基于古代本草记载的不同产地艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量研究

黄显章 康利平 高丽 张元 郭兰萍 黄璐琦

[摘要]为了评价“海艾”、“蕲艾”、“北艾”、“祁艾”和南阳艾叶品质，利用高效液相色谱法同时测定艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量。采用Agilent Eclipse XDBC18色谱柱（46 mm×250 mm， 5 μm），流动相为乙腈02%磷酸溶液（35∶65），流速 10 mL·min-1，检测波长350 nm，柱温 25 ℃。棕矢车菊素和异泽兰黄素分别在0003～0126 g·L-1 （r=0999 9），0005～0200 g·L-1 （r=0999 9）呈良好的线性关系，平均回收率（n=6） 分别为9914% （RSD 12%），9940% （RSD 073%），说明该方法准确可靠、重复性好，是用于艾叶的质量控制的有效方法。结果表明不同产地艾叶中棕矢车菊素含量差异较小，不同产地艾叶中异泽兰黄素的含量差异较大，淮河以南的浙江宁波、湖北蕲春、湖北襄阳、河南南阳的艾叶和淮河以北汤阴艾叶、安国艾叶中异泽兰黄素含量相对较高。

[关键词]艾葉； 棕矢车菊素； 异泽兰黄素； 含量研究

Quantative analysis of eupatilin and jaceosidin in folium of Artemisia argyi from

different areas in China by RPHPLC based on ancient medicine books

HUANG Xianzhang1，2，3， KANG Liping1， GAO Li3， ZHANG Yuan1， GUO Lanping1， HUANG Luqi1*

（1. State Key Laboratory Breeding Base of Daodi Herbs， National Resource Center for Chinese Materia Medica，

China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

2. Postdoctoral Research Station， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

3. Henan Province Key Laboratory of Zhang Zhongjing Formulae and Herbs for Immunoregulation，

Nanyang Institute of Technology， Nanyang 473004， China）

[Abstract]In order to evaluate the quality of Artemisia argyi from Qichun， Ningbo， Anguo and Nanyang， the contents of eupatilin and jaceosidin were determined by RPHPLC The determination was performed on Agilent Eclipse XDBC18 （46 mm×250 mm， 5 μm） with mobile phase consisted of acetonitrile02% phosphoric acid（35∶65） at the flow rate 10 mL·min-1 The detection wavelength was 350 nm and the column temperature was 25 ℃ The results showed that the amount of eupatilin and jaceosidin had a clear linear relationship in the range of 00030126 g·L-1 （r=0999 9） and 00050200 g·L-1 （r=0999 9）， and the average recovery rates for them were 9914% （n=6， RSD 12%） and 9940% （n=6， RSD=073%）， respectively The results showed that RPHPLC can be used for the quantification of eupatilin and jaceosidin in the folium of A argyi With this method， we found there was no significant difference of jaceosidin content within all the samples collected， but the content of eupatilin was significantly higher in samples from Qichun， Ningbo， Xiangyang and Nanyang， located in the south of Huaihe River compared with these from other areas

[Key words]folium of Artemisia argyi； jaceosidin； eupatilin； quantative analysis

艾叶为菊科植物艾Artemisia argyi Levl et Vant 的干燥叶，具有温经止血、散寒止痛的作用[1]，为我国常用中药材。我国现存第一部医方书《五十二病方》[2]和《黄帝内经》中均有使用艾叶治疗疾病的记载，但历代本草对艾叶道地产地的记载不尽相同。宋代苏颂《本草图经》载：“艾叶、旧不著所出州土，但云生田野，今处处有之，以复道（及四明）者为佳”[3] 。明代刘文泰等撰写的《本草品汇精要》中有艾叶“道地：蕲州、明州”的记载[4]。明代李时珍则对艾叶的道地产地作了详细描述：“（艾叶）宋时以汤阴复道者为佳，四明者图形。近代惟汤阴者谓之北艾，四明者谓之海艾”[5]。《中国道地药材》把产自河北安国（古称祁州）的艾叶称为“祁艾”，并提出了“河北安国的祁艾和湖北蕲春的蕲艾道地特性有待比较”的观点[6]。时至今日，历代本草文献明确提出的艾叶道地产地有“四明”、“复道”、“蕲州”、“祁州”等地，即现在的浙江宁波、河南汤阴、湖北蕲春和河北安国境内，且宁波艾叶被称为“海艾”，汤阴艾叶被称为“北艾”，安国艾叶被称为“祁艾”。endprint

2015年版《中国药典》（一部）以桉油精为指标来控制艾叶的质量，但是桉油精的含量受产地、采集时间和储存时间的影响较大[78]。艾叶中的黄酮类成分棕矢车菊素和异泽兰黄素有多种生理活性，是艾叶的有效成分[913]。在文献报道的UPLCQTOFMS图谱上[14]，以及作者对其水溶性成分研究的LCMS图谱上，发现棕矢车菊素和异泽兰黄素也是艾叶中的主要化学成分，见图1。为了更为全面地评价艾叶的品质，结合历代文献记载艾叶的道地产地和目前艾叶的实际使用情况，本课题组在同一时间（2015年端午节）[15]按照纬度从南到北分别采集浙江宁波余姚、湖北蕲春、河南南阳、河南汤阴、河北安国、山东临沂等地的艾叶，采用RPHPLC同时测定不同产地艾叶中黄酮类成分棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量，为更好的评价艾叶药材的品质及其道地性奠定基础。

1材料

11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪；超声波清洗机（上海早盈精密清洗机械有限公司）；

SA224SCW电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）。

12试药棕矢车菊素对照品（ jaceosidin，纯度为9850%，成都普菲德生物技术有限公司，批号 151010）和异泽兰黄素对照品（eupatilin，纯度为9948%，成都普菲德生物技術有限公司，批号 150120）；乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；甲醇（一级色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其余试剂均为分析纯。

13批艾叶样品分别采自浙江宁波余姚、湖北蕲春、湖北襄阳市郊、河南南阳市郊、河南西峡、河南桐柏、河南汤阴、河北安国、河北博野和保定市郊。经鉴定均为菊科植物艾A argyi的干燥叶。

2方法与结果

21色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse XDBC18（46 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：乙腈02%磷酸溶液（35∶65）；检测波长 350 nm；流速 10 mL·min-1；柱温 25 ℃；进样量 20 μL。混合对照品和样品的液相色谱图见图2。

22对照品溶液的制备精密称取棕矢车菊素对照品63 mg和异泽兰黄素对照品100 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备液，置4 ℃冰箱避光保存，备用。

23供试品溶液的制备取艾叶粉末05 g，精密称定，精密加入甲醇20 mL，称质量，超声提取30 min，放凉，再次称质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，以滤纸滤过，取续滤液，过045 μm微孔滤膜，即得。

24线性关系考察精密吸取混合对照品贮备液0125，025，05，10，20，30，40，50 mL，分别置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀释并定容，摇匀。分别吸取20 μL，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以对照品质量浓度（X，g·L-1）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得棕矢车菊素、异泽兰黄素的回归方程分别为Y=79 790X+33585（r=0999 9，n=8）和Y=76 226X+55959（r=0999 9，n=8）。结果表明，棕矢车菊素和异泽兰黄素的质量浓度分别在0003～0126，0005～0200 g·L-1与各自峰面积积分值呈良好的线性关系。

25精密度试验取同一混合对照品溶液20 μL，按21项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果显示，棕矢车菊素和异泽兰黄素峰面积的RSD 分别为071%，070%（n=6），表明仪器精密度良好。

26稳定性试验 取艾叶样品（编号 Ar9），按23项下方法制备供试品溶液，室温避光保存，分别于0，2，4，6，8，12，24 h按21项下色谱条件进样，测定峰面积。结果显示，棕矢车菊素和异泽兰黄素峰面积的RSD分别为17%，075%（n=7），表明供试品溶液在24 h 内稳定。

27重复性试验取艾叶样品（编号 Ar9）6 份，每份05 g，精密称定，分别按23项下方法制备供试品溶液，再按21项下色谱条件进样，测定峰面积。结果显示，棕矢车菊素的平均质量分数为011%，RSD 12%（n=6）；异泽兰黄素的平均质量分数为023%，RSD 12%（n=6），表明本方法重复性良好。

28加样回收率试验取已知含量的艾叶样品（编号 Ar9）6 份，各025 g，精密称定，分别精密加入棕矢车菊素和异泽兰黄素对照品适量，按23项下方法制备供试品溶液，再按21项下色谱条件进样，测定峰面积，计算加样回收率，见表1。

29样品含量测定取13 批艾叶样品，分别按23项下方法制备供试品溶液，按21项下色谱条件进样，记录峰面积，以峰面积计算样品含量，见表2。

3结论

本课题组采用RPHPLC对不同产地的13批艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素2种有效成分同时进行含量测定。结果表明，从南到北不同产地艾叶中棕矢车菊素含量差异较小，质量分数在004%～011%；不同产地艾叶中异泽兰黄素含量差异较大，整体上看，淮河以南的浙江宁波、湖北蕲春、湖北襄阳、河南南阳的艾叶中异泽兰黄素含量相对稳定，质量分数在019%～024%；淮河以北地区，文献记载的汤阴艾叶和安国（古称祁州）艾叶所含异泽兰黄素含量相对较高，其他地区艾叶异泽兰黄素含量较低。

4讨论

2015年版《中国药典》（一部）以桉油精为指标来控制艾叶的质量，但是桉油精的含量受产地、采集时间和储存时间的影响较大[78]，而艾叶中的黄酮类成分矢车菊素和异泽兰黄素有多种生理活性，结构稳定，是艾叶的有效成分[915]，因此，本实验建立了HPLC同时测定艾叶药材中棕矢车菊素和异泽兰黄素的方法。研究结果表明，该方法重复性良好，灵敏度高，操作简便，可以作为艾叶药材质量控制的方法[1618]。endprint

本论文根据文献记载，在同一时间采集了“海艾”（宁波艾叶）[34]、“蕲艾”（蕲春艾叶）[4 5]、“北艾”（汤阴艾叶）[3，5]、“祁艾”（安国艾叶）[6]和南阳艾叶，测定艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量。结果表明，不同产地艾叶中棕矢车菊素含量普遍不高，差异较小；不同产地艾叶中异泽兰黄素含量差异较大，淮河以南地区的宁波、蕲春、南阳艾叶中异泽兰黄素含量较高且相对稳定，淮河以北地区艾叶中异泽兰黄素含量差异较大，文献记载的汤阴艾叶[3]和祁州艾叶[6]所含异泽兰黄素含量相对较高，其他地区艾叶所含异泽兰黄素含量较低，提示艾叶中异泽兰黄素含量与分布区域及区域的土壤、光照等小环境有一定的联系。

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[责任编辑吕冬梅]endprint