胚胎培养液对新生儿出生体重及身长的影响

蒋益群　王珊珊　徐志鹏

[摘要] 目的 探索体外受精（IVF）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）新鲜分裂期胚胎移植周期中不同商品化胚胎培养液（Cook、Vitrolife）对新生儿出生体重及身长的影响。 方法 回顾性分析2014年8月～2015年12月于南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心行IVF/ICSI术移植双分裂期胚胎成功分娩的1441例患者临床资料。根据分娩胎数和胚胎培养液不同进行分组，单胎周期和双胎周期分别分为Cook组和Vitrolife组。分别比较单胎组和双胎组中两种培养液培养后新生儿的出生体重和身长。 结果 单胎组中，Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义（P > 0.05）；双胎组中，Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 两种商品化胚胎培养液（Cook、Vitrolife）在IVF/ICSI新鲜分裂期胚胎移植周期中对新生儿出生体重和身长无显著性影响。

[关键词] 体外受精；胚胎培养液；出生体重；出生身长

[中图分类号] R714 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）09（c）-0112-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of two commercial embryo culture media （Cook，Vitrolife） on the birthweight and length of newborns after fresh embryo transfer in IVF/ICSI. Methods The data of 1441 patients conceived through IVF/ICSI in Reproductive Medicine Center， the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School from August 2014 to December 2015 were analyzed retrospectively. According to the fetal number and embryo culture media， these patients were divided into two groups： singletons group and twins group， both the two groups included Cook and Vitrolife subgroups. The birthweight and length of newborns were compared in singletons and twins groups. Results There were no significant differences in birthweight and length of the newborns between the Cook and Vitrolife subgroups in singletons group （P > 0.05）； while there were no significant differences in birthweight and length between the Cook and Vitrolife subgroups in twins group （P > 0.05）. Conclusion It can be concluded that embryos cultured in Cook and Vitrolife media after fresh cleavage embryo transfer do not affect the birthweight and length of newborns.

[Key words] IVF； Embryo culture medium； Birthweight； Length

隨着质量控制体系的逐步完善，商品化胚胎培养液逐步应用于人类胚胎，例如Vitrolife、G5、Cook、HTF和Quinn′s advantage[1-2]。然而一些研究表明，不同培养体系会改变基因印记的表达，包括Igf2、H19和DMR2[3]，尤其DMR2甲基化的缺失会导致贝克威思-威德曼综合征[4]。因此，许多研究人员已经开始关注培养液对新生儿围生期结局的影响。有研究表明，Cook和Vitrolife两种培养液对新鲜周期移植、冻融周期移植的新生儿出生体重均有显著影响[5-7]。Kleijkers等[8]研究发现，出生后的体重差异至少会持续到2岁。然而，Eaton等[9]指出，G1.3、Global和G1.5三种培养液用于体外培养人类胚胎时不影响新生儿出生体重。另一研究表明，HTF和Sage两种培养液对出生体重的影响亦没有显著性差异[10]。为了进一步研究，本研究比较了两种商品化胚胎培养液（Cook、Vitrolife）在胚胎培养移植后对新生儿出生体重和身长的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

对2014年8月～2015年12月在南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心行常规体外受精（in vitro fertilization，IVF）或卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）治疗并获妊娠的1441例患者临床资料进行回顾性分析。患者纳入标准：①女方年龄≤35岁；②不孕年限<10年；③第1周期患者；④长方案治疗；⑤女方体重指数（BMI）为18～25 kg/m2；⑥孕龄>28周；⑦新鲜周期分裂期双胚胎移植。排除标准：①种植前遗传学诊断/筛查周期（PGD/PGS）；②供精；③失访。根据出生胎数和胚胎培养液种类分组，其中，单胎组分为Cook组（n=198）和Vitrolife组（n=683）；双胎组分为Cook组（n=135）和Vitrolife组（n=425）。endprint

1.2 控制性超促排卵方案

采用促性腺激素（Gn）释放激素激动剂（GnRh-a，曲普瑞林，德国Ferring公司）/基因重组促卵泡激素（Gonal F，果纳芬，瑞士雪兰诺公司）/人绒毛膜促性腺激素（HCG）长方案进行控制性超排卵。当发现至少一个卵泡直径>18 mm时，注射HCG 10 U（Serono，Aubonne，瑞士），并于36 h后经阴道B超引导下取卵。

1.3 卵子采集及胚胎培养

取卵当日，卵泡穿刺获得卵冠丘复合物，置于受精培养液IVF（Vitrolife，Sweden）或FM（Cook，Sydney）中培养3 h，卵母细胞经IVF或ICSI术受精后转移至卵裂培养液G1（Vitrolife，Sweden）或CM（Cook，Sydney）。16～18 h后将培养皿置于倒置显微镜（OLYMPUS IX71）下观察原核。受精后44 h及68 h在倒置显微镜下评估胚胎质量。

1.4 胚胎评估

根据ALPHA/ESHRE指南对胚胎质量分级评估[11]，分裂期胚胎根据细胞数、卵裂球均一度、碎片等形态学参数进行质量评估，其中，分裂胚细胞数7～12个、碎片小于20%、均一或轻度不均为优质胚胎。

1.5 移植与妊娠

取卵后第3天挑选两枚优质分裂胚，于B超引导下进行宫腔内胚胎移植。胚胎移植后2周留晨尿行早孕检查，阳性结果确定为生化妊娠。移植后4周B超检查，见妊娠囊者确诊为临床妊娠。

1.6 观察指标

收集所有患者的病例资料及一般信息，详细记录分娩孕龄、新生儿性别、出生体重、身长等。

1.7 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

单胎组共881例，其中，Cook组198例，Vitrolife组683例，两组女方年龄，不孕年限，女方体重、身高、BMI及临床不孕因素、ICSI比例等比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。双胎组共560例，其中，Cook组135例，Vitrolife组425例，两组女方年龄，不孕年限，女方体重、身高、BMI，ICSI比例，男性因素，输卵管因素，男性及输卵管因素，子宫内膜异位症等比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 不同培养液对新生儿围生期结局的影响

单胎组中，Cook组与Vitrolife组相比孕龄差异无统计学意义（P > 0.05）；新生儿体重与身长差异无统计学意义（P > 0.05）；新生儿中男孩比例和早产儿比例差异无统计学意义（P > 0.05）；低体重儿和巨大儿比例差异无统计学意义（P > 0.05）。双胎组中，Cook组与Vitrolife组孕龄差异无统计学意义（P > 0.05）；新生儿体重与身长差异无统计学意义（P > 0.05）；新生儿中男孩比例和早产儿比例差异无统计学意义（P > 0.05）；低体重儿差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

3 讨论

各生殖中心使用的商品化胚胎培养液，营养成分的类型和含量都有很大的差别[12]。同时，大多数商品化培养液都被证实含有未公开的蛋白成分，这些蛋白成分可能影响种植前的胚胎发育、孕龄以及出生体重[13]。Carrasco等[14]研究Vitrolife、Cook两种培养液在氨基酸组成上有很大差异，Chronopoulou等[15]的文章中指出氨基酸在胚胎发育的稳态平衡调节中发挥着重要作用。因此，胚胎培养液对体外胚胎的发育可能有一定的影响。本研究主要比较Vitrolife和Cook两种商品化培养液对新生儿围生期结局的影响，结果显示，新生儿出生体重和身长差异无统计学意义（P > 0.05），同时，孕龄、性别比例、早产儿比例、低体重儿和巨大兒比例差异均无统计学意义（均P > 0.05）。

Dumoulin等[5]报道在新鲜周期分裂胚移植中，胚胎培养于Cook培养液的单胎出生体重显著低于Vitrolife培养液。然而导致这个结果的原因可能是在Cook培养液中培养的移植胚胎有更少的卵裂球数目，且Cook组中胎儿母亲也更矮小，体重更低，这也会影响到胎儿的体重，同时，这篇研究的样本数也相对较少。Nelissen[6-7]发现在双胎妊娠和冷冻胚胎中使用Cook培养液的新生儿体重更低。然而，在Cook组中低出生体重的人数较多，同时在Vitrolife组中发现5个高孕龄产妇，而Cook组中未发现。最近的研究发现使用不同的培养液后新生儿出生体重无显著差异。比如，Lin等[16]在2013年的文章中回顾性研究了在分裂期胚胎移植周期中3种商品化培养液G5、Global和Quinn′s advantage media对单胎组和双胎组的新生儿出生体重及身长均无显著影响。Gu等[17]在大样本量回顾性研究中比较了Vitrolife和SAGE两种商品化胚胎培养液在新鲜周期和冷冻周期移植中，对单胎新生儿出生体重的影响无显著性差异。Wunder等[18]研究了Cook和Vitrolife两种商品化培养液对单胎中新生儿出生体重无显著性影响。Carrasco等[14]前瞻性和回顾性研究没有发现Cook、Medicult和Vitrolife三种培养液对单例新生儿的出生体重有影响。这几项研究结果与本研究一致。

有趣的是，不同人类胚胎培养液在不同的动物模型中可以产生不同的基因表达和DNA甲基化模式。很多动物研究表明，胚胎培养液影响基因表达[19-20]。在体外培养液中胚胎为了维持基因印记会做出不同的表观遗传学改变，这段时间特别敏感，任何表观遗传变化都可能改变胚胎生存方式，促使其适应次优的体外环境。而这些变化可能最终会影响到小鼠胎儿围生期结局，如胎儿生长和出生体重、葡萄糖代谢和瘦素水平、血压和血管的变化问题。并且，通过辅助生殖出生的小鼠已经被证明表现出异常行为[21-22]。因此，胚胎培养液对胚胎表观遗传学的改变以及后续影响仍需更深入的研究。endprint

Zhu等[23]的研究结果显示，单囊胚移植后获得单胎的新生儿出生體重显著高于单分裂期胚胎移植后的单胎新生儿。Makinen等[24]的研究结果中也发现囊胚移植后大胎龄儿的比例显著高于第2天移植者。然而，本研究中只比较了分裂期胚胎移植的胎儿结局，并未涉及囊胚期培养。胚胎培养液对胚胎的生长发育有一定影响，这就涉及培养时长和囊胚培养的安全性问题。在以后的研究中，笔者将重点关注胚胎培养液对囊胚期移植患者围生期结局的影响。

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（收稿日期：2017-06-07 本文編辑：程 铭）endprint