两种方法检测中国芦荟不同部位多糖含量

2017-10-11林岸清程广强

福建农业科技 2017年6期

关键词：芦荟伏安苯酚

林岸清，程广强

(福建省测试技术研究所 350003)

两种方法检测中国芦荟不同部位多糖含量

林岸清，程广强

(福建省测试技术研究所 350003)

以苯酚-硫酸显色反应法和电化学差示脉冲伏安法，测定比较芦荟的凝胶、整叶、叶皮和根茎的多糖含量，结果表明：苯酚-硫酸显色反应法和电化学差示脉冲伏安法均取得良好的线性关系、精密度和回收率；芦荟的多糖含量以根茎最高，叶片的皮次之，凝胶最少。

中国芦荟；多糖；苯酚-硫酸显色法；电化学差示脉冲伏安法

Abstract: Polysaccharide contents in gel, whole leaf, leaf epidermis and rootstalk of Chinese Aloe were measured by phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry. The results showed that both the phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry had good linear relation, precision and recovery. The content of polysaccharide in the rootstalk of aloe was the highest, the leaf epidermis was inferior and the gel was the lowest.

Keywords: Chinese aloe; polysaccharide; phenol-sulfuric acid coloration method; electrochemical differential pulse voltammetry

芦荟是百合科芦荟属植物，其品种至少有300种以上，品种间差别很大，形态万千，深得人们喜爱。中国芦荟，又叫斑纹芦荟，已载入中国药典[1]，味苦性寒，归肝经、心经、胃经、大肠经，可以治疗肝火头痛、目赤肿痛、热解便秘、烫伤、咳嗽，也可美容，临床上应用于五官科、内科、外科、妇科、对肿瘤的治疗、X线损伤的治疗等[2]。近年来芦荟在医药、美容和日用品方面开拓了广大的市场，但芦荟深加工技术还比较薄弱。芦荟多糖是芦荟的主要活性成分之一，是芦荟产品开发极其重要的部分[3-4]。本文通过采用苯酚-硫酸显色反应法和电化学差示脉冲伏安法测定比较芦荟的不同部位的多糖含量，为芦荟多糖的开发和研究提供参考。

1 材料与方法

1.1试验材料

试验所需仪器：CHI660B电化学分析仪(上海辰华仪器公司)、Ag/AgCl参比电极(上海辰华仪器公司)、AL204电子分析天平(Mettler-Toledo公司)、T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、多功能粉碎机(北京兆易科技有限公司)。

试验所需试剂：葡萄糖为色谱纯试剂，无水乙醇、苯酚、浓硫酸、碳酸钠、碳酸钡、铁氰化钾均为分析纯试剂。

试验所用中国芦荟取自福建省福州市晋安区一农场。

1.2多糖提取方法

取成熟新鲜的中国芦荟整株，洗净，先掰下芦荟叶，取得根茎，芦荟叶剥皮，刮下叶内胶体部分，分别将芦荟凝胶、叶皮、整叶和根茎打浆混匀。分别称取10.0 g样品3份，加无水乙醇，静置沉淀12 h，4000转/min离心15 min，弃去上清液，再加80%乙醇溶液30 mL，搅拌清洗滤液，4000转/min离心15 min，弃去上清液。滤渣加80℃左右的热水100 mL，搅拌提取20 min，过滤得滤液，滤渣用热水洗3次，合并滤液，定容至500 mL，得4种不同部位的芦荟多糖提取液。

1.3测定方法

1.3.1苯酚—硫酸显色反应法精确称取葡萄糖100.0 mg，置100 mL容量瓶中，蒸馏水溶解定容至刻度，得1000 μg/mL葡萄糖标准储备液。准确移取标准液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加水至刻度。分别取上述溶液1.0 mL置10 mL具塞试管中，加1.0 mL 5%苯酚溶液(取3.2 mL 80%苯酚，用水定容至50 mL容量瓶中，必须现配现用)。加入5.0 mL浓硫酸，注意移液管必须垂直于液面上10 cm左右的距离，不碰壁，匀速加入试管中。摇匀，室温静置30 min，以试剂空白为参比，在490 nm波长处测定吸光度，以吸光度A对浓度C(μg/mL)作回归方程。

1.3.2电化学差示脉冲伏安法精确移取上述1.3.1的1000 μg/mL葡萄糖标准储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL分别置于50 mL的容量瓶中，加水定容，摇匀。分别取上述溶液各2.0 mL置于10 mL具塞试管中,各管再加入5 mmol/L K3Fe(CN)6溶液2.0 mL(准确称取K3Fe(CN)60.0825 g与Na2CO30.53 g，用二次蒸馏水溶解转移至50 mL容量瓶中稀释至刻度)，混匀，置沸水浴中反应15 min，冷却至室温。将试管中反应液分别移入10 mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，转入电解池中。每次测量前通高纯度N25 min以除去溶液中的O2, 将预处理的电极浸入电解液中开路搅拌富集2 min，静置10 s，记录从-0.2 ～ +0.8 V电位测定葡萄糖标准液的差示脉冲伏安曲线，以空白溶液测定所得曲线进行背景校正，测量其氧化峰电流，以氧化峰电流Ip对浓度C(μg/mL)作直线回归。

1.4精密度试验

分别平行取10份等体积的芦荟整叶的多糖提取液，5份用于苯酚-硫酸法显色后测定吸光度，5份用于电化学法测定氧化峰电流。

1.5回收率试验

精密量取芦荟凝胶的多糖提取液10 mL于25 mL容量瓶中，同样的提取液做4份，再分别加入1000 μg/mL葡萄糖标准溶液0.5、0.8、1.0、1.5 mL于容量瓶中，加水至刻度。分别取这4种溶液按上述的苯酚—硫酸法和电化学法做回收试验。

2 结果与分析

2.1线性回归方程

苯酚—硫酸显色法以吸光度A对浓度C作回归方程，得A=0.0093C+0.0158，r=0.9992。葡萄糖标准溶液在20～200 μg/mL范围内，吸光度对标准溶液浓度呈良好的线性关系。

电化学差示脉冲伏安法以氧化峰电流Ip对浓度C作回归方程，得Ip=0.2247C-4.789，r=0.9905。标准溶液浓度在30～90 μg/mL范围内，氧化峰电流对标准溶液浓度呈良好的线性关系。

2.2精密度试验

分别通过5次平行试验(表1)，苯酚—硫酸显色法的RSD为2.03%，电化学差示脉冲伏安法的RSD为2.98%，两种方法精密度试验结果均良好。

表1 精密度试验结果

2.3回收率试验

对4种不同含量的葡萄糖标准溶液做加标回收试验，测定结果见表2和表3。苯酚—硫酸显色法的回收率96.64%～101.30%，平均为99.06%；电化学差示脉冲伏安法的回收率100.70%～110.30%，平均为104.50%，两者均满足芦荟多糖含量的测定要求。

表2 苯酚-硫酸法回收率测定结果

表3 电化学法回收率测定结果

2.4两种方法测定芦荟不同部位多糖含量

精密量取1.2项中4种制备好的芦荟多糖提取液，按1.3和1.4项中的方法操作，根据各自的标准曲线计算，如超出线性范围稀释后再检测，通过稀释倍数计算含量，测定结果见表4。两种方法测定芦荟不同部位的多糖含量比较接近，且呈现相同的趋势：根茎的含量最高，叶片的皮次之，凝胶最少。

表4 不同测定方法测定芦荟不同部位的多糖含量 (单位：mg/g)

3 小结与讨论

关于苯酚—硫酸显色法测定多糖含量的报道[4-5]比较多，技术也比较成熟。本试验所采用的电化学差示脉冲伏安法检测芦荟不同部位多糖，该方法比较少见报道。试验结果表明，两种方法的线性、精密度和回收率都符合要求，样品的检测结果没有显著差异，均适用于芦荟多糖的检测。但是二者相比较，苯酚—硫酸法的操作更简便，成本更低，线性范围更大一些。

本试验对中国芦荟不同部位多糖的提取和测定表明，芦荟中根茎的多糖浓度最高，叶皮次之，其次是整叶，凝胶最少。由于凝胶的含水量高，多糖的浓度相对低，但凝胶是芦荟整株中的精华和比重最大的部分，它所含的多糖也是最优质的。芦荟的叶皮和根茎的多糖含量较高，说明芦荟的叶皮和根茎也是生产和储藏多糖的重要器官。为了提高多糖的得率，可以考虑整叶提取多糖。

[1]国家药典委员会.中国药典2005版[M].北京：化学工业出版社，2005.

[2]许继宏.药用植物组织培养技术[J].北京：中国农业科学技术出版社,2003.

[3]戴如琴,邵爱娟.芦荟在医药与保健食品方面的研究与应用[C].芦荟产业化研讨会论文汇编,1998：52-61.

[4]董长颖,曹保权.三种芦荟凝胶多糖的提取与含量测定[J].吉林农业科技学院学报,2009,18(2):10-11

[5]蒋林,杨岗,王琴，等.不同产地和采收期对库拉索芦荟中芦荟多糖和芦荟苷的影响[J].中国中药杂志, 2007，32(21): 2311-2313.

[6]陈伟,林新华,黄丽英，等.蒽酮-硫酸法测定库拉索芦荟多糖含量[J].中国医药药学杂志,2004, 24(8):460-462.

[7]朱俊玲. 超临界CO2萃取芦荟多糖工艺的优化[J].安徽农业科学,2011, 39(10):5794-5795.

(责任编辑：刘新永)

DeterminationofpolysaccharidesindifferentpartsofChineseAloebytwomethods

LIN An-qing, CHENG Guang-qiang

(FujianTestingTechnologyInstitute,FujianProvince350003)

2017-04-25