液相色谱仪的校准与管理维护

吴文熙

摘要：液相色谱仪作为一种高精密仪器，能够对物质进行有效分离，进而对其进行检验、分析和鉴定。在检测工作中，为保障仪器测量准确度和灵敏度的影响，需要不断完善其日常维护工作及计量的校准方法。基于此，文章针对液相色谱仪校准项目与管理维护的方法展开探究，供同行参考。

关键词：液相色谱仪；校准；管理维护

液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪在不同行业和领域中的应用体现出了较多的优势，其不会对正常质量分析方面的工作产生影响，并且可以以较高的速率完成分析工作，使检测样本不同物质分析工作更加到位。然而液相色谱仪波长准确度是液相色谱仪的一项重要的性能指标，因此计量机构有必要对现有的波长准确度检定方法进行修补。

1.校准项目分析与校准方法分析

1.1分辨力校准分析

在固定好液相色谱仪（如图1所示）后，要保证仪器的稳定，然后执行仪器自动调谐命令，命令启动，向仪器内注入调谐液，直至调谐通过后，再打印调谐报告，对报告中3到6个主要离子峰废半峰宽进行考察，将半峰宽呈现出的最大值作为仪器的分辨力，计为W1/2。△M=Mn测量-Mn理论，其中等式中的Mn测量表示的是第n个粒子在进行3次测量后得出的平均值，计为u；Mn理论表示的是第n个离子的理论值，计为u。

1.2质量范围校准分析

根据调谐操作的条件，必須按照校准要求注入符合标准的调谐液到仪器中，再进行调谐和校准操作。在规定范围内的质荷比中，如可以设定为m/z50—2000，在规定范围内选择SCAN模式对全范围记性扫描，通过分辨力和质量准确性来满足计量性能的要求，并将要求的最低和最高质荷比范围作为质量范围。

1.3信噪比校准分析

在调谐后会确定一个最佳参数，这个参数就是校准参数，利用校准参数选择C18或者性能相同的色谱柱。ESI正离子，在其中注入10皮克的利血平，并启动SIM或者MRM模式，从中提取m/z=609的特征离子或者m/z=195的子离子，根据等式可以计算出信噪比也就是S/N=H/H噪声，在这个等式中，H表示的提取离子显示出的峰高；H噪声表示的是基线的噪声。然后，在ESI负离子中注入100皮克的氯霉素，并启动SIM或MRM模式，从中提取m/z=321的特征离子或者m/z=152的子离子，根据信噪比计算等式计算出ESI正离子的信噪比。

APCI正离子，在其中注入10皮克的利血平，并启动SIM或MRM模式，从中提取m/z=609的特征离子或者m/z=195的子离子，并带入到信噪比计算公式中计算出APCI正离子信噪比。

1.4整机定量分析以及定性重复性分析

根据分析，要按照信噪比的校准条件反复进行6次测量，并分别记录质量色谱图中对应峰面积及保存时间，并根据下列公式，对峰面积的校准偏差进行计算定量重复，从保存是两件计算出相对标准偏差计算定性的重复性。计算公式为：RSD=××100%，其中等式中RSD表示的相对标准偏差；xn表示的是第n次后测量峰面积及保存时间；x表示的是6次测量峰面积及保存时间的算术平均值。

2.管理措施与维护措施分析

2.1流动相管理与维护措施分析

一是流动相必须在0.45微米的微孔滤膜中进行2到3次的真空抽滤，再利用超声仪进行超声45分钟到60分钟，然后才能在流动相进行使用。

二是甲醇等有机溶剂必须保证为色谱纯，其中可用碱或酸对流动相的pH值进行调节，但范围要控制在2-7.5内。其中水必须使用去离子水，使用期限不能超过2天，逾期后要进行重新配制。

三是流动相的瓶口不能用密封带封死，要保证内外压力平衡。不能随便更换流动相的借口，如果棕瓶固定为谁，那么白瓶就要固定为甲醇，流动相的流速要控制在每分钟3.0mL范围内。

四是流动相中禁用以下物品：三氯苯、四氢呋喃、氯仿、亚甲基氯、甲苯；而且要慎重使用以下物品：乙醚、丙酮、四氯化碳、异丙醚等，避免这些化学物品腐蚀柱塞密封圈。

五是当流动相性质为缓冲盐时，缓冲溶液在与有机溶剂发生转换前要用5甲醇对泵设备记性清洗，防止盐类物质对机相中结晶的损坏和泵设备组件的损坏。缓冲溶液的浓度要低于每升0.5摩尔，尽量不要超过色谱柱的酸碱性范围。为了防止腐蚀流路，CI—的浓度要控制在每升0.1摩尔以下。另外，高浓度的缓冲盐会降低活塞和密封垫的使用寿命，所以在长时间使用高浓度缓冲盐时，要用10异丙醇溶液对泵设备背面的结晶物质进行冲洗，最后再用0.45微米的异丙醇滤膜进行2到3次反复过滤。

六是当泵压力超过6000psi上限范围时，要检查泵头和过滤白头及保护柱芯是否有损坏。

2.2排气泡管理与维护措施分析

一是快速清洗阀不宜拧的过松，一般拧2圈左右比较适应，过松会导致流动相从清洗阀部位快速通过流进泵头，从而引起设备报警。

二是在使用快速清洗阀时，不能对几个通道同时按比例进行排气泡，要一个一个通道进行，否则会造成设备损坏。

2.3自动进样器管理与维护分析

在对自动进样器进行养护时，可以每天按照甲醇：水=1：1的比例配制溶液洗针，并保证在洗针前要检查一下洗针瓶中是否有50甲醇洗液。

2.4样品处理分析

一定要保证测定样品在流动相中呈易溶特质，否非在会结晶造成色谱柱堵塞。最好使用与流动相能够溶解的样品，而且样品或标准溶液在进样处理前，必须使用0.45微米的滤膜进行过滤，去除其中的微粒杂志物质，样品中不能含有强碱性、强酸性类物质，但可以利用预处理柱去除其中具有较强极性或存在的不可逆吸附物质。

2.5色谱柱管理与维护分析

使用仪器自带的色谱柱时，应及时的将换下的色谱柱应物质极性密封。而且用完后要将原来使用的色谱柱安装好。换色谱柱时必须在有流动相流出的情况下进行，防止空气进入到色谱柱。而且液相色谱仪的使用时间不宜过长，而且每个泵通道以及整体的流路一定要用甲醇进行冲洗后再保存，防止结晶对仪器造成污染。

2.6检测器管理与维护分析

如果检测的紫外或可见灯长期处于打开状态，那么要保证溶液要刘晶检测池、若不需要做样，可以将灯关闭。一般检测器的登要在有溶液连续流动后的几分钟才能打开，否则流动池中会产生气泡，将无法通过校准。检测气的钨等不要经常进行开关，这样会降低灯的使用寿命，如果经常使用仪器，可隔几天进行开关一次。检测池清洗时要用100异丙醇冲洗整个流路，如果不能进行可以用10或者5的稀硝酸冲洗45分钟到60分钟，然后用清水冲洗干净。

3.结束语

总之，液相色谱仪的科学管理和正确使用维护，是获得良好色谱分离效果和延长仪器使用寿命的前提和基础。所以在日常使用中，每位使用人员都要在实践中不断总结。既要制定严谨科学的检定校准方法又要尽量满足客户的需求，使检定校准方法向着快捷、实用、科学的方向发展。

参考文献：

[1]潘晓静.高效液相仪器的管理与维护研究[J].科技与企业，2015（19）：222-222.

[2]吴少敏，张雅芝，殷博昊.高效液相色谱的使用与维护[J]. 实验室科学，2017，14（3）：183-186.