盐负荷和碱负荷对孕晚期大鼠离体子宫收缩力和催产素受体水平的影响

胡梦双，李巨

（1. 锦州医科大学中国人民解放军第202医院研究生培养基地，沈阳 110003；2. 中国人民解放军第202医院妇产科，沈阳 110003）

盐负荷和碱负荷对孕晚期大鼠离体子宫收缩力和催产素受体水平的影响

胡梦双1，李巨2

（1. 锦州医科大学中国人民解放军第202医院研究生培养基地，沈阳 110003；2. 中国人民解放军第202医院妇产科，沈阳 110003）

目的探讨盐负荷和碱负荷对孕晚期大鼠离体子宫收缩力和催产素受体（OXTR）水平的影响。方法将42只孕晚期大鼠随机均分为3组，A组饮用自来水，B组饮用2% NaCl溶液，C组饮用5% NaHCO3溶液；分别于0、12、24、36、48、60和72 h时从3组中各随机选取2只大鼠麻醉，先剖腹采腹主动脉血行动脉血气分析，再将子宫纵向剖取数个均等肌条，检测其肌张力，最后采用ELISA法测定肌条中OXTR的含量。结果3组在0 h时血Na+、HCO3-浓度差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；在其余各时间点，B组和C组血Na+浓度均显著高于A组（P ＜ 0.05），C组血HCO3-浓度显著高于A组和B组（P ＜ 0.05）。3组在0 h时子宫肌条收缩的振幅和频率差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；B组在其余各时间点的振幅和频率（除72 h振幅外）均显著高于A组（P ＜ 0.05）；C组在12、24和60 h时振幅显著高于A组（P ＜ 0.05），在48、60和72 h时频率显著高于A组（P ＜ 0.05）。3组0 h时OXTR含量差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；其余各时间点，B组OXTR含量显著高于A组（P ＜ 0.05）；C组在12、24、60和72 h时OXTR含量显著高于A组（P ＜ 0.05）。结论盐负荷可使子宫收缩振幅、频率及子宫表面OXTR表达显著增强；碱负荷60 h时可使子宫收缩振幅、频率及OXTR表达三者均显著增强。

盐负荷； 碱负荷； 子宫； 催产素受体； 肌张力； ELISA

Abstract ObjectiveTo investigate changes in uterine contractility and oxytocin receptor （OXTR） level after salt and alkali load in rats during late pregnancy.MethodsA total of 42 pregnant rats were randomly divided into groups given tap water （group A），2% NaCl solution （group B），or 5% NaHCO3solution （group C）. Two rats were taken from each of the three groups at 0，12，24，36，48，60，and 72 h，respectively，for arterial blood gas analysis and preparation of uterine muscle strips for muscle tension measurement. The OXTR levels were measured using ELISA.ResultsThere were no significant differences in serum sodium and bicarbonate ion concentrations，muscle tension，or OXTR levels among the groups at 0 h （P ＞ 0.05）. At other time points，the sodium ion concentration in group B and group C was significantly higher than in group A （P ＜ 0.05），and bicarbonate ion concentration in group C was higher than in group A and group B （P ＜0.05）. Muscle tension （including amplitude and frequency） in group B was significantly greater than in group A （except at 72 h） （P ＜ 0.05）.The amplitude in group C was higher than in group A at 12，24，and 60 h （P ＜ 0.05），while the frequency was higher than in group A at 48，60，and 72 h （P ＜ 0.05）. The OXTR level in group B was significantly higher than in group A （P ＜ 0.05），and was higher in group C than in group A at 12，24，60，and 72 h （P ＜ 0.05）.ConclusionSalt and alkali loading can increase uterine contractility and OXTR levels at 60 h.

Keywordssalt load；alkali load；uterus；oxytocin recepter；muscle tension；ELISA

催产素（oxytocin，OXT）是治疗产后出血的一线 用药，通过与子宫平滑肌细胞上的催产素受体（oxytocin recepter，OXTR）结合来增强子宫收缩。OXTR属于G蛋白耦联受体家族［1］，与其他G蛋白耦联受体一样，OXTR会由于同源的反复刺激而导致快速分子脱敏［2］。临床上，越来越多的学者发现应用OXT治疗产后出血并不都能取得良好疗效，并且OXT在使用一段时间和（或）一定剂量后疗效有所降低，因此有些产妇不得不采取手术治疗，甚至切除子宫。为了解决这个问题，寻找能够增强子宫收缩的方法尤为重要。本研究通过分别给予孕晚期大鼠一定浓度的盐负荷和碱负荷，观察不同时间大鼠血Na+、HCO3-浓度变化和离体子宫肌条肌张力大小及其表面OXTR表达情况，探讨盐负荷或碱负荷是否可以增加子宫平滑肌的收缩力，以及是否可以增加子宫平滑肌细胞表面OXTR的表达。

1 材料与方法

1.1 实验动物

42只健康孕17 d的SD大鼠，体质量350～400 g，由中国医科大学实验动物中心提供。确保饲养期间温度、湿度、光照及消毒等条件适宜，所有大鼠均给予专用颗粒饲料饲养，供水按照实验分组要求配制。

1.2 实验方法

1.2.1 分组：将42只孕17 d的SD大鼠随机平均分为3组，每组14只。A组，空白对照组；B组，盐负荷组；C组，碱负荷组。3组大鼠依次给予自由饮用自来水、2% NaCl溶液和5% NaHCO3溶液，于饮用水0、12、24、36、48、60和72 h时分别从3组中随机选取2只大鼠进行实验。

1.2.2 动脉血气分析：将各组各时间点取出的大鼠在10%水合氯醛下麻醉，纵向剖开腹部，用一次性采血针采取腹主动脉血，每只大鼠取血2管，做好标记后立即送检行动脉血气分析。

1.2.3 肌张力测定：采血后，用止血钳夹闭血管，充分暴露“Y”字型子宫，将子宫颈纵向切开至一侧子宫底部，轻轻剔出子宫内的胎鼠，将子宫铺平，均等切取子宫肌条，每只大鼠子宫取6个肌条，做好标记立即置于台式液中，另一侧方法相同；然后将取下的每个肌条两端均用0号手术缝合线进行打结，将恒温平滑肌槽（HW200S，成都泰盟）温度调整为37℃，槽内加入足量台式液，将每个打结好的子宫肌条分别置于恒温平滑肌槽内，顶端和底端打结处与张力传感器（BL-420S，成都泰盟）两端连接，调节张力传感器至2 g左右的重量，对所有肌条分别进行肌张力测定。

1.2.4 OXTR含量测定：肌张力测定后，用总蛋白提取试剂盒（南京诺唯赞生物科技有限公司）提取肌条中的总蛋白，然后将提取的蛋白分装放入-80 ℃低温冰箱保存备用，防止蛋白反复冻融影响结果；最后用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测分装好的总蛋白中OXTR含量。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 动脉血气分析

3组基础血Na+、HCO3-浓度（即负荷0 h时）的差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。其他各时间点，B组和C组血Na+浓度均高于A组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05），B、C组间血Na+浓度无统计学差异（P ＞0.05）；C组血HCO3-浓度分别高于A组、B组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05），A、B组间血HCO3-浓度无统计学差异（P ＞ 0.05）。见表1。

2.2 肌张力测定结果

3组肌条收缩的基础振幅和频率（即负荷0 h时）差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。除72 h外，其他各时间点B组振幅均高于A组，差异有统计学意义（P ＜0.05），B组频率在各时间点均高于A组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）；C组在12、24和60 h时振幅高于A组，差异有统计学意义（P ＜ 0.05），C组在48、60和72 h时频率高于A组，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；B组在12 h、24 h时振幅低于C组（P ＜ 0.05），而频率高于C组（P ＜ 0.05），B组在36和48 h时振幅高于C组（P ＜ 0.05），而48 h时频率低于C组（P ＜ 0.05），36 h时B、C组频率无统计学差异（P ＞ 0.05）。见表2。

2.3 OXTR含量检测结果

3组肌条中基础OXTR含量（即负荷0 h时）差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。在其他各时间点，B组OXTR含量高于A组，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；C组OXTR含量在12、24、60和72 h时高于A组，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。B、C组比较，由表2可知，在各个时间点均无振幅和频率一致性增高或降低，故比较肌条中OXTR的含量无意义。见表3。

表1 各组各时间点动脉血气分析结果（mmol/L）Tab.1 Arterial blood gas analysis in the three groups at each time point （mmol/L）

表2 各组各时间点肌条收缩振幅和频率的比较Tab.2 Muscle contraction amplitude and frequency in the three groups at each time point

表3 各组各时间点肌条中OXTR含量的比较（ng/mL）Tab.3 The OXTR content in muscle strips in the three groups at each time point （ng/mL）

3 讨论

国内外已有很多研究发现OXTR存在脱敏现象，如BALKI等［3］将孕鼠子宫肌层片段预先暴露于OXT中，与预先暴露于生理盐水中的对照组比较，发现其子宫肌层的收缩振幅降低。YAMAGUCHIA等［4］也发现高剂量长时间使用OXT可能会导致子宫肌层OXTR脱敏，从而导致OXT临床功效降低。

由于子宫收缩的调节与早产、产程进展及产后出血等息息相关，故在临床上有效控制子宫收缩尤为重要。有研究［5］报道慢性盐负荷可以使非孕大鼠下丘脑视上核中OXT hnRNA表达上调，并且使视上核中分泌至外周的OXT增多。JOHNSON等［6］报道通过使用新一代RNA测序方法检测在正常渗透压和盐负荷条件下大鼠视上核中的基因表达，结果显示在慢性盐负荷期间，视上核中OXT和精氨酸加压素基因表达几乎翻倍，并且通过获得的实时定量PCR数据分析证实。

盐负荷可使血浆渗透压升高，刺激下丘脑中渗透性神经元即大细胞神经元分泌OXT，OXT被转运至外周，作用于子宫，与子宫肌细胞表面OXTR结合，使子宫收缩。本研究结果显示，盐负荷72 h内（除72 h振幅外）可使子宫收缩的振幅和频率均显著增加，而且可使子宫肌条OXTR表达上调。这与YUE等［5］研究结果一致，盐负荷不仅可使下丘脑中OXT hnRNA表达上调，而且可使子宫肌层OXTR表达上调。另外，本研究结果显示盐负荷72 h时B组和A组的振幅差异无统计学意义，分析可能是因为实验对象为孕晚期大鼠，负荷72 h时大鼠接近临产，子宫过度伸张，导致盐负荷组子宫振幅的增加与对照组无显著差异。

有临床研究［7］报道，产前静滴一定浓度NaHCO3溶液的孕妇与未静滴NaHCO3溶液的孕妇相比，产后出血发生率降低，分析可能是因为临产时产妇生理疼痛增多、精神紧张等，加上临产时产妇过度换气，易出现呼吸性碱中毒和代谢性酸中毒，从而对子宫平滑肌的收缩产生干扰，而相关的动物实验及其具体机制国内外尚未见报道。本研究对孕晚期大鼠施加碱负荷，结果显示，在负荷12、24和60 h时，C组肌条收缩的振幅显著高于A组；在负荷48、60和72 h时，C组肌条收缩频率显著高于A组；而C组和A组OXTR含量比较，除36 h外，其余各时间点差异均有统计学意义。综合可知，除碱负荷36 h外，其余各时间点的振幅或频率的增加尚与OXTR含量的增加一致，而在60 h时碱负荷组肌条收缩的振幅、频率和OXTR含量均显著增加。这也证实了谢秀敏等［7］的研究结果。

盐负荷和碱负荷在一定程度上均可增强子宫收缩力和OXTR的表达，这不仅可为OXT用于治疗产后出血中出现的脱敏现象提供新的思路，而且可为临床上子宫收缩调节的研究提供一定的理论基础。然而，一些具体的更深入的机制及如何权衡负荷量与负荷后产生的不良反应间的关系等有待进一步的研究。

［1］ KIMURA T，OGITA K，KUMASAWA K，et al. Molecular analysis of parturition via oxytocin receptor expression ［J］. Taiwan J Obstet Gynecol，2013，52（2）：165-170. DOI：10.1016/j.tjog.2013.04.004.

［2］ ZINGG HH，LAPORTE SA. The oxytocin receptor ［J］. Trends Endocrinol Metab，2003，14（5）：222-227.

［3］ BALKI M，ERIKSOUSSI M，KINGDOM J，et al. Oxytocin pretreatment attenuates oxytocin-induced contractions in human myometrium in vitro［J］. Anesthesiology，2013，119（3）：552-561. DOI：10.1097/ALN.0b013e318297d347.

［4］ YAMAGUCHI ET，SIAULYS MM，TORRES ML. Oxytocin in cesarean-sections.What’s new? ［J］. Braz J Anesthesiol，2016，66（4）：402-407. DOI：10.1016/j.bjane.2014.11.015.

［5］ YUE C，MUTSUGA N，SUGIMURA Y，et al. Differential kinetics of oxytocin and vasopressin heteronuclear RNA expression in the rat supraoptic nucleus in response to chronic salt loading in vivo［J］.J Neuroendocrinol，2008，20（2）：227-232. DOI：10.1111/j.1365-2826.2007.01640.x.

［6］ JOHNSON KR，HINDMARCH CC，SALINAS YD，et al. A RNA-Seq analysis of the rat supraoptic nucleus transcriptome：effects of salt loading on gene expression ［J］. PloS One，2015，10（4）：1-28.DOI：10.1371/journal.pone.0131892.

［7］ 谢秀敏，郭丽璇，陈晓敏. 葡萄糖酸钙与碳酸氢钠联合应用防治自然分娩产后出血的临床疗效观察［J］. 实用医学杂志，2013，29（8）：1373-1374. DOI：10.3969/j.issn.1006-5725.2013.08.076.

（编辑 陈 姜）

Effects of Salt and Alkali Load on Isolated Uterine Contractility and Oxytocin Receptor Level in Rats During Late Pregnancy

HU Mengshuang1，LI Ju2

（1. Joint Graduate Training Base of No. 202 Hospital of PLA，Jinzhou Medical University，Shenyang 110003，China； 2. Department of Obstetrics and Gynecology，No. 202 Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

R714.46

A

0258-4646（2017）10-0891-04

http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20170927.1452.014.html

10.12007/j.issn.0258‐4646.2017.10.007

辽宁省科学技术计划（2014225005）

胡梦双（1991 -），女，硕士研究生.

李巨，E-mail：liju202@126.com

2017-06-07

网络出版时间：2017-09-27 14:52