高效液相色谱-串联质谱检测酒类产品中11种PDE-5抑制剂及其衍生剂

翟纹静

(1.苏州出入境检验检疫综合技术中心，江苏苏州215100； 2.苏州世标检测技术有限公司，江苏苏州215100)

高效液相色谱-串联质谱检测酒类产品中11种PDE-5抑制剂及其衍生剂

翟纹静1，2

(1.苏州出入境检验检疫综合技术中心，江苏苏州215100； 2.苏州世标检测技术有限公司，江苏苏州215100)

建立了高效液相色谱串联质谱仪对酒类产品中11种PDE-5抑制剂及其衍生剂的快速分析方法。样品经乙腈∶水（1∶1，v/v）超声提取，Atlantis d C18色谱柱(2.1×150 mm，3 μm)为分析柱，0.1%甲酸溶液和0.1%甲酸乙腈为流动相，电喷雾正离子多反应监测模式进行检测，外标法定量。试验结果表明，该方法的RSD值范围为0.57%～11.69%，回收率范围在60.0%～118.6%，该方法的线性相关性良好，检测低限、精密度和准确度均符合要求，能够满足酒类产品中11种PDE-5抑制剂及其衍生剂的检测要求。

液质联用仪； 酒类； PDE-5抑制剂

2014年8月，有媒体报道湖北一家酒厂，为打开销路，暗地里在酒中添加西地那非违禁化学药品，最终酒厂负责人被刑拘。2015年7月31日，国家食品药品监督管理总局发布通告称，51家企业因在69种保健酒、配制酒中违法添加西地那非等化学物质，已被立即停产，并召回全部在售产品。为保障消费者合法权益和消费安全。2016年5月23日，国家食品药品监管总局再次下发通知，要求全国食品药品监管部门开展配制酒等食品非法添加问题专项治理工作。不仅如此，在保健酒里违法添加的西地那非开始流向白酒，这可能会对白酒行业产生影响。

磷酸二酯酶-5(PDE-5)抑制剂是一类应用广泛的治疗男性勃起功能障碍类药物，临床用药主要有西地那非、伐地那非和他达拉非3种。随着对PDE-5抑制剂衍生物的不断研究，新发现的PDE-5抑制剂衍生物越来越多[1]。因此对于此类非法添加化学成分亟待建立合理、有效的检测方法。目前应用于非法添加物的分析方法主要有化学法、薄层色谱法、高效液相色谱法[2]、高效液相色谱-质谱联用技术[3-4]、超高效液相色谱法、毛细管电泳技术、红外光谱法和拉曼光谱法等[5]。

传统理化方法干扰严重、样品量大、操作繁杂，目前日渐少用[6]。本文基于相关研究的基础，采用高效液相色谱串联质谱技术建立了同时检测非法添加的11种抗疲劳类化学药物的快速检测方法，为打击不法行为提供可靠的技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

白酒样品：市售若干品牌白酒、红酒。

试剂：乙腈，色谱纯；甲酸，色谱纯；11种PDE-5抑制剂及其衍生物的标准物质信息见表1。

仪器设备：6460液相色谱串联质谱仪（安捷伦）；旋涡混合器（IKA）；电子天平（梅特勒）。

1.2 标准溶液的配制

1.2.1 标准储备液的配制

精确称取西地那非、那莫西地那非、羟基豪莫西地那非、红地那非、那红地那非、硫代艾地那非、伪伐地那非、氨基他达拉非、他达拉非、伐地那非、豪莫西地那非标准品各10 mg，分别在10 mL容量瓶中加乙腈溶解定容，浓度均为1000 mg/L。

1.2.2 混合标准储备液的配制

取各标准储备液100µL，移至同一10 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容得到混合标准储备液，浓度为10 mg/L。

1.2.3 混合标准工作溶液的配制

定量时，用50%乙腈将混合标准储备液(1.2.2)稀释成一系列浓度，作为混合标准工作溶液。

1.3 实验方法

1.3.1 液相条件

色谱柱：Atlantis d C183µm，2.1×150 mm。流速：0.2mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10.0 µL。流动相：A：0.1%甲酸水溶液；B：0.1%甲酸乙腈溶液。

洗脱程序：0～13.0 min；15%～15%B。

1.3.2 质谱条件

电离源模式：电喷雾离子源；电离源极性：正模式；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：3500 V；鞘气温度：250℃；鞘气流速：10 L/min；干燥气流速7 L/min；干燥气温度：300℃；通过优化后的定性、定量离子对，去簇电压（V），碰撞能量（V），见表2。

1.4 前处理方法

准确称取1.00 g（精确到0.01 g）均质试样置于10 mL具玻璃磨口塞的刻度玻璃管中，加50%乙腈水3 mL，旋涡30 s，超声处理15 min，冷却至室温，用50%乙腈水稀释至刻度，摇匀，经0.22µm微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱仪测定。注意：过滤时应排出开始的2 mL待测液。

2 结果与分析

2.1 总离子流图

表1 不同化合物标准品信息

表2 不同化合物采集离子对信息

在1.3条件下，11种PDE-5抑制剂及其衍生物的总离子流图见图1。

图1 11种PDE-5抑制剂及其衍生物的标准品总离子流图

在此实验条件下，最后目标物出峰时间为12.07 min，再平衡2 min左右，15 min内就能分析1个样品，可以有效地提高样品分析速度。从图1可以看出，虽然豪莫西地那非、羟基豪莫西地那非和西地那非色谱峰有重叠，红地那非、那红地那非和伐地那非的保留时间相近，但不影响目标物的分析，因为采集的离子不一样，所以提取离子图后可以明显地区分出不同化合物。虽然伐地那非和豪莫西地那非、伪伐地那非和那莫西地那非、硫代艾地那非和羟基豪莫西地那非两两化合物的母离子相同，但是它们的子离子和色谱保留时间相差较大，可以明显区别开，不影响相互之间的定性和定量。

2.2 方法的线性范围及测定底限

以50%乙腈为溶剂，分别配制11种PDE-5抑制剂及其衍生物浓度为 2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL的混标溶液，建立各标准曲线，不同化合物的曲线回归方程及相关系数见表3。11种PDE-5抑制剂及其衍生物的测定底限均为12.5 μg/kg，当加标样品中目标物含量小于该值时，他达拉非、伐地那非和硫代艾地那非的回收率均小于60%，不符合标准GB/T 27404—2008的要求。

2.3 方法精密度和回收率

准确称取1.00 g白酒样，添加12.5 μg/kg、25.0 μg/kg以及62.5 μg/kg 3个浓度水平的标准物质，每个水平平行测定6次，结果见表3。

由表3可看出，11种PDE-5抑制剂及其衍生物的相关系数均大于0.993，测定结果RSD值范围为0.57%～11.69%，说明线性良好，稳定性好。不同项目的回收率范围在60.0%～118.6%，提取率高，满足日常检测需求。

对市售的十余批白酒和红酒进行了11种PDE-5抑制剂及其衍生物的检测分析，结果均未检出。说明目前酒类产品市场比较规范，但是仍需加强对相关生产过程和销售渠道的监管，保障消费者的食品安全。

3 结论

利用液相色谱串联质谱技术，建立了15 min内快速检测分析酒类产品中的11种PDE-5抑制剂及其衍生物的LC-MS/MS分析法。同时经二级质谱分析，极大提高了仪器的灵敏度，排除假阳性的干扰，从而使检测结果更加准确。该方法快速、稳定，线性相关性良好，检测底限、精密度和准确度均符合要求，能够满足酒类产品中11种PDE-5抑制剂及其衍生物的检测要求。

表3 不同化合物的曲线回归方程及相关系数

[1]马春艳,段琼,封淑华,等.一种新型PDE-5抑制剂衍生物的发现及结构鉴定[J].分析测试学报,2016,35(5)：551-556.

[2]谢强胜,王慧,张子璇,等.超高效液相色谱法测定酒精饮料中非法添加抗疲劳药物他达拉非及2种类似物[J].食品安全质量检测学报,2017,3(8)：1030-1036.

[3]龙凌云,李涛,邓永琪,等.HPLC-MS/MS法同时检测抗疲劳保健食品中非法添加的8种壮阳类化合物[J].农产品加工,2015(6)：45-47.

[4]张书文,王锟,韩圣谦.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非含量[J].化学分析计量,2016,25(1)：44-46.

[5]张小龙,王昆,吴先富,等.中药及保健食品中非法添加状况分析[J].中国药师,2014,17(10)：1749-1735.

[6]王荭晖.中成药非法添加化学药物研究进展[J].安徽医药,2011,15(9)：1168-1170.

贵州醇“品味纯粹——发现白酒之美”品鉴活动在筑举行

本刊讯：2017年9月8日，在中国酒业协会、贵州省酿酒工业协会、酿酒科技杂志社指导下，贵州醇酒业有限公司举办了主题为“品味纯粹——发现白酒之美”的新文化主张研讨会。各位专家、行业领导、业内精英齐聚一堂，共同品鉴贵州醇美酒。

贵州醇酒业有限公司总裁肖进春为在座来宾介绍了企业基本情况，并介绍本次活动以“品味纯粹——发现白酒之美（新文化、新价值、新生活）”为主题，以“美酒品鉴＋专家座谈＋新文化倡议”为活动形式，通过4款美酒与佳肴的配搭让现场嘉宾享受味蕾盛宴。

当天的品鉴酒全部由贵州醇酒业提供，而每一款酒都得到了专家们的高度称赞。其中，35%vol贵州醇的专家评语是低度浓香典范，中国低度酒风潮的引领者，宜中杯饮，搭配川菜、烧烤、火锅俱佳，加冰加水，色味不变，数十年新潮白酒经典之作；42%vol金贵贵州醇的专家评语是中度白酒，口感舒适绵长，窖香优雅，宜中杯饮，配菜清甜咸适最佳，可品味，可爽饮，不易伤身；42%vol奇香贵州醇的专家评语是“当高粱遇到葡萄”，单宁的芬芳清甜，遇到高粱酒的浓郁热烈，一款中西合璧的无上妙品，或浪漫、或豪情，宜大杯小品，中餐西餐俱佳；庄龄20年的53%vol纯粹酒庄酒的专家评语为“山水藏酒，岁月留金”，一款融高粱酒的“醇”、酱香的“厚”、奇香的“甘”之精华的地道贵州“酒庄酒”，以“醇、厚、甘”体会完全不同的高粱的热烈、葡萄的幽香、酱香的醇厚。

在场专家普遍认为，发现、品味纯粹的白酒品鉴之美，让白酒融入现代成为表达中国生活方式之美的生活符号，而这最为简洁的办法就是让白酒成为中国饮食文化的一个主题符号。（小雨、萤子、晓文）

Determination of 11 Kinds of PDE-5 Inhibitors and their Derivatives in Alcoholic Drinks by LC-MS/MS

ZHAI Wenjing1,2

(1.Suzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Suzhou,Jiangsu 215100;2.Suzhou World Standard Testing Technology Co.Ltd.,Suzhou,Jiangsu 215100,China)

A method of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)had been developed for the determination of 11 kinds of PDE-5 inhibitors and their derivatives in alcoholic drinks.Samples were diluted with acetonitrile∶water(1∶1,v:v)and the analyte was separated by an Atlantis dC18 column（2.1×150 mm,3 μm）using a mobile phase consisting of 0.1%formic acid and acetonitrile with 0.1%formic acid.The analyte was detected in multiple-reaction monitoring(MRM)mode via positive electrospray ionization(ESI+).The determination results showed that the RSD was between 0.57%to 11.69%and the recovery was between 60.0%to 118.6%at three spiked levels.The method was characterized by its excellent purification effect,high sensitivity and good accuracy,and it could be used for the determination of 11 kinds of PDE-5 inhibitors and their derivatives in alcoholic drinks.

high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(LC-MS/MS);alcoholic drinks;PDE-5 inhibitor

TS262.7；TS261.7；TS261.4

A

1001-9286（2017）10-0126-04

10.13746/j.njkj.2017181

2017-06-22

翟纹静(1987-)，女，河南鹤壁人，工程师，硕士，农产品加工及贮藏工程专业。