酶联免疫吸附试验测定HBsAg弱阳性标本的处理

王德轩

【摘要】目的：探讨酶联免疫吸附试验测定HBsAg弱阳性标本的处理。方法：采用酶联免疫吸附测定法和胶体金层析法进行HBsAg弱阳性标本检查。结果：本次研究对66份弱阳性标本用胶体金法进行检查，发现49份标本呈现阳性。再采用酶联免疫吸附测定法进行复查后，有53份标本呈现阳性，弱阳性标本2份，11份假阳性标本。结论：医院在对HBsAg弱阳性标本检验的环节中，可以先采用胶体金层析法进行检查，然后再对阴性患者采用酶联免疫吸附测定法进行复查，可以提升检查的精确性。

【关键词】HBsAg弱阳性标本；酶联免疫吸附测定；乙肝病毒；胶体金层析法

乙型肝炎病毒表面抗原是一类常见的临床检验项目，一般采用酶联免疫吸附测定的方式对HBsAg弱阳性标本进行检测，这种方法的成本比较低，而且效率高，检测方式简单，灵敏度可以得到保障，但是在检测中会有外界因素的干扰。在实际的检测中会出现弱阳性标本，在复查后与第一次检查的结果存在出入。为了进一步探讨标本的情况，本次研究进行了一系列的研究。

1资料与方法

1.1一般资料

标本来源为本院2016年10月至2017年3月，门诊及住院检测乙肝表面抗原的患者。HBsAg试剂盒采用山东3V生物工程集团有限公司生产的产品，在复查中采用的试剂盒是上海晶抗生物工程有限公司生产的产品。胶体金层析法试纸用的是北京蓝十字生物药业有限公司生产的产品。

1.2方法

相关的操作方法完全按照说明书的内容进行，在采用酶联免疫吸附测定的环节中，每次都采用质控血清进行室内质控，在检查完成后，如果患者的检查结果为弱阳性，那么患者的OD值一般在0.1-0.4之间，可以采用胶体金层析法进行复查，然后患者于第二天采用酶联免疫吸附测定法进行检查。

2结果

本次研究中，有66份采用酶联免疫吸附测定检测的弱阳性的标本，然后采用胶体金层析法进行复查，总共有49份标本呈现出阳性。66份标本于第二天采用酶联免疫吸附测定的方法进行检查，有53份标本是阳性，2份呈现弱阳性，11份标本呈现阴性。1份弱阳性的标本采用胶体金层析法检测中呈现阳性，将原有的标本的阴性血清进行稀释，将其浓度稀释到原来的10%，然后采用酶联免疫吸附测定双孔测定的方式呈现阳性。另1份呈弱阳性的标本在采用胶体金层析法检测后，没有出现任何的反应。由于胶体金层析法的灵敏度只有2ng/ml，但是酶联免疫吸附测定法的灵敏度却高达0.5ng/ml，所以导致检测结果存在误差的主要原因在于胶体金层析法的灵敏度比较低。

在对11份采用酶联免疫吸附测定呈现假阳性的标本进行复查后，发现采用相同的试剂，有5份标本的血清不能充分的凝固，这5例标本都是在冬季检测。在医院的部分实验室，由于室内温度不能控制的特别好，在对实验条件进行改善后，效果也更加的精确。患者在冬季采血一般快到中午才能采集完血液，而且检验结果要在当天内出，所以这种快速的检测方法，导致血液在凝固的过程中会产生假阳性特征。尽管很多标本已经通过肉眼观察到凝固，但是还是存在凝固不充分的情况，很多纤维蛋白还是与聚乙烯板孔结合，导致不能彻底的清洗，导致假阳性的出现。3份标本出现了溶血的现象，在對标本进行充分检测后，没有出现假阳性。2份标本出现了污染的情况，这2份标本的前一孔都是阳性标本。1份标本结果无法解释，需要进行进一步的观察和论证。

3讨论

酶联免疫吸附试验在酶免疫测定技术中应用非常广泛，这种方法将抗原和抗体吸附在同一个载体上，采用酶标记的方式，对抗原的反应进行分析，然后再采用洗涤的方式将游离的部分清除。常见的酶联免疫吸附试验主要有双抗体夹心法和间接法。前者在大分子抗原的检测中广泛应用，后者在进行特异抗体检测中广泛应用。

酶联免疫吸附试验首次是在1971年开始使用，其速度非常快，而且敏感性高，操作简单，已经制定了各项标准，使这项技术近年来快速发展，并且得到了非常广泛的应用。在早期这种方法的特异性并不是特别高，导致了实际应用效果不是特别好。但是，如今，酶联免疫吸附试验在不断的改进，材料也在不断的完善，特别是基因工程应用在其中，对单克隆抗体进行阻断的酶联免疫吸附试验可以提升实验的特异性，而且如今在酶联免疫吸附试验充分借助计算机技术，使酶联免疫吸附试验更加的简便和实用，成为最广泛的检测方法。

如今，酶联免疫吸附试验在不同的细菌和病毒诊断中都得到广泛的使用，在动物免疫的环节中，酶联免疫吸附试验可以辅助诊断牛结核病、蓝舌病等。

酶联免疫吸附试验的基本原理是将酶分子和抗体分子结合，这种结合的方式不会将抗体的免疫学特征改变，而且也不会对生物学的活性产生任何的影响。采用酶标记抗体的方式，可以与相同载体上的抗原发生特异性的结合。然后将底物溶液滴加后，可以在酶的作用下形成还原反应，呈现出颜色的变化。所以，通过颜色的变化，医护人员可以分析患者是否产生了免疫反应，颜色变化的深浅与标本中的抗体或抗原含量呈正比。这种颜色的变化反应借助酶联免疫吸附试验进行，可以提升酶化学反应的敏感性。

酶联免疫吸附试验的特征非常的明显，其活性非常突出，而且敏感性高。在室温下反应非常的稳定，而且反应产物很容易呈现。酶联免疫吸附试验中容易受到外界因素的影响，容易产生假阳性或者假阴性，导致实验结果不精确。实验室人员的文化素质、思想素质和心理素质等都会导致实验出现误差。实验人员应该具备良好的心理素质，提升自身的道德水平。在工作中如果存在标本混淆的情况，会导致严重后果的产生。实验室工作人员还应该完善自身的技术能力，掌握专业的基本原理，认真学习新的知识，努力提升自己的业务水平。在繁忙的工作中，提升自己的心理素质，做到有条不紊，沉着冷静的处理各类问题。

在进行酶联免疫吸附试验前，操作人员应该对实验的物理参数非常的了解，了解实验室的环境温度和反应温度等。科学规范的使用仪器，防止溶液溢出容器外，防止血清的残留，加样器的吸头要清洗干净，防止污染的产生，加样的次序应该按照说明书进行。防止各类结果产生误差，要重新进行各项实验。在手工洗板加入液体中，不要产生太大的冲击力，洗涤的次数不能过多，严格的按照说明书的操作进行。

现在，在对HBsAg进行检测中，一般都是采用酶联免疫吸附测定法，但是如果标本呈现弱阳性，就会导致判断失误的情况。而且在采用酶联免疫吸附测定法的过程中，会受到很多因素的影响，常常会出现假阳性问题，其S/CO值非常低。在国外酶联免疫吸附测定中，会呈现出一段灰色区域的范围，会显示检测结果的可疑性。但是在国内进行HBsAg测定中，不会呈现出灰色的区域，各个医疗机构对灰色区域的理解还存在一定的差异。在报告的模式上，只是显示阴性和阳性，所以在不同的时间内检测的结果会呈现出一定的差异。而且操作的流程也会存在一定的差异，医院在实际的检测工作中，由于条件受到限制，他们在进行胶体金试纸条法和酶联免疫吸附测定法测定时，需要对呈现弱阳性的标本进行重新的检测。本次研究中，有66例标本采用了酶联免疫吸附测定后呈现出弱阳性，其中假阳性的标本有11份，占总份数的16.7%，有3.0%的标本是弱阳性。说明在初次检测的环节中，出现了非常高的假阳性，也会有一定的弱阳性标本，其主要原因在于，酶联免疫吸附测定法的灵敏度还受到一定的限制，我国的酶联免疫吸附测定法进行HBsAg弱阳性标本测试中所使用的试剂盒具有一定的窗口期，如果试剂盒使用时超过了窗口期，就会导致血液的检测结果呈现阴性。在对病毒感染的检测中，需要一定的过程，而且病毒的复制速度非常快，在定性实验中，只能分析患者的血液是陰性还是阳性。我国生产的酶联免疫吸附测定试剂的检出要求还不够精确。相关的研究表明，我国无偿献血人群的HBsAg的检出率只有0.27%，所以这项指标会比HBV检测的水平低，很多感染者还是不能被检出，存在着潜在传播病毒的风险。在临床工作的人群在检测中，只能检测到一个灰色区域。

在进行HBsAg检测中，影响检测精度的因素非常多，标本之间也会出现互相感染的情况，标本在收集后会出现溶血的情况。这时医院应该对弱阳性的标本采用胶体金层析法检查，针对阳性标本，可以直接生成报告。对阴性标本于第二天再采用酶联免疫吸附测定进行复查，对弱阳性标本继续观察。

参考文献

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