不同添加量的富硒乳酸菌对蛋鸡免疫和抗氧化性能的影响

李 乐，张 敏，耿春银，金英海

（延边大学，吉林延吉 133000）

不同添加量的富硒乳酸菌对蛋鸡免疫和抗氧化性能的影响

李 乐，张 敏，耿春银，金英海*

（延边大学，吉林延吉 133000）

为研究日粮中添加不同水平的富硒乳酸菌制剂对蛋鸡免疫和抗氧化性能的影响，本试验选用480只28周龄的海兰褐蛋鸡，随机分成4组，每组6个重复，每个重复20只鸡。A组为对照组，饲喂蛋鸡基础日粮，B、C、D组分别在基础日粮中添加不同剂量的富硒乳酸菌制剂，添加剂中以有机硒的含量计算，B、C、D组中有机硒的含量分别为0.3、0.6、0.9mg/kg，预饲期1周，试验期为42 d。结果表明：（1）与对照A组相比，B、C、D组血清内的超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性均显著提高（P ＜ 0.05），丙二醛（MDA）的含量显著下降（P ＜ 0.05）。 （2）在肝脏内 B、C、D组谷胱甘肽过氧化物酶的活性与对照A组相比差异极显著（P＜0.01）。肝脏内各试验组超氧化物歧化酶的活性与对照A组之间有显著性差异（P＜0.05）。C、D组肝脏内丙二醛含量低于A组和B组（P＜0.05）。（3）在蛋黄内D组谷胱甘肽过氧化物酶比其他各组有显著提高（P＜0.05）。（4）与对照A组相比，添加富硒乳酸菌制剂对血清内的IgM有显著的影响（P＜0.05）。由此可见，添加富硒乳酸菌制剂可提高蛋鸡的抗氧化及免疫水平，对蛋鸡保持健康状况和延长产蛋期有十分积极的影响。

乳酸菌；有机硒；免疫机能；抗氧化性能

硒是动物体内的必需微量元素之一，是谷胱甘肽过氧化物酶 （GSH-Px）活性中心的组成部分。Duntas等（2015）发现，硒可参与调节体内绝大部分的抗氧化防御机制，并且可通过调节体内的氧化还原状态和内分泌系统，提高免疫力，改善其健康状况。随着对硒元素在体内作用机制研究的逐步深入，越来越多的含硒蛋白质和含硒抗氧化酶被发现，并且这些物质在减慢和防止机体的氧化损伤方面发挥着极其重要的作用（LI等，2014）。缺硒会导致家禽出现渗出性素质、白肌病等（才利春等，2016），所以在日粮中添加一定量的硒十分必要。目前日粮中使用的硒源主要是亚硒酸钠，但是其存在吸收效率低、毒性大、安全范围窄和潜在的环境污染等问题，所以安全高效的有机硒源的开发与利用成为当今研究的热点之一。目前，有很多关于利用植物和微生物进行硒的生物有机化的研究和应用，并且发现微生物富硒能力强转化率高，同时兼具微生物的生物特性，有利于改善机体的免疫和健康状况，具有很好的研究和应用前景。乳酸菌是近年来得到普遍认可的一种益生菌，其可调节肠道菌群、增强机体免疫能力、促进动物生长发育，在畜禽生产中已经广泛使用（Lehloenya等，2008）。本试验所使用的添加剂是以有机米糠为发酵底物，利用乳酸菌进行发酵充分利用米糠中的营养，同时以乳酸菌为载体使无机硒通过微生物发酵转化为有机硒 （李艳娇等，2016）。近几年，有很多关于有机硒在畜禽方面的研究报道，但是鲜见关于富硒乳酸菌在蛋鸡方面的研究报道。富硒乳酸菌在开发利用农副产品资源的同时发挥了有机硒和乳酸菌的双重作用。本试验旨在研究添加不同水平的富硒乳酸菌对蛋鸡免疫机能和抗氧化性能的影响，为其在蛋鸡生产中的使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计 本试验选用480只28周龄体况相近的海兰褐蛋鸡，采用单因子随机试验设计，将其随机分成4组，每组6个重复，每个重复20只鸡。A组为对照组，饲喂蛋鸡基础日粮，B、C、D组分别在基础日粮中添加不同剂量的富硒乳酸菌制剂，制剂中以有机硒的含量计算，B、C、D 组中有机硒的含量分别为 0.3、0.6、0.9 mg/kg（见表1），预饲期1周，试验期为42 d。

表1 试验设计mg/kg

1.2 试验日粮与饲养管理 本试验从2016年7月1日至2016年8月18日在延吉市仁和禽业有限公司进行，试验基础日粮采用玉米 —豆粕型（表2），营养成分参考NY/T 33-2004《鸡饲养标准》。试验所用的富硒乳酸菌制剂由延边大学农学院动物营养与饲料科学实验室研制，其中乳酸菌的生物量为9.94 g/L，有机硒生产水平为7.46 mg/L（李艳娇等，2016）。试验采用三层阶梯式笼养，料槽喂料自由采食，乳头式饮水器自由饮水，每天早、中、晚各喂料一次，早、晚各清粪一次，自然通风，每天光照17 h，温度控制在28～29℃，定期按照鸡场常规程序进行防疫和免疫。

表2 试验基础日粮组成及营养水平

1.3 样品的采集与测定

1.3.1 样品的采集及处理 血清的采集与处理：饲养试验结束后，于清晨未进食前，随机从每个重复组中选3只鸡，用一次性采血管在翅静脉采血10 mL。将采血管固定使血样静置30 min，然后将上层淡黄色液体转移到离心管中，3000 r/min离心15 min制备血清，分装，－20℃贮存。

肝脏的采集与处理：饲养试验结束后，于清晨未进食前，随机从每个重复组中选2只鸡屠宰取肝脏样，用自封袋分装编号，放入液氮内迅速降温，随后取出放入－80℃冰箱内保存。

鸡蛋的采集与保存：饲养试验结束后，随机从每个重复组中取5枚鸡蛋，编号后放入冰箱内4℃恒温保存。

1.3.2 抗氧化指标的测定 肝脏组织和血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：黄嘌呤氧化酶法测定肝脏中SOD活性，硫代巴比妥酸法测定MDA含量，比色法测定肝脏内GSH-Px活性，使用试剂盒进行具体含量的测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按照产品说明书严格进行操作。

蛋黄内GSH-Px、SOD的测定：同肝脏组织内GSH-Px、SOD 的测定。

蛋黄内MDA的测定:准确量取新鲜蛋黄5 g，按1∶4比例加入无水乙醇，漩涡震荡3 min，充分混匀，3500 r/min离心10 min，取上清待测。用试剂盒检测MDA的含量，同上肝脏中MDA的测定。

1.3.3 免疫指标的测定 采用散射速率比浊法测定血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG的含量，使用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定。

1.4 数据处理 所有试验数据使用Excel 2010进行整理，应用SPSS17.0对数据做方差分析，并采用Duncan’s检验法比较各组间差异显著性，试验数据用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡血清抗氧化性能的影响 由表3可知，添加不同剂量富硒乳酸菌制剂的B、C、D组与饲喂基础日粮的对照 A组相比，富硒乳酸菌制剂可明显提高蛋鸡血清内SOD和 GSH-Px的含量（P ＜ 0.05）。B、C、D 组 SOD 的含量比A组分别提高了16.44%、14.28%和13.65%，但各试验组间无明显差异（P＞0.05）。血清内GSH-Px的活性随富硒乳酸菌制剂添加量的升高有升高的趋势，B、C、D组比对照A组分别提高了6.53%、10.18%和12.17%。添加富硒乳酸菌制剂的各组MDA含量明显低于对照A组（P＜0.05），C组MDA含量最低，显著低于 B组和D组（P＜0.05），但B组和D组之间无显著差异（P ＞ 0.05）。

表3 富硒乳酸菌制剂对血清抗氧化指标的影响

2.2 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡肝脏抗氧化性能的影响 由表4可知，与对照A组相比，添加富硒乳酸菌制剂的各组肝脏内GSH-Px活性极显著增强（P＜0.01），比对照 A组分别提高了 24.92%、27.59%和27.97%，但是各添加水平之间无明显差异（P＞0.05）。B、C、D组与A组相比SOD活性有所提高（P＜0.05），并且B、C组和D组之间也存在差异 （P＜0.05），B、C组肝脏内SOD活性高于D组。C、D组肝脏内MDA含量低于A、B组（P＜0.05）。

表4 富硒乳酸菌制剂对肝脏抗氧化指标的影响

2.3 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡蛋黄抗氧化性能的影响 由表5可知，在蛋黄内各组之间SOD活性无显著性差异（P＞0.05），但C组SOD活性最高，比对照A组提高了11.32%。C组蛋黄内MDA含量明显低于其他各组（P＜0.05），比对照A组降低了27.78%。B组与对照A组相比，GSH-Px活性没有差异（P ＞ 0.05），但 C、D 组与A组比较有显著性差异（P＜0.05），分别提高了5.08%和5.26%。

表5 富硒乳酸菌制剂对蛋黄抗氧化指标的影响

2.4 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡血清免疫性能的影响 由表6可看出，在血清中IgA的含量各组间无显著性差异（P＞0.05），但C组高于其他各组，比对照A组提高了7.02%。B、C组和D组与对照A组相比较，血清中IgM的含量明显升高 （P＜0.05），其中C组IgM的含量最高，较A组升高了7.74%。C组与A、B组相比，血清中IgG的含量存在差异（P＜0.05），C组与D组之间IgG含量无差异（P ＞ 0.05）。

3 讨论

3.1 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡抗氧化性能的影响GSH-Px存在于机体的细胞质和线粒体中，是酶促抗氧化防御体系中十分重要的酶，而硒是其活性中心的重要组成部分，可以催化谷胱甘肽反应并且抑制过氧化反应，减少过氧化物对细胞的损伤，清除机体内自由基，保护细胞膜和细胞器免受自由基的干扰和伤害 （赵玉鑫，2007；Ursini，1999）。SOD也是酶促抗氧化防御体系中的重要组成部分，其能将免疫反应中产生的超氧阴离子自由基转化为过氧化氢，再通过GSH-Px和过氧化氢酶转化为H2O和O2。SOD可以反映出体内自由基清除的程度，并且GSH-Px活性升高可减少过氧化物对SOD的影响（龙烁等，2017）。本试验结果表明，富硒乳酸菌制剂可有效提高蛋鸡血清、肝脏和蛋黄中GSH-Px的活性，在血清和肝脏中SOD的活性也显著增强。潘翠玲等（2010）在蛋鸡日粮中分别添加硒水平为0.2、0.5、1.0 mg/kg的富硒益生菌发现，蛋鸡肝脏、全血、肾脏和心肌中GSH-Px和SOD的活性均得到显著提高，并且随着血液中硒含量的增加GSH-Px的活性呈上升趋势。秦顺义等（2015）在雄性AA肉仔鸡日粮中加入0.3 mg/kg的富硒乳酸菌发现，血清内GSH-Px和SOD的活力均极显著高于对照组，这与本试验的研究结果一致。原因可能是日粮中添加硒源提高了机体内硒水平，从而提高了蛋鸡抗氧化酶的活性（Pan等，2007）。本试验结果中，MDA的含量在血清、肝脏和蛋黄中均明显降低。MDA是机体内脂质过氧化的产物，其含量升高会使机体抗氧化水平降低。何柳青等（2012）研究结果显示，以酵母硒形式添加硒0.25mg/kg可极显著降低血清MDA含量。本试验的结果与Jing等（2015）的研究结果也基本一致。说明富硒乳酸菌制剂可以增强抗氧化酶的活性，并抑制脂质过氧化反应，从而提高机体的抗氧化能力。

3.2 富硒乳酸菌制剂对蛋鸡免疫性能的影响硒主要通过三种方式影响机体的免疫功能，包括细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫。硒可通过刺激免疫球蛋白的形成，增强机体体液免疫性能。黄克和等（1990）的试验结果表明，硒可显著提高雏鸡血清IgG水平。在本试验中，添加富硒乳酸菌制剂组血清中IgG的含量提高，并且IgM的含量也得到了显著提高。

4 结论

在日粮中添加富硒乳酸菌制剂可增强蛋鸡的免疫和抗氧化性能，并且对延长产蛋期和保持健康状况有十分积极的影响。根据试验结果综合考虑，在日粮中添加有机硒含量为0.6 mg/kg的富硒乳酸菌制剂，对蛋鸡免疫和抗氧化的影响更为理想。

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This study was designed to investigate the effect of selenium-enriched Lactobacillus products on immunity and antioxidant function in layers.A total of 480 28-week old Hy-Line Brown chickens were randomly divided into 4 groups with 6 repetitions of 20 chickens per repetition.Group A （control） was fed basal diets.Group B，C and D were fed basal diet with 0.3，0.6，0.9 mg/kg selenium-enriched Lactobacillus （organic Se was counted）.Preparatory feeding lasted one week and the trial lasted for 42 d.The results showed that： （1）Compared with group A，the activity of serum superoxide dismutase（SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px） increased significantly （P ＜0.05）.The content of malonaldehyde（MDA）decreased significantly（P ＜ 0.05）.（2）The levels of GSH-Px in group B，C and D in liver differed significantly from group A（P ＜0.01）and SOD were higher than group A （P ＜ 0.05）.The content of MDA in liver of group C and D were lower than group A and B.（3）The levels of GSH-Px in yolk of group D increased significantly comparing with other groups（P ＜ 0.05）.（4）IgM in serum of group B，C and D were impacted significantly comparing with control group A （P ＜0.05）.Therefore,adding selenium-enriched products could increase immunity and antioxidant function of layers and has positive effects on keeping health and extending egg producing period.

Lactobacillus；organic selenium；immunity；antioxidant capacity

S816.7

A

1004-3314（2017）19-0021-04

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171905

吉林省科技厅重点项目（20110236）

*通讯作者