新疆昭苏县马泰勒虫病的诊疗及其效果观察

刘世芳，阿拉西·阿滨，宋瑞其，杨红霞，巴音查汗*

(1.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052; 2.昭苏县畜牧兽医站,新疆昭苏 835604)

新疆昭苏县马泰勒虫病的诊疗及其效果观察

刘世芳1，阿拉西·阿滨2，宋瑞其1，杨红霞1，巴音查汗1*

(1.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052; 2.昭苏县畜牧兽医站,新疆昭苏 835604)

为了观察和探讨不同检测方法及不同药物对马泰勒虫病的临床诊疗效果，提高对马泰勒虫病临床诊疗的防治水平,随机采集昭苏县种马场128匹疑似马血样品，采用临床症状观察、病原学检查和PCR检测等方法确诊了12例马泰勒虫病病例。将12匹阳性马随机分为2组，即处方1组和处方2组，用药后的5 d内，分别对每组患马进行临床症状观察、体温测定、血涂片检查和染虫率统计。结果显示，血涂片中含有圆形或圆点形的马泰勒虫,PCR检测得到512 bp的目的条带，与目的片段相符。第1治疗组(三氮脒治疗组)治愈率为66.7%(4/6)，第2治疗组(盐酸吖啶黄组)治愈率为83.3%(5/6)，第2治疗组治愈率高于第1治疗组。本试验发现，临床症状观察、病原学检查和PCR检测法相结合可准确诊断马泰勒虫病；处方2组是2种处方中治疗马泰勒虫病的最佳处方，以上诊疗数据可为马泰勒虫病的防控提供参考。

马泰勒虫病；诊疗；效果观察

马泰勒虫(旧名马巴贝斯虫、纳氏焦虫)是寄生于马属动物(包括马、驴、骡和斑马)红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病，其虫体小于红细胞半径。临床上出现稽留热、贫血、呼吸困难、黄疸等症状，如诊治不及时，病死率极高，对现代马产业造成极大影响。该病集中分布在热带和亚热带地区，而在我国该病主要流行于新疆、内蒙古西部地区及南方各地，在新疆流行区域主要包括伊犁、阿尔泰及巴州等[1-5]。本病主要通过硬蜱传播，因此，该病的流行具有一定的地区性和季节性[4,6]。新疆昭苏县常年雨水较多，草原面积广大，植被丰富，适合蜱类孳生，导致该地区马泰勒虫病流行频繁。同时，由于基层对该病的防范不足，缺乏灭蜱意识和对该病的有效治疗，造成当地马产业经济损失严重。因此，寻找出最佳的诊断和治疗方法是综合防控马泰勒虫病、降低病死率、保护马产业健康发展的基础。

目前，国内治疗该病选择的药物主要是三氮脒(贝尼尔、血虫净)、盐酸吖啶黄(黄色素、锥黄素)和咪唑苯脲等[7-10]，但对于治疗药物效果的评价却报道较少。因此，笔者于2016年5月至2016年7月，在新疆马泰勒虫病的疫区昭苏县种马场配种站蹲点调查与治疗马泰勒虫病。根据流行病学调查、临床症状和实验室诊断结果，综合确诊马泰勒虫病，并通过2种治疗处方对患马牛进行临床治疗及效果观察，有效地控制了病情并筛选出了最佳治疗处方，现将试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 2016年5月8日至2016年7月2日对昭苏县种马场配种站520匹马进行流行病学调查，采集其中128匹疑似马的耳缘静脉血及全血分别进行血涂片和PCR检测。将经流行病学调查、PCR检测阳性和具有明显临床症状特点的12匹1岁马驹作为此次试验对象。

1.1.2 主要设备和试剂 PCR仪，美国Bio-Rad公司产品；光学显微镜，Motic公司产品；树脂型TM基因组DNA提取试剂盒，北京赛百盛基因技术有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 临床症状诊断 观察马匹的精神状态，饮食欲，结膜有无充血或黄染，排粪排尿情况，躯体是否出现水肿，并测定体温。

1.2.2 实验室诊断

1.2.2.1 血涂片检查 耳缘静脉无菌采血，滴至载玻片并涂制成血液涂片，待自然干燥后滴适量甲醇使其固定；待其完全晾干后按瑞氏-吉姆萨复合染液方法进行染色[11]；染色结束后用蒸馏水将血涂片冲洗干净，自然晾干后滴石蜡油在油镜下进行镜检。

1.2.2.2 PCR检测 抗凝管无菌采集马颈静脉血液，通过全血基因组提取试剂盒提取DNA；引物参照罗金等[12]扩增18 S RNA基因的目的区段，上游引物：5′-TTTGGGCTGTTTACAGTTGC-3′；下游引物：5′-CTCAAAGTAAACGTCGAGTCATG-3′，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。采用25 μL反应体系以全血基因组DNA为模板，反应条件为：95℃ 5 min；94℃ 45 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s,30个循环；72℃ 5 min。PCR产物用10 g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果。

1.2.3 治疗方案 综合上述诊断方法对128匹疑似马进行诊断，最终确定12匹感染马泰勒虫病。以这12匹患马作为治疗对象，采用2种治疗方案，同时观察此2种治疗方案的治疗效果。

1.2.3.1 治疗处方 以三氮脒(贝尼尔、血虫净)、盐酸吖啶黄(黄色素、锥黄素)分别作为第1治疗组和第2治疗组的主要治疗药物，其余药物选用柴胡、维生素C、复合维生素B、右旋糖苷、阿托品、9 g/L盐水、50 g/L葡萄糖和250 g/L碳酸氢钠。

1.2.3.2 治疗方法 将确诊的12匹马随机分为2个组，选用三氮脒为主要治疗药物为第1治疗组，盐酸吖啶黄为主要治疗药物为第2治疗组。按治愈疗程分别对第1治疗组和第2治疗组进行为期5 d的临床症状观察、体温测定、血涂片观察及染虫率统计，综合分析以上试验结果比较两种药物治疗的效果。

2 结果

2.1 诊断结果

调查的128匹马中，27匹马血涂片在显微镜下观察到圆形或圆点形的马泰勒虫，血涂片中马泰勒虫形态如图1所示。49份马血液DNA样本经PCR扩增，得到预期条带512 bp，与实际片段大小相符，部分样品PCR检测结果如图2所示。马泰勒虫病不同病程及病程期的临床症状分为最急性型、急性型和慢性型，最急性型表现出严重贫血、体温上升至40℃～41℃，后肢拖地，腹式呼吸明显。急性型根据病程期又可分为前期、中期和治疗后，前期临床症状不明显，被毛粗乱，食欲减退；中期运动不稳或后肢轻微拖地，稽留热，体温上升至39.1℃～41.0℃，下颌淋巴结肿大，结膜黄染；治疗后体温下降，运动状态，精神状态，食欲恢复正常，血液中PCR检测不出虫体。慢性型临床症状不明显，逐渐消瘦，贫血，耐过的病马为带虫者。

综合以上诊断结果，最后确定以12匹马泰勒虫阳性患马作为药物治疗对象。

图1 马红细胞内的马泰勒虫(10×100)

M.DNA标准 DL 2 000；1.阴性对照；2.阳性对照；3～5.马泰勒虫PCR阳性

M.DNA Marker DL 2 000；1.Negative control；2.Positive control;3-5.TheileriaequiPCR positive

图2马泰勒虫PCR扩增结果

Fig.2 PCR amplification results ofTheileriaequi

2.2 治疗结果

通过2组对比试验，第1治疗组治愈率为66.7%(4/6)，第2治疗组治愈83.3%(5/6)，其具体治疗效果及其相关数据详见表1。通过比较第1治疗组和第2治疗组平均体温变化及平均染虫率变化可以看出，第2治疗组平均染虫率及体温下降幅度较第1治疗组均明显，其具体治疗效果及其相关数据见图3和图4。第1治疗组1匹患马因发病较急，于第2天死亡。第2治疗组1匹患马因感染链球菌引起腕关节脓肿而死亡。

3 讨论

新疆昭苏种马场配种站草场位于高原腹地，海拔1 800 m～3 500 m，属天山北麓西部高寒山区干旱半湿润冷凉型气候，植被丰富，为马泰勒虫病的传播媒介-革蜱属的硬蜱孳生提供了有利条件。当地马匹饲养方式主要是草场散养，且每年有来自不同地方的马匹到种马场进行配种，综合以上均导致了马泰勒病在该地区的广泛流行。近年来，新疆马产业发展迅速，全区存栏量已达90万匹，马泰勒虫病的流行逐年上升[13]，对马产业造成巨大经济损失。

表1 不同组治愈率

图3 不同治疗组治疗后平均体温变化表

图4 不同治疗组治疗后平均红细胞染虫率变化

笔者在基层蹲点治疗的过程中，发现当地基层兽医对于马泰勒虫病的认识不足，诊段设备缺乏、技术滞后，加之在其治疗过程中药物使用混乱、缺乏有效的治疗方法等，使得该病的流行不能得到及时控制。据李文志[14]、魏锦龙等[15]曾在吉尔孟、庄浪县地区对马泰勒虫病的诊断及治疗进行了相关描述，在诊断中，选择的诊断方法均为血液涂片镜检，该方法对有明显临床症状的的病马进行检测时效果较好，而当病马处于隐形感染、发病初期时染虫率较低，血涂片检测效果较差，不能及时发现该病，对该病进行有效治疗。故本试验结合临床症状、病原学检查和PCR检测3种方法进行疑似马匹是否感染马泰勒虫病情况进行确诊。同时选用三氮脒和盐酸吖啶黄对确诊病例进行了对比治疗和治疗效果观察。第1治疗组和第2治疗组平均体温分别从40.7℃、40.8℃下降到38.1℃、37.6℃，平均染虫率分别从1.2%、0.90%都降到0。2组药方对比治疗试验显示，第1治疗组治愈率为66.7%；第2治疗组治愈率为83.3%；以上结果可以看出，平均染虫率和体温均有下降，但第2治疗组平均染虫率体温和下降幅度较第1治疗组较快，第2组治愈率高于第1组，说明盐酸吖啶黄更加具有显著的治疗效果。

马泰勒虫病在血液内染虫率低的情况下往往难以确诊，故综合诊断是关键。本次筛选的2组药方是对治疗马泰勒虫病效果明显，且盐酸吖啶黄具有更加显著的治疗效果，但三氮脒、盐酸吖啶黄都有微量毒性，故给药前，可按适当剂量给马匹注射阿托品以减缓其毒性作用，给药后，要对马匹进行30 min观察，看有无不良反应的发生；若持续较长时间给药，可保肝适当补维生素D；对因治疗的同时，也需注意对症治疗。

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Abstract:To observe and explore the effects of different detection methods and drugs on the clinical diagnosis and treatment in horses infected withTheileriaequi,to raise awareness of the clinical diagnosis and treatment and prevention level,one hundered and twenty-eight suspected horse blood samples collected from Zhaosu county stud farm randomly. 12 horses infected withTheileriaequiwere confirmed by clinical symptoms,etiology examination and PCR detection methods.The 12 positive horses were randomly divided into two groups named the prescription group 1 and the prescription group 2,within 5 days after treatment,respectively,for each group of horses,the clinical symptoms,temperature,blood smears and infestation rate of erythrocytes were recorded.Results showed that there are round or round point shapedTheileriaequiin erythrocytes. PCR detection obtained a 512 bp band which matched purpose fragment.Nitrogen amidine first treatment group cure rate was 66.7% (4/6),Hydrochloric acid(second group ) cure rate was 83.3% (5/6),the cure rate of the second treatment group is higher than that of the first treatment group.This study found that combination of clinical symptom observation,etiology examination and PCR detection method can accurately diagnoseTheileriaequiinfection,the prescription group 2 was better for the treatment ofTheileriaequiinfection in these two prescriptions.These clinical data can lay a foundation for prevention and control ofTheileriaequiinfection.

Keywords:Theileriaequi; diagnosis and treatment; efficiency observation

EfficiencyObservationofDiagnosisandTreatmentofTheileriaequiInfectioninZhaosuCountyofXinjiang

LIU Shi-fang,ALAX Abing2,SONG Rui-qi1,YANG Hong-xia2,Ba-yin-cha-han1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi,Xinjiang,830052,China; 2.ZhaosuAnimalHusbandryStation,Zhaosu,Xinjiang,835604,China)

S852.723

B

1007-5038(2017)08-0122-04

2016-12-01

国家自然科学基金-新疆联合基金重点项目(U1403283)

刘世芳(1990-)，男，云南曲靖人，硕士研究生，主要从事预防兽医学研究。*