ROC曲线分析MCV、MCH筛查地中海贫血的价值

2017-10-21陈雅斌蒋燕成陈紫萱张志珊

实验与检验医学 2017年5期

关键词：缺铁性贫血敏感性

陈雅斌，蒋燕成，陈紫萱，张志珊

(泉州市第一医院检验科，福建泉州 362000)

ROC曲线分析MCV、MCH筛查地中海贫血的价值

陈雅斌，蒋燕成，陈紫萱，张志珊

(泉州市第一医院检验科，福建泉州 362000)

目的探讨MCV和MCH指标在地中海贫血筛查中的诊断价值。方法比较地中海贫血、缺铁性贫血和健康人群的MCV、MCH指标，通过ROC曲线评估MCV和MCH筛查地中海贫血的价值。结果三组之间MCV差异具有统计学意义，MCH地中海贫血和健康人群差异具有统计学意义，但和缺铁性贫血差异不具有统计学意义。ROC曲线分析得出，和健康人群比较，诊断出地贫的最佳MCV值为82.1fl，其敏感性、特异性分别为94.8%和100.0%；MCH值为27.3pg，其敏感性、特异性分别为96.7%和100.0%；和缺铁性人群比较，诊断出地贫的最佳MCV值为69.9fl，其敏感性、特异性分别为71.3%和50.7%。结论 MCH筛查能力略优于MCV，当MCV＜82.1fl和（或）MCH＜27.3pg时，应考虑为地中海贫血的疑似病例，并同时进行铁相关检查。

地中海贫血；ROC曲线；MCV；MCH

地中海贫血，是珠蛋白基因缺陷而导致的一组遗传性血红蛋白病，是人类最常见的单基因遗传性疾病之一。根据累及的珠蛋白基因，可分为α、β、δ、γ等几种类型，其中，以α和β地中海贫血最为常见。不同类型的地中海贫血临床症状轻重不一，轻者无明显表现，重者为致死性疾病，需要定期输注红细胞才能维持生命。然而，国际上尚无有效的方法治疗地中海贫血，通过筛查高风险人群，或遗传咨询等手段，避免受累重症胎儿的出生，是公认的预防对策[1]。众多筛查方法中，MCV和MCH作为地中海贫血初步筛查的首要指标已经得到了广泛应用[2]，因此，本实验检测地中海贫血和缺铁性贫血、健康对照的MCV、MCH，并进行三组之间的比较分析，绘制ROC曲线评价不同截断值下MCV、MCH筛查地中海贫血的能力，以期建立一个适合本地区本实验室的初步筛查方案。

1 资料与方法

1.1 标本来源2013年12月至2017年3月来泉州市第一医院行地贫基因检测并确诊的病例422例，其中男性111例，女性311例，年龄16时～84岁，平均年龄27.2岁±13.0岁。并选取同时期检验的451例健康体检病例作为健康对照组（男性203例，女性248例，年龄18岁～88岁，平均年龄33.8岁±5.2岁），416例缺铁性贫血病例作为非地贫组（男性67例，女性349例，年龄12月～71岁，平均年龄29.9岁±10.3岁）。

以地中海贫血的基因检测结果作为金标准，分类不同类型的地中海贫血，缺铁性贫血的诊断标准参考《临床血液病诊疗学》诊断标准[3]，为保证结果的准确性，同时剔除地中海贫血合并缺铁性贫血的病例。

1.2 仪器和试剂血常规检测用日本希森美康公司的XS-1000i血液分析仪，铁相关检测用美国贝克曼公司的IMMAGE 800和DxI 800免疫分析仪，仪器均采用原厂配套试剂，每日进行质控检测保证结果准备可靠；DNA提取试剂盒、Taq酶以及α、β地中海贫血基因检测试剂盒均购自深圳亚能生物科技有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 全血细胞检测EDTA-K2无菌真空抗凝管采集受检者外周静脉血标本2ml，1h内进行血常规检测，并记录每个标本的MCV、MCH数值。

1.3.2 地中海贫血基因的检测EDTA-K2无菌真空抗凝管采集受检者外周静脉血标本2ml，按照试剂盒说明书及时进行DNA的提取和PCR扩增。采用跨越断裂点（Gap）-PCR诊断3种常见的缺失型α 地中海贫血（--SEA、-α3.7、-α4.2），采用反向点杂交（RDB）-PCR对α和β地中海贫血非缺失型点突变基因进行检测，包括3种α地中海贫血的突变（αWS、αQS、αCS）和 17 种常见的 β 地中海贫血基因突变（-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、βE、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS- Ⅰ -1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、5′UTR；+40-43、Initiation condon）。按照试剂盒说明书操作并进行结果判定。

1.3.3 铁相关检测无菌真空促凝管采集受检者外周静脉血标本5ml，2h内检测血标本的血清铁、铁蛋白、总铁结合力等铁相关指标。

1.4 统计学方法SPSS 13.0软件进行统计学分析，MCV、MCH 的检测结果以均值±标准差（x±s）表示，多组间计量资料的比较使用单因素方差分析，以P＜0.05表示差异具有统计学意义；并绘制ROC曲线，计算曲线下面积和约登指数，评价不同截断值下MCV、MCH筛查地中海贫血的敏感性、特异性。

2 结果

2．1 422例地中海贫血的检测结果 422例地中海贫血中α地中海贫血227例，占53.79%，以αα/--SEA为主要基因型 (36.73%），β地中海贫血191例，占45.26%，以 IVSⅡ-654/N、CD41-42/N、CD17/N 三种基因型为主（41.23%），更有4例为α、β复合型地中海贫血，占0.95%，具体结果见表1。

表1 422例地中海贫血基因分型

2.2 地中海贫血和缺铁性贫血组、健康对照组的比较地中海贫血组、缺铁性贫血组和健康对照组的MCV、MCH检测结果见表2。统计分析表明MCV三组之间两两比较均具有统计学意义，MCH地中海贫血组和健康对照组、缺铁性贫血组和健康对照组比较均具有统计学意义，但地中海贫血组和缺铁性贫血组比较P＞0.05，差异没有统计学意义。

表2 三组MCV、MCH的比较

2.3 ROC曲线分析以地中海贫血组为阳性例数，与缺铁性贫血组和健康对照组进行比较，并计算特异性和敏感度，以敏感性为纵坐标，1-特异性为横坐标，绘制MCV指标的ROC曲线（图1、2）。由于地中海贫血组和缺铁性贫血组MCH指标差异没有统计学意义，因此，MCH指标只绘制地中海贫血组和健康对照组比较的ROC曲线（图3）。计算不同ROC曲线下面积（AUC）和相关约登指数，以约登指数最大时的诊断界点作为最佳截断值。分析得出与健康人群比较，诊断出地贫的最佳MCV值为82.1fl，其敏感性、特异性分别为94.8%和100.0%；MCH值为27.3pg，其敏感性、特异性分别为96.7%和100.0%；和缺铁性人群比较，诊断出地贫的最佳MCV值为69.9fl，其敏感性、特异性分别为71.3%和50.7%。具体结果见表3。

表3 MCV、MCH指标诊断地中海贫血的评价

3 讨论

地中海贫血作为人类最常见的单基因遗传性疾病之一，在我国流行于长江以南地区，以广东、广西、四川、福建、海南等省份为高发地区，其中尤以广东、广西为甚，基因携带率可达11.07%和23.98%[4，5]。该病临床症状轻重不一，轻者无明显表现，重者为致死性疾病，需要定期输注红细胞才能维持生命。然而，临床上尚无有效的方法治疗地中海贫血，加强对高风险人群的筛查，避免纯合子、或者双重杂合子等受累重症胎儿的出生，是目前公认的预防对策。

图1 地中海贫血组和缺性贫血组MCV比较

图2 地中海贫血组和健康对照组MCV比较

图3 地中海贫血组和健康对照组MCH比较

地中海贫血的筛查方法多种多样，包括MCV、MCH、RDW等红细胞相关参数、血红蛋白电泳、红细胞渗透脆性实验、网织红细胞检测等，其中又以MCV、MCH为大规模人群初步筛查的首要指标[6]。虽然国际多以MCV 80.0fl和（或）MCH 27.0pg作为诊断界值，但国内MCV取值较为宽泛，也有以MCV＜79.0fl或 MCV＜82.0fl作为诊断界值[2，7-10]，可见，目前MCV、MCH的诊断值还无法做到完全统一。因此，本地区作为地中海贫血的高发地区，为了能够更加有效地从高风险人群中筛查出地中海贫血的疑似病例，亟需制定一个适合本实验室的初筛指标。

本研究对近年来就诊于本院的地中海贫血阳性病例MCV、MCH进行了分析，并绘制ROC曲线评价MCV、MCH筛查地中海贫血的能力。结果表明422例地中海贫血组MCV、MCH的均数、标准差分别为（67.42±7.96）fl、（21.08±2.83）pg；表现出小细胞低色素贫血的血液学特征，和健康对照组比较，MCV、MCH差异均具有统计学意义；相关的ROC曲线表明：和健康人群比较，诊断出地中海贫血的最佳MCV值为82.1fl，其敏感性、特异性分别为94.8%和100.0%；MCH值为27.3pg，其敏感性、特异性分别为96.7%和100.0%。显示出MCV和MCH均具有较好的筛查地中海贫血的能力，且MCH的诊断能力略优于MCV，与魏权、朱海勇、Ryan的研究结果相同，和周祥敏等人的研究结果虽然略有差异，但均体现出MCV、MCH具有较好的筛查能力[11-14]。略有差异的原因可能与周祥敏等人实验选用标本量较少，或者地域的差异有关。

缺铁性贫血组MCV、MCH的均数、标准差分别为（70.37±9.60）fl、（20.95±4.00）pg，也表现出小细胞低色素贫血的血液学特征，和地中海贫血组进行比较，显示MCV差异具有统计意义，地中海贫血的MCV低于缺铁性贫血；但MCH比较，P＞0.05差异没有统计学意义，MCH并不能有效区分两组贫血，和梁洪焕的研究结论一致[15]。因此本研究只绘制了相关MCV的ROC曲线。MCV的ROC曲线分析得出，从缺铁性贫血的人群中筛查出地中海贫血的最佳截断值为69.9fl，其敏感性、特异性分别为71.3%和50.7%。表明MCV虽有一定的诊断价值，但其敏感性和特异性均较低，提示如果单纯依靠MCV值，区分地中海贫血和缺铁性贫血较难，实验结论和陈卫东等人研究结果相同[16]，因此研究认为当被检人群血常规指标出现MCV低于 82.1fl，MCH低于27.3pg的诊断值时，最好同时进行地中海贫血基因检测和铁相关检查，以免出现遗漏诊。

综上所述，研究认为针对本地区本实验室，当血常规检测 MCV＜82.1fl和（或）MCH＜27.3pg时，应考虑为地中海贫血的疑似病例，进行进一步的筛查或者基因检测，同时为了避免缺铁性贫血的遗漏诊，应同时进行铁相关检查。

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R556.6+1，R446.11+1