婴幼儿过敏性结肠炎临床特点及其肠黏膜中嗜酸粒细胞阳离子蛋白的表达

徐俊杰 刘秀美 张利红 魏绪霞 杜庆霞

山东大学齐鲁儿童医院/济南市儿童医院1.消化科，2.病理科（山东济南 250022）

婴幼儿过敏性结肠炎临床特点及其肠黏膜中嗜酸粒细胞阳离子蛋白的表达

徐俊杰1刘秀美2张利红2魏绪霞1杜庆霞1

山东大学齐鲁儿童医院/济南市儿童医院1.消化科，2.病理科（山东济南 250022）

目的研究婴幼儿过敏性结肠炎的临床特征及其肠黏膜组织中嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）的表达。方法回顾分析2011年9月—2014年2月收治的24例过敏性结肠炎患儿的临床资料；采用免疫组织化学染色法检测和比较24例过敏性结肠炎患儿肠黏膜及16例幽门螺杆菌感染患儿的胃和十二指肠黏膜组织，以及18例先天性巨结肠患儿肠切除术后近端正常的肠黏膜中ECP表达的差异。结果24例过敏性结肠炎中男15例、女8例，婴儿23例，＜6月龄20例；临床表现均有血便，其次为腹泻15例。1例有湿疹，3例有药物过敏。内镜下病变主要累及乙状结肠（12例）及直肠（11例），最常表现为黏膜红斑（21例）、痘疹样结节（18例）、糜烂（3例）及溃疡（3例）等；组织病理学表现为黏膜嗜酸性粒细胞浸润。过敏性结肠炎患儿肠黏膜ECP阳性嗜酸性粒细胞个数为42（30～60），幽门螺杆菌感染患儿为18（15～23），先天性巨结肠患儿为25.5（14～35），三组间差异有统计学意义（H=28.14，P＜0.001）。结论儿童过敏性结肠炎以婴幼儿多见，内镜下主要表现为黏膜红斑及痘疹样结节。肠黏膜组织中ECP阳性嗜酸性粒细胞数增加是过敏性结肠炎的特征性表现。

过敏性结肠炎； 嗜酸粒细胞阳离子蛋白； 儿童

过敏性结肠炎（eosinophilic/allergic colitis）又称食物蛋白性直肠结肠炎（food protein-induced proctocolitis，FPIPC）是非IgE途径介导的食物过敏性胃肠疾病的一种，是以直肠、结肠炎性改变为主要特点的一类疾病[1]。临床以婴幼儿多见，常表现为腹泻、便血，大多发生于纯母乳喂养的婴儿，以生后6个月以内的婴儿发病最常见[2,3]。临床常被误诊为感染性腹泻，被反复给予抗生素治疗。随着过敏性结肠炎的发病率逐渐增高，近年来逐渐受到重视。

目前对于食物蛋白性直肠结肠炎的诊断尚无非侵入性的特异性的检查手段，现有实验室检查方法的灵敏度和特异度均不高。诊断主要依靠病史询问、可疑食物的回避和引入后相同症状再发等判断。嗜酸性粒细胞的激活在过敏性结肠炎发病过程中发挥重要的作用，其激活后可释放出多种毒性蛋白，嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）是其中的一种，被认为是嗜酸性粒细胞活化的标志[4]。因此，检测肠黏膜组织中ECP的表达情况对于食物蛋白性直肠结肠炎的诊断可能有一定的参考价值。

本研究通过对确诊的24例婴幼儿过敏性结肠炎患儿的临床资料的回顾性分析来探讨过敏性结肠炎的临床特点。采用免疫组织化学染色的方法检测24例患儿肠黏膜组织中ECP的表达情况，并与16例幽门螺杆菌感染患儿的胃黏膜组织中ECP的表达及18例先天性巨结肠患儿肠切除术后近端正常的肠黏膜组织中ECP的表达进行比较，以探讨过敏性结肠炎患儿肠黏膜组织中ECP的表达。

1 临床资料

选取济南市儿童医院2011年9月—2014年2月收治的24例过敏性结肠炎患儿，男18例、女6例。过敏性结肠炎诊断依据2011年美国专家组提出的最新指南[5]及Odze等[6]提出的病理学诊断标准，并参考国内既往研究的诊断标准[7]，所有入选患儿均经临床和/或结肠镜及病理检查证实；发病年龄1个月3天～6岁，中位年龄2个月28天，其中6月龄以内婴儿20例。选取同期收治的16例幽门螺杆菌感染的患儿，男7例、女9例，中位年龄7岁6个月；获得这部分患儿的胃黏膜组织。选取同期收治的18例先天性巨结肠患儿，男12例、女6例，中位年龄2个月11天；获得这部分患儿肠切除术后近端正常的肠黏膜组织。

所有患儿均在全身麻醉下行电子结肠镜及胃镜检查（Olympus-GIF260），并获取胃肠黏膜组织送病理检查及行ECP免疫组化染色并进行比较。

过敏性结肠炎以1岁以下婴幼儿多见，共23例（95.8%），其中6个月以下20例（83.3%）。23例中13例患儿为纯母乳喂养，5例患儿为混合喂养。24例患儿均有血便（100%），表现为鲜红色血丝、暗红色血块或者血水样便；其次表现为腹泻15例（62.5%），为稀糊状或稀水样，每日大便数次至十余次不等。部分患儿有特应性体质病史，其中湿疹1例，药物过敏3例。

24例过敏性结肠炎患儿的内镜下病变主要累及乙状结肠（12例）及直肠（11例），最常见的表现为黏膜红斑（21例）、痘疹样结节（18例）、糜烂（3例）及溃疡（3例）等，少数患儿镜下黏膜正常（1例），见图1。

图1 结肠镜下黏膜改变

ECP免疫组织化学染色采用二步法。免疫组织化学检测试剂盒购自中杉金桥。肠黏膜病理标本进行常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水化组织切片后用枸橼酸钠进行热修复，3%的H2O2去离子水孵育10 min，磷酸盐缓冲盐水(PBS0.01 mol/L，pH值7.2～7.4)漂洗3次，每次2 min；向玻片滴加约100 μL一抗ECP（购自英国Abcam公司，1∶125）25℃孵育2 h，PBS漂洗3次，每次2 min；滴加试剂1（聚合物增强剂）25℃孵育20 min，PBS漂洗3次，每次2 min；滴加试剂2（酶标抗兔IgG聚合物）25℃孵育20 min，PBS漂洗3次，每次2 min；3,3-二氨基联苯胺显色、苏木素-伊红（HE）复染后镜下观察。组织病理学表现为黏膜不同部位嗜酸性粒细胞的浸润，同时以嗜酸性粒细胞的浸润（≥60个/10HP或≥20个/HP）为病理组织学判定标准。见图2。

图2 过敏性结肠炎患儿的组织病理改变(×400)

过敏性结肠炎患儿ECP阳性的嗜酸性粒细胞个数为42（30～60），幽门螺杆菌感染患儿为18（15～23），先天性巨结肠患儿为25.5（14～35）；经Kruskal-Wallis检验发现，三组患儿ECP阳性的嗜酸性粒细胞个数差异有统计学意义（H=28.14，P＜0.001），过敏性结肠炎患儿嗜酸性粒细胞个数最多。各组ECP免疫组化染色结果见图3。

2 讨论

图3 ECP免疫组化染色（×400）

过敏性结肠炎是婴儿食物蛋白过敏的常见表现，大约一半的患儿为纯母乳喂养的婴儿[8]。1982年，Lake等[9]首次报道6例以便血为主要症状的过敏性结肠炎患儿，随后相关报道逐渐增多，但其具体发病机制尚不十分清楚。目前公认的是食物蛋白摄入导致机体的免疫反应，引起结肠与直肠继发性的炎症改变[10]，是非IgE介导的食物过敏性疾病之一。

本组24例婴幼儿过敏性结肠炎患儿的发病年龄以1岁以下多见，共23例，其中6个月以下20例，这可能与婴幼儿胃肠道功能发育尚不完善有关，其胃肠道屏障及黏膜的免疫机制尚未完善。这些患儿临床表现以腹泻及血便最常见，部分患儿有特应性体质病史，其中湿疹1例，药物过敏3例，与文献报道相一致[7]。这些症状不具有特异性，需与儿童肠炎鉴别，避免反复使用抗生素。

本组24例过敏性结肠炎患儿镜下主要表现为肠黏膜痘疹样结节、黏膜红斑、糜烂及溃疡等，只有1例患儿镜下黏膜正常，主要累及直肠及乙状结肠；组织病理表现为固有层嗜酸性粒细胞的浸润。因ECP染色能同时显示未完全脱颗粒的嗜酸粒细胞和脱颗粒后失去正常细胞形态的嗜酸粒细胞，故与普通HE染色的组织相比能更灵敏地区分嗜酸粒细胞，并可以通过观察嗜酸粒细胞脱颗粒时周围组织变化帮助区分嗜酸粒细胞是否参与炎症反应。过敏性结肠炎组ECP阳性的嗜酸性粒细胞个数高于幽门螺杆菌感染组及先天性巨结肠组。因此，肠黏膜组织中ECP表达增加是过敏性结肠炎不同于一般感染的一个特征性表现，对于过敏性结肠炎的诊断有一定的参考价值。ECP参与过敏性结肠炎的具体机制目前尚不明确，作为嗜酸性粒细胞脱颗粒产生的毒性蛋白之一，可能参与破坏肠黏膜的屏障功能及通透性。

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Clinical characteristics of allergic colitis and the expression of eosinophil cationic protein in intestinal mucosa in infants

XU Junjie1, LIU Xiumei2, ZHANG Lihong2, WEI Xuxia1, DU Qingxia1
(1.Department of Gastroenterology, 2.Department of Pathology, Qilu Pediatric Hospital of Shandong University, Jinan 250022, Shangdong, China)

Objectives To explore the clinical features of allergic colitis and the expression of eosinophil cationic protein(ECP) in intestinal mucosa in infant and young children.MethodsThe clinical data of 24 cases of allergic colitis treated from September 2011 to February 2014 were analyzed retrospectively.Immunohistochemical staining was used to detect expressions of ECP in intestinal mucosa in 24 cases of allergic colitis, gastric and duodenal mucosa in 16 cases of helicobacter pylori infection and proximal normal intestinal mucosa in 18 cases of postoperative resection of congenital megacolon, and the results were compared.ResultsIn the 24 subjects (15 males and 8 females) with allergic colitis,.they were infants except for 1 subject,and 20 subjects were ＜6 months old.All of them had bloody stool, in which there were 15 cases of diarrhea, 1 case of eczema and 3 cases of drug allergy.The endoscopic lesions were mainly showed in the sigmoid colon (12 cases) and the rectum (11 cases).The most common manifestations were mucosal erythema (21 cases), pox like nodules (18 cases), erosions (3 cases), and ulcers(3 cases).Histopathological findings were eosinophilic infiltration of the mucosa.The number of eosinophils in intestinal mucosa was 42 (30～60) in patients with allergic colitis whose ECP was positive, 18 (15～23) in patients withHelicobacter pyloriinfection and 25.5 (14～35) in patients with congenital megacolon children, and the differences are statistically significant mong three groups (H=28.14，P＜0.001).ConclusionsAllergic colitis is more common in infants and young children.The main endoscopic findings are mucosal erythema and eruption like nodules.In addition, the increase of ECP positive eosinophils in intestinal mucosa is the characteristic manifestation of allergic colitis.

allergic colitis; eosinophil cationic protein; child

doi∶10.3969/j.issn.1000-3606.2017.10.006

2016-12-13)

(本文编辑：邹 强)