重楼同属植物长柱重楼与药用重楼的药效学对比研究

2017-10-20李洪梅孙建辉康利平霍海如李小芹黄圆圆陈敏黄璐琦

中国中药杂志 2017年18期

李洪梅孙建辉康利平霍海如李小芹黄圆圆陈敏黄璐琦

[摘要]重楼为多种中成药的原料，由于市场需求量大幅增长，野生重楼资源日益减少，人工栽培生长缓慢，导致重楼资源紧缺。该研究比较了重楼同属植物长柱重楼和药典收载的云南重楼、七叶一枝花在镇痛、抗炎、止血方面的药理活性，以其扩大重楼药用资源范围，保护重楼野生资源，满足市场需求。该实验研究表明长柱重楼和云南重楼、七叶一枝花均具有镇痛、抗炎、止血作用，可明显降低醋酸致小鼠扭体次数，抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高，缩短出血时间和凝血时间，且长柱重楼与云南重楼、七叶一枝花的镇痛、抗炎、止血作用相当。

[关键词]长柱重楼；镇痛；抗炎；止血

Comparative pharmacodynamics study on Paris forrestii and

pharmacopoeial Paridis Rhizoma

LI Hongmei1， SUN Jianhui1， KANG Liping2， HUO Hairu1， LI Xiaoqin1，

HUANG Yuanyuan2， CHEN Min2*， HUANG Luqi2*

（1. Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700；

2. State Key Laboratory of Daodi Herbs，National Resource Center for Materia Medica， China Academy of

Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract]Paris is a raw material of a variety of Chinese medicines， which has become deficient in resource due to market demand substantial growth and wild Paris resources reducing increasingly and the artificial cultivation slow growth This study compared pharmacological activity in analgesia and antiinflammatory and hemostasis effects of P forrestii with pharmacopoeial Paridis Rhizoma to expand its range of Paris medicinal resources and protect wild resources of Paris and meet market demand The experimental study showed that P forrestii and P polyphylla var yunnanensis and P polyphylla var chinensis had analgesic， antiinflammatory and hemostatic effects They can significantly reduce the number of writhing and inhibit rat foot swelling induced by carrageenan and mice capillary permeability induced by acetic acid and short the bleeding time and clotting time Their function is equivalent

[Key words]Paris forrestii； analgesia； antiinflammatory； hemostatic effect

重樓作为一种重要的中成药原料，是云南白药、宫血宁胶囊、季德胜蛇药片、抗病毒颗粒等产品的主要原料。近年来，市场需求量大幅增长，巨大的需求缺口导致药材价格飞涨，大量的采挖使得野生重楼资源日益减少，而人工驯化栽培存在生长缓慢、繁殖率低等困难。为了保护重楼野生资源，满足市场需求，目前对重楼同属植物的化学成分、药理作用、临床应用、资源调查、人工栽培等多方面的研究已广泛开展[1]。

《中国药典》[2]2015年版收载的重楼Paridis Rhizoma为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var yunnanensis （Franch） Hand Mazz 或七叶一枝花P polyphylla Smith var chinensis（Franch） Hara的干燥根茎。我国重楼属植物众多，按照李恒老师分类系统，我国有19 种重楼属植物[3]，包括长柱重楼P forrestii（Takht） H Li、南重楼P vietnamensis （Takht） H Li等。本研究在前期文献调研、资源调查、化学成分研究基础上，比较了重楼同属植物长柱重楼和药典收载的云南重楼、七叶一枝花在镇痛、抗炎、止血方面的药理活性，以其扩大药用重楼资源范围，保护重楼野生资源，满足市场需求。

1材料

11受试药物云南重楼水提物，含生药083 g·mL-1；七叶一枝花水提物，含生药047 g·mL-1；长柱重楼水提物，含生药050 g·mL-1；长柱重楼醇提物，含生药067 g·mL-1，由中国中医科学院中药资源中心提供。

12动物ICR小鼠，SPF级，体质量18～22 g；SD大鼠，SPF级，体质量180～200 g，雌雄各半，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供[动物生产许可证号 SCXK（京）20120001]。小鼠和大鼠饲育在屏障环境下[实验动物使用许可证号 SYXK（京）20130035]。endprint

13试剂角叉菜胶，Sigma公司产品（批号 021M0038V）；伊文思兰，Solarbio公司产品（批号50813022）；冰醋酸，国药集团化学试剂有限公司产品（批号20150704）。

14仪器PV200足趾容积测量仪，成都泰盟科技有限公司产品；AVE型半自动生化分析仪，爱威科技实业有限公司产品。

2方法

21对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响[4]分组：取健康ICR小鼠，SPF级，体质量18～20 g，将小鼠按体质量随机分组，分别为模型对照组、云南重楼水提物、七叶一枝花水提物、长柱重楼水提物、长柱重楼醇提物各高、中剂量组（660，330 g·kg-1），每组10只，雌雄各半。

给药：各组分别灌胃给予相应药物，模型对照组给予相同体积的蒸馏水（20 mL·kg-1），每日1次，连续给药3 d。

指标观察：末次药后1 h后腹腔注射08%醋酸溶液10 mL·kg-1，观察记录各小鼠5 min后15 min内扭体次数，计算其抑制率。

22对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响[4]分组：选取健康SD大鼠，SPF级，雄性，体质量180～200 g，将大鼠按体质量随机分组，分别为模型对照组、云南重楼水提物、七叶一枝花水提物、长柱重楼水提物、长柱重楼醇提物各高、中剂量组（162，081 g·kg-1），每组10只。

给药：各组分别灌胃给予相应药物，模型对照组给予相同体积的蒸馏水（10 mL·kg-1），每天1次，连续给药3 d。

指标观察：试验当天先用足趾容积测定仪测定大鼠右后足跖容积为基础值，末次药后于大鼠右后足跖中央皮内注射1%角叉菜胶溶液致炎01 mL，测定致炎后1，2，4，6 h的肿胀值（致炎后与致炎前足趾容积之差）。

23对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响[5]分组、给药同21。指标观察：末次药后1 h，尾静脉注射05%依文思兰液（10 mL·kg-1），10 min后腹腔注射08%醋酸（10 mL·kg-1），再10 min后腹腔注射5 mL生理盐水注射液，处死小鼠，轻揉腹部50次，剪开皮肤，用吸管吸取腹腔液，离心，取上清在波长590 nm下测吸光度。

24对出血时间的影响[6]分组：取健康ICR小鼠，SPF级，体质量18～20 g，将小鼠按体质量随机分组，分别为模型对照组、云南重楼水提物、七叶一枝花水提物、长柱重楼水提物各高、中剂量组（330，165 g·kg-1），每组10只，雌雄各半。

给药：各组分别灌胃给予相应药物，模型对照组给予相同体积的蒸馏水（20 mL·kg-1），每日1次，连续给药3 d。

指标观察：末次药后1 h，采用剪尾法，将小鼠固定，以利剪将小鼠尾尖3 mm处剪断，待血液自行流出开始计时，此后每隔30 s用滤纸吸去血滴1次，至血液自然停止为止，即为出血时间。

25对凝血时间的影响[6]分组、给药同24。指标观察：末次药后1 h，采用玻片法，摘去一侧眼球即有血液流出，于载玻片两端各滴1滴血，血滴直径约5～10 mm，立即开始记时，此后每隔30 s用干燥针头自血滴边缘向里轻轻挑动1次，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间，以t检验进行组间比较。

26统计分析实验数据均以±s表示，应用SPSS 170统计软件进行分析，t检验进行组间比较，P<005时为显著差异。

3结果

31对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物和长柱重楼醇提物对醋酸致小鼠疼痛反应具有抑制作用，可不同程度地降低扭体次数，云南重楼水提物（330 g·kg-1）、七叶一枝花水提物（660 g·kg-1）、长柱重楼水提物（660 g·kg-1）、长柱重楼醇提物（660，330 g·kg-1）与模型组相比有显著性差异，表明云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物和长柱重楼醇提物均具有镇痛作用，且长柱重楼与云南重楼、七叶一枝花水提物的镇痛作用相比未见明显差异（表1）。

32对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物和长柱重楼醇提物所试剂量在致炎后1～6 h可明显抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀，与模型组相比有显著性差异，表明云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物和长柱重楼醇提物均具有抗炎作用，且长柱重楼与云南重楼、七叶一枝花水提物的抗炎作用相比未见明显差异（表2）。

33对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响云南重楼水提物、七叶一枝花水提物和长柱重楼醇提物所试剂量均可明显抑制小鼠腹腔毛细血管通透性的增高，其平均吸光度值明显低于模型对照组，与模型对照组相比具有显著性差异，表明云南重楼、七叶一枝花水提物和长柱重楼醇提物所试剂量均具有抗炎作用，且长柱重楼醇提物与云南重楼、七叶一枝花水提物的抗炎作用相比未见明显差异（表3）。

34对出血时间和凝血时间的影响云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物所试剂量均可明显缩短小鼠出血时间，云南重楼水提物高剂量、七叶一枝花水提物高、中剂量组、长柱重楼水提物高、中剂量组可明显缩短小鼠凝血时间，与模型对照组相比具有显著性差异。表明云南重楼、七叶一枝花、长柱重楼水提物具有止血作用，且长柱重楼与云南重楼、七叶一枝花水提物的止血作用相比未见明显差异（表4）。

4讨论

重楼应用历史悠久，始载于《神农本草经》，名为蚤休，列为下品。《滇南本草》始以重楼作为其正式药名，记载重楼为：“消诸疮，无名肿痛，利小便。” 《中国药典》2015年版记载重楼具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊的功能，用于疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌扑伤痛，惊风抽搐。

重楼属植物全世界共有26 个品种，以横断山脉南段为核心的川、滇两省是重楼属植物在欧亚大陸的地理分布中心，也是重楼药材的传统产区。云南重楼P polyphylla var yunnanensis和七叶一枝花P polyphylla var chinensis为药典收载。重楼同属植物长柱重楼Pforrestii于1968年被Takhtajan[7]将腾冲采集到的重楼标本定种为P forrestii Takhtspnov，1983年李恒等[8]结合采自保山和腾冲的标本，通过查阅爱丁堡植物园所藏腾冲标本G forrest，比较其形态特征和采集地点，认为它们为同一自然种，并最终命名为P forrestii （Takht） HLi。长柱重楼虽然没有被国家药典收载，但目前重楼野生资源如此匮乏，长柱重楼作为重楼药材广泛使用，在模式产地分布广、易栽培、产量高。endprint

现代药理研究表明重楼具有抗肿瘤、消炎、抑菌、镇静、镇痛、止血等作用等多种药理作用[9]，其临床应用广泛，含重楼的中成药云南红药胶囊和宫血宁胶囊临床应用有显著的止血和止痛疗效[1011]；七叶一枝花软膏[12]具有抗炎止痛效果。故本实验中采用镇痛实验、抗炎实验、止血实验比较了重楼同属植物长柱重楼和药典收载重楼的药理活性差异。研究表明长柱重楼和云南重楼、七叶一枝花均具有镇痛、抗炎、止血作用，可明显降低醋酸致小鼠扭体次数，抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高，缩短出血时间和凝血时间，且长柱重楼与云南重楼、七叶一枝花的镇痛、抗炎、止血作用相比未见差异。因此，在进一步化学成分、临床研究基础上，长柱重楼有望被收载作为正品重楼使用。

[参考文献]

[1]成莉，甄艳，陈敏，等. 扩大重楼药用资源研究进展[J]中国中药杂志，2015，40（16）：3121.

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[3]李恒重楼属植物[M]北京：科学出版社，2013： 7.

[4]李仪奎中药药理实验方法学[M]上海：上海科技出版社，1991：353，299.

[5]陈奇中药药理研究方法学[M]. 北京：人民卫生出版社，1993： 305.

[6]刘彬，张海涛，刘慧明，等鲎素对小鼠出血时间和凝血时间的影响[J]广东医学院学报，2015，33（1）：49.

[7]Takhtajan AA revision of Daiswa（Trilliaceae）[J]Brittoma，1983，35（3）： 255.

[8]李恒重樓属植物[M]北京：科学出版社，1998： 57.

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[10]唐厚秀. 云南红药胶囊用于人工流产术后100 例临床观察[J]. 广西医学，2010，32（5）：570.

[11]吴婵玉，侯建伟. 宫血宁在药物流产术中的临床应用[J]. 医学信息，2010，23（7）：2492.