竺黄醒脑胶囊抗血栓形成作用的实验研究※

李宝芬 闫国强 董晶晶

(河北省沧州中西医结合医院中药制剂室，河北 沧州 061001)

竺黄醒脑胶囊抗血栓形成作用的实验研究※

李宝芬 闫国强 董晶晶

(河北省沧州中西医结合医院中药制剂室，河北 沧州 061001)

目的研究竺黄醒脑胶囊对血栓形成的抑制作用，为临床应用提供理论依据。方法采用角叉菜胶致大鼠血栓形成模型和实验性脑血栓形成模型，分别观察竺黄醒脑胶囊的相关药理作用。结果大鼠皮下注射角叉菜胶后，多数大鼠的尾尖部在24 h内出现黯红色血栓形成区，并逐渐向尾根部扩大，24～48 h颜色加深变黑，且与正常尾部分界明显。模型1组大鼠黑尾长度较正常1组增加(P<0.05)，说明造模成功。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组黑尾长度均低于模型1组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型1组大鼠血液流变学指标均较正常1组升高(P<0.05)，说明造模成功。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组血液流变学指标均低于模型1组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量2组及阿司匹林2组吸光度(OD)/脑质量均低于模型2组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小剂量2组OD/脑质量高于阿司匹林2组(P<0.05)，竺黄醒脑胶囊中、大剂量2组及阿司匹林2组OD/脑质量两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论竺黄醒脑胶囊对血栓形成有一定的抑制作用，研究结果为临床用药提供了必要的药理学依据。

血栓形成；药物疗法；中药疗法；胶囊；动物，实验

竺黄醒脑胶囊是河北省沧州中西医结合医院脑病科应用多年的方剂，由天竺黄、石菖蒲、清半夏、郁金、地龙、川芎、赤芍、薏苡仁等组成，具有涤痰散浊、活血祛毒功效，用于痰浊内蕴、瘀血阻络所致半身不遂，舌强语謇，肢体麻木，口眼歪斜，体胖有痰，或伴见昏沉不适，视物模糊，纳差恶心，口中黏腻，舌质黯红、苔黄腻、脉弦滑或弦涩等症；脑梗死或脑出血恢复期见上述证候者。经多年临床应用，取得了较好的临床疗效。本实验以角叉菜胶致大鼠血栓形成和实验性脑血栓形成为模型，观察竺黄醒脑胶囊抑制血栓形成的作用，旨在为竺黄醒脑胶囊的临床应用提供合理的科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 Wistar大鼠(清洁级)120只，雄性，体质量230～250 g，由河北省沧州中西医结合医院动物实验中心提供，动物合格证号：1303083。动物饲料为消毒饲料，垫料为消毒垫料，亦由该动物实验中心提供。实验室使用许可证号：SYXK(冀)2011-0047，动物室环境：室温为20～23 ℃，相对湿度为40%～60%。

1.1.2 实验药物和试剂 竺黄醒脑胶囊，由河北省沧州中西医结合医院提供，规格为每粒装0.5 g，批号120103。用蒸馏水制成相当于所需含生药浓度的混悬液备用。临床成人体质量按70 kg计，每日用量7.5 g，即0.107 g/kg。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量组为0.38、0.76、1.52 g/kg，分别相当于临床用药的3.5、7、14倍。阿司匹林肠溶片(山西太原药业有限公司，国药准字H14021955)，临床成人体质量按70 kg计，每日用量150 mg,即2.14 mg/kg。大鼠用量按相当于临床用药的7倍计算，即15 mg/kg。角叉菜胶(Sigma公司，批号：110506)；盐酸肾上腺素注射液(天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12020526)；凝血酶(天津金耀氨基酸有限公司，批号1110211)；二磷酸腺苷(ADP，Sanland chemicai CO.LTD)；伊文思兰(美国Fluka公司)。水合氯醛(天津市大茂化学试剂厂)；硫酸钠(Na2SO4，天津市天大化学试剂厂)；丙酮(天津市天力化学试剂有限公司)。

1.1.3 仪器 全自动血流变分析仪(LBY-N7500B型，北京普利生仪器有限公司)；得力6220直尺(得力集团有限公司)；可调电动匀浆机(FS-1型，常州华冠仪器制造有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 竺黄醒脑胶囊对角叉菜胶致大鼠血栓形成的影响

1.2.1.1 动物选择及分组 将60只Wistar大鼠随机分为6组，正常1组、模型1组、阿司匹林1组及竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组，每组10只。

1.2.1.2 模型制备及给药方法 阿司匹林组(0.015 g/kg)及竺黄醒脑胶囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)剂量1组连续灌胃给药14 d，每日1次，容积为1 mL/100 g体质量，正常1组及模型1组予等容积纯净水。末次给药前48 h，除正常1组外，其余各组大鼠足跖部皮下注射1%角叉菜胶(0.05 mL/100 g体质量)诱发大鼠血栓形成[1]。

1.2.1.3 观察指标及方法 末次给药后40 min，测量黑尾长度，腹主动脉取血，检测血液流变学指标(红细胞聚集指数、全血黏度)。

1.2.2 竺黄醒脑胶囊对实验性脑血栓形成的影响

1.2.2.1 动物选择及分组 将60只Wistar大鼠随机分为6组，正常2组、模型2组、阿司匹林2组及竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量2组，每组10只。

1.2.2.2 模型制备及给药方法 阿司匹林2组(0.015 g/kg)及竺黄醒脑胶囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)剂量2组连续灌胃给药7 d，每日1次，容积为1 mL/100 g体质量，正常2组及模型2组予等容积纯净水。末次给药后40 min，分别腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰位固定，颈部正中切口，分离结扎右侧颈外动脉，于右侧颈总动脉远心方向插入三通管。阿司匹林2组及竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量2组大鼠经三通管注入血栓诱导剂[ADP(1.25 mmol/L)：凝血酶(12.5 U/mL)：盐酸肾上腺素注射液(1 mg/mL)按照100∶200∶5的比例]0.1 mL/100 g体质量，模型2组大鼠注入等容积0.9%氯化钠注射液，正常2组注入等容积0.9%氯化钠注射液。5 min后，注入0.2%伊文思兰0.5 mL/100 g体质量，再过5 min，迅速断头，取两大脑半球，称质量，置匀浆器中，加入0.5% Na2SO4溶液3 mL及丙酮7 mL，制成匀浆，密封放置60 min以上，3 000 r/min离心10 min，取上清液，以0.9%氯化钠注射液调零，在620 nm处测吸光度(OD)。

1.2.2.3 观察指标及方法 以OD/脑质量表示伊文思兰的含量，以此表示脑血栓的严重程度[2]。

2 结 果

2.1 各组大鼠黑尾长度比较 大鼠皮下注射角叉菜胶后，多数大鼠的尾尖部在24 h内出现黯红

色血栓形成区，并逐渐向尾根部扩大，24～48 h颜色加深变黑，且与正常尾部分界明显。各组大鼠黑尾长度比较见表1。

组 别n剂量(g/kg)黑尾长度正常1组10——模型1组10—3．2±1．08∗竺黄醒脑胶囊小剂量1组100．381．9±0．61△△竺黄醒脑胶囊中剂量1组100．761．5±0．36△△竺黄醒脑胶囊大剂量1组101．521．8±0．95△阿司匹林1组100．0151．6±0．58△△

与正常1组比较，*P<0.05；与模型1组比较，△P<0.05，△△P<0.01

由表1可见，模型1组大鼠黑尾长度较正常1组增加(P<0.05)，说明造模成功。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组黑尾长度均低于模型1组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组大鼠血液流变学指标变化比较 见表2。

组 别n剂量(g/kg)红细胞聚集指数全血黏度(低切)(mPa·s)全血黏度(中切)(mPa·s)全血黏度(高切)(mPa·s)正常1组10—1．99±0．128．31±0．914．93±0．394．17±0．27模型1组10—3．07±0．22∗22．53±2．23∗10．05±0．59∗7．34±0．40∗竺黄醒脑胶囊小剂量1组100．382．53±0．15△△12．94±1．62△△6．79±0．62△△5．11±0．40△△竺黄醒脑胶囊中剂量1组100．762．46±0．10△△12．18±1．28△△6．35±0．42△△4．95±0．38△△竺黄醒脑胶囊大剂量1组101．522．44±0．11△△12．49±0．94△△6．47±0．50△△5．12±0．39△△阿司匹林1组100．0152．34±0．13△△12．72±1．10△6．57±0．42△△5．44±0．35△△

与正常1组比较，*P<0.05；与模型1组比较，△P<0.05，△△P<0.01

由表2可见，模型1组大鼠血液流变学指标均较正常1组升高(P<0.05)，说明造模成功。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组血液流变学指标均低于模型1组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量1组及阿司匹林1组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组大鼠OD/脑质量比较 见表3。

由表3可见，注入血栓诱导剂后，脑匀浆上清液吸收度增大，说明伊文斯兰通过血脑屏障渗入脑实质的量增加，造模成功。正常组注入0.9%氯化钠注射液，无血栓形成，脑匀浆上清液中几乎检测不到伊文斯兰的吸收度。竺黄醒脑胶囊小、中、大剂量2组及阿司匹林2组OD/脑质量均低于模型组(P<0.05，P<0.01)，说明给药治疗有效。竺黄醒脑胶囊小剂量2组OD/脑质量高于阿司匹林2组(P<0.05)，竺黄醒脑胶囊中、大剂量2组及阿司匹林2组OD/脑质量两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

组 别n剂量(g/kg)OD/脑质量正常2组10——模型2组10—0．194±0．0260竺黄醒脑胶囊小剂量2组100．380．163±0．0255∗△竺黄醒脑胶囊中剂量2组100．760．104±0．0371∗∗竺黄醒脑胶囊大剂量2组101．520．125±0．0354∗∗阿司匹林2组100．0150．075±0．0354∗∗

与模型2组比较，*P<0.05，**P<0.01；与阿司匹林2组比较，△P<0.05

3 讨 论

中医学认为，机体在脏腑阴阳失调的基础上，加之劳倦内伤、忧思恼怒、饮酒饱食、劳逸过度，致使瘀血阻滞，痰瘀互结，气血失和，从而脑脉痹阻，发为中风。近年来，我们根据老年病的病变特点及脑系疾病的病理生理基础，结合大量的临床实践经验，提出了对中风发病机制的新认识，并形成了一套治疗中风的新思路与新方法。我们认为中风病位在脑，痰浊瘀毒是中风发生发展的主要病理机制。脑为髓之海，髓乃津液所化生，故脑病多为津液病。津液运化失常，则化生水湿，水湿久之，蕴结不散，酿生痰浊，痰浊既生，毒易相兼。浊毒客脑，扰于血循，凝滞不畅，壅塞为瘀。脑处极顶，气血斡旋，易郁多滞。气郁清窍，血滞脉络，互助为虐。血瘀脉络，水津不布，蓄淀成浊。人至老年，肾气渐衰，肾内寓元阳，为阳气之本，元阳不足，浊瘀则无以消散。浊瘀相兼，互为因果，蒙蔽清窍，败坏脑络。涤痰散浊、活血祛毒法是根据中风的痰浊瘀毒病理机制而制定的中医治疗方法。

竺黄醒脑胶囊选方使用具有涤痰散浊、活血祛毒功效的常用中药酌定剂量后合理配伍而成，主要有天竺黄、石菖蒲、清半夏、郁金、地龙、川芎、赤芍、薏苡仁、茯苓、盐泽泻、栀子、防风等。现代药理研究表明，天竺黄可显著延长血浆复钙时间，在血凝实验中，该药能延长凝血时间[3]；石菖蒲对心血管系统有保护作用，石菖蒲挥发油β-细辛醚在一定浓度下有使豚鼠冠状血管扩张的作用，临床常用于冠心病、肺心病等属于痰浊气滞之胸痹的治疗，其机制可能与其能增加冠脉流量有关[4]。石菖蒲加冰片能降低血小板活化，有抗血小板黏附和聚集、抑制血栓形成的作用[5]；半夏有较明显的抗心律失常作用，能显著延长大鼠实验性体内血栓形成时间，并有延长凝血时间的倾向[6]；郁金能降低红细胞聚集性，提高红细胞的变形能力及抗氧化免疫黏附能力，减少自由基对红细胞膜的损伤，延长其寿命，维持正常的血液黏度[7]；地龙提取物可延长血栓形成时间，既抗凝又止血，还有明显的降压作用[8]；川芎对脑缺血、缺氧再灌注损伤及脑梗死损伤都具有保护作用，川芎嗪能改善微循环，增加脑皮质流量，促进神经系统恢复[9]；茯苓能保护免疫器官，增强机体免疫功能[10]；薏苡仁具有抗动脉血栓形成和抗凝血作用[11]；泽泻具有利尿、降血糖、降血脂及抗动脉粥样硬化作用[12]。近年来，随着物质生活水平的提高和生活节奏的加快，冠心病、原发性高血压、脑血管疾病的发病率大大提高，这些疾病的发生与血液流变学异常、血液黏度增加、红细胞聚集能力增强等有关，我们综合上述各单味药的药理作用及组方原理，根据疾病发生的有关影响因素，设计了竺黄醒脑胶囊的药效学实验模型。

本实验结果显示，竺黄醒脑胶囊可明显减弱角叉菜胶引起的大鼠血栓，显著降低血栓大鼠的红细胞聚集指数及高、中、低切全血黏度，竺黄醒脑胶囊各剂量组均疗效显著，与阳性对照药阿司匹林肠溶片达到相似的治疗效果。在改善实验性脑血栓的严重程度方面，竺黄醒脑胶囊小剂量组疗效不如阳性药阿司匹林肠溶片及竺黄醒脑胶囊中、大剂量组，提示竺黄醒脑胶囊对血栓形成有一定的抑制作用，建议临床应用时的剂量参考竺黄醒脑胶囊中剂量。这一结果为临床用药提供了必要的药理学依据。

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Experimentalstudyontheactionofanti-thrombosisofZhuhuang-xingnaocapsule

LIBaofen*,YANGuoqiang,DONGJingjing.*

PreparationRoomofChinesemedicine,CangzhouHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicineinHebeiProvince,Hebei,Cangzhou061001

ObjectiveTo study the inhibitory effect of Zhuhuang-xingnao capsule on thrombosis for providing theoretical basis for clinical application.MethodsThe rats were treated with carrageen glue to induced thrombosis model and experimental cerebral thrombosis model, and the related pharmacological effects of Zhuhuang-xingnao capsule were observed respectively.ResultsAfter subcutaneous injection of carrageen glue, the tail tip of the majority of rats appeared a dark red thrombosis area within 24 h, and gradually expanded to the tail root, and the color deepened and darkened in 24～48 h with the normal tail boundaries clear. The length of black tail in model group 1 was higher than that in normal group 1 (P<0.05), which indicated that the model was successful. The length of black tail in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were shorter than that in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The hemorheology indexes in model group 1 were higher than those in normal group (P<0.05), which indicated that the model was successful. The hemorheology indexes in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were lower than those in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The optical density (OD)/brain mass in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 were lower than those in model group 2 (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. The OD/brain mass in small dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 was higher than that in aspirin group 2 (P<0.05). There was no statistical difference among the medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 (P>0.05).ConclusionZhuhuang-xingnao capsule has a certain inhibitory effect on thrombosis, and the results provide the necessary pharmacological basis for clinical medication.

Thrombosis; Pharmacotherapy; Traditional Chinese medicine therapy; Capsule; Animal; Experiment

R543.053；R-331；R283.65

A

1002-2619(2017)09-1364-05

2017-01-17)

(本文编辑：习 沙)

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.09.022

※ 项目来源：国家中医药管理局关于全国中药特色技术传承人才培训项目(编号：2015481601003)

李宝芬(1969—)，女，主任中药师，学士。从事中药新制剂的开发研究及中药材鉴定工作。