA载量检测：采用实时荧光定量PCR法检测疱液及外周血淋巴细胞VZV DNA载量，操作步骤参照试剂盒说明书进行。

4.血浆S100β蛋白和NSE检测：应用ELISA试剂盒检测血浆S100β蛋白和NSE，操作步骤参照试剂盒说明书进行。

四、统计分析

用统计学软件SPSS19.0进行统计描述与分析。计量资料采用±s表示，资料组间比较采用t检验。Pearson相关系数用于描述指标间的相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、VZV DNA载量表达比较

50例带状疱疹患者疱液均检测出VZV DNA，载量为（374 879.34±117 681.59）拷贝∕ml。治疗前18例（36%）外周血VZV DNA阳性，载量为（18 974.45± 28 301.88）拷贝∕ml；治疗后5例（10%）阳性，载量为（239.91±872.25）拷贝∕ml。治疗前疱液VZV DNA载量高于治疗前、后外周血VZV DNA载量（Z值分别为-8.762，-9.039，均P＜0.05）。外周血治疗前VZV DNA载量较治疗后高（Z值为-3.724，P＜0.05）。18例治疗前外周血VZV DNA阳性的带状疱疹患者中，血与疱液VZV DNA载量呈正相关（r=0.631，P＜0.05）。见图1。对照组血液中均未测出VZV。

图1 18例带状疱疹患者治疗前外周血与疱液水痘-带状疱疹病毒（VZV）DNA载量关系散点图

二、血浆S100β、NSE水平比较

血VZV阳性带状疱疹组治疗前血浆S100β、NSE水平均较血VZV阴性带状疱疹患者高（P＜0.05），见表1。

表1 治疗前血水痘-带状疱疹病毒（VZV）阳性与阴性的带状疱疹患者血浆S100β和神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平比较（ng∕L，±s）

表1 治疗前血水痘-带状疱疹病毒（VZV）阳性与阴性的带状疱疹患者血浆S100β和神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平比较（ng∕L，±s）

分组血VZV阳性患者血VZV阴性患者t值P值例数18 32 S100β 173.25±19.12 155.07±20.14 3.119＜0.05 NSE 171.127±14.885 155.162±20.869 3.136＜0.05

三、VZV DNA载量与治疗前S100β、NSE的相关性分析

1.疱液VZV DNA载量与治疗前S100β、NSE的相关性：50例带状疱疹患者疱液VZV DNA载量与治疗前S100β、NSE呈正相关（图2，3），相关系数r值分别为0.535、0.430，均P＜0.05。

图2 50例带状疱疹患者疱液水痘-带状疱疹病毒DNA载量与治疗前血浆S100β关系散点图

图3 50例带状疱疹患者疱液水痘-带状疱疹病毒DNA载量与治疗前血浆神经元特异性烯醇化酶（NSE）关系散点图

2.治疗前外周血VZV DNA载量与S100β、NSE的相关性：治疗前外周血VZV DNA阳性的18例带状疱疹患者血VZV DNA载量与血浆S100β、NSE呈正相关，相关系数r值分别为0.711、0.645，均P＜0.05。见图4，5。

讨论

本研究50例患者中，治疗前后血中VZV DNA阳性率分别为36%和10%，表明VZV并不仅是沿神经纤维移至皮肤，同时也可局部扩散入血，导致部分患者治疗前出现VZV DNA血症，甚至治疗后遗留VZV DNA血症。带状疱疹患者疱液与血VZV DNA载量具有一定的相关性，疱液中病毒载量越高，血VZV DNA越高。但并非所有疱液VZV DNA载量高者血中均可测出VZV DNA。故引起带状疱疹患者出现VZV DNA血症的原因除了与疱液VZV DNA载量高有关外，还可能有其他因素，如年龄、部位、免疫力、皮损面积、糖尿病以及合并肿瘤等［4］，需扩大样本量进一步研究。

研究表明，血浆S100β蛋白的水平可初步反映神经损伤的严重程度，S100β含量越高，神经损伤越重，预后越差［2，5］。NSE作为神经元的标志酶，在绝大多数神经损伤的疾病中神经元和神经胶质细胞均会有不同程度的损伤［6］，两者同时检测，可增加敏感性和特异性。

本研究显示，治疗前血VZV阳性患者血浆S100β、NSE均较阴性患者高，提示当患者出现VZVDNA血症时，神经损伤程度可能更重。临床上应特别加强这类患者的抗病毒治疗和神经损伤的监测和随访，如脑电图、CT、MRI以及脑脊液等检查。

图4 18例带状疱疹患者治疗前外周血水痘-带状疱疹病毒DNA载量与血浆S100β关系散点图

图5 18例带状疱疹患者治疗前外周血水痘-带状疱疹病毒DNA载量与血浆神经元特异性烯醇化酶（NSE）关系散点图

编后记 本文带状疱疹患者均应用了核苷类抗病毒药和1周糖皮质激素。关于糖皮质激素在带状疱疹治疗中的应用，目前皮肤科学界有不同观点。一般较公认的观点是：高龄带状疱疹患者、有基础疾病或免疫受损（如应用免疫抑制剂）或重症带状疱疹（疼痛剧烈、皮损面积大或有出血坏死等表现）可以在充分抗病毒基础上，根据病情短期使用系统性糖皮质激素。

［1］Thelin EP,Johannesson L,Nelson D,et al.S100B is an important outcome predictor in traumatic brain injury［J］.J Neurotrauma, 2013,30（7）:519⁃528.DOI:10.1089∕neu.2012.2553.

［2］Beer C,Blacker D,Bynevelt M,et al.Systemic markers of inflammation are independently associated with S100B concentration:results of an observational study in subjects with acute ischaemic stroke［J］.J Neuroinflammation,2010,7:71. DOI:10.1186∕1742⁃2094⁃7⁃71.

［3］赵辨.中国临床皮肤病学［M］.江苏：江苏科学技术出版社, 2010:394⁃398.

［4］Quinlivan ML,Ayres KL,Kelly PJ,et al.Persistence of varicella⁃zoster virus viraemia in patients with herpes zoster［J］.J Clin Virol,2011,50（2）:130⁃135.DOI:10.1016∕j.jcv.2010.10.014.

［5］Thelin EP,Johannesson L,Nelson D,et al.S100B is an important outcome predictor in traumatic brain injury［J］.J Neurotrauma, 2013,30（7）:519⁃528.DOI:10.1089∕neu.2012.2553.

［6］Undén J,Ingebrigtsen T,Romner B.Management of minor head injuries with the help of a blood test.S100B analysis can reduce the number of CT examinations and patient admissions［J］. Lakartidningen,2008,105（24⁃25）:1846⁃1848.

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Correlation of plasma levels of S100β protein and neuron⁃specific enolase with viral load in vesicle fluid and peripheral blood of patients with herpes zoster

Zhang Xinyue,Zhong Tingting,Zhong Jianqiao,Xu Yang
Department of Dermatology,The Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou 646000, Sichuan,China（the current affiliation of the first author was Department of Dermatology,University⁃Town Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 401331,China）

Xu Yang,Email:xxff2007@163.com

Objective To detect the varicella⁃zoster virus（VZV）DNA load in vesicle fluid and peripheral blood,as well as plasma levels of S100β protein and neuron⁃specific enolase（NSE）in patients with herpes zoster before and after treatment,and to explore their correlations.Methods Vesicle fluid samples were collected before treatment,and peripheral blood samples before and after treatment from 50 inpatients with acute herpes zoster in the Department of Dermatology of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,and peripheral blood samples were also obtained from 20 healthy controls.Real⁃time fluorescence⁃based quantitative PCR（qRT⁃PCR）was performed to determine the viral load in the vesicle fluid and peripheral blood samples,and enzyme⁃linked immunosorbent assay（ELISA）to detect the plasma levels of S100β protein and NSE.Results VZV DNA was present in all the vesicle fluid samples,as well as in peripheral blood samples from 18 patients before treatment and 5 patients after treatment,but not found in any of the healthy controls.Positive correlation was found between the viral load in vesicle fluid and plasma levels of S100β protein and NSE（r=0.535,0.430,respectively,both P＜0.05）in the patients with acute herpes zoster.Before treatment,patients with VZV DNA in peripheral blood showed significantly increased plasma levels of S100β protein and NSE compared with those without（both P＜0.05）,and the viral load in peripheral blood was positively correlated with plasma levels of S100β protein and NSE（r= 0.711,0.645,respectively,both P＜0.05）.Conclusion VZV DNA is present in some patients with herpes zoster,and increased VZV DNA loads in the vesicle fluid and peripheral blood are related to elevated plasma levels of S100β protein and NSE before treatment.

Herpes zoster;Viral load;S100 proteins;Phosphopyruvate hydratase;Nerve injury; S100β

许飏，Email：xxff2007@163.com

10.3760∕cma.j.issn.0412⁃4030.2017.02.009

四川省卫生计生委科研课题（16PJ556）；西南医科大学附属医院课题（12306）

Fund programs:Scientific Research Project of Health and Family Planning Commission of Sichuan Province（16PJ556）;Project of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University（12306）

2016⁃03⁃18）

（本文编辑：尚淑贤）