免疫试纸半定量法与放射免疫法检测尿微量白蛋白的比较研究

施绍瑞 张林琳 刘英

论 著

免疫试纸半定量法与放射免疫法检测尿微量白蛋白的比较研究

施绍瑞 张林琳 刘英

目的比较免疫试纸半定量法（Micral-Test）和放射免疫法（RIA）检测随机尿微量白蛋白（MA）结果的一致性，评价罗氏Micral-Test试纸检测尿MA的临床价值。方法征集29例健康志愿者作为健康对照组（NG组），其中男性13名，女性16名。以115例华西医院门诊和住院患者（包括62例糖尿病和53例高血压患者），作为疾病组（DG组），其中男性59名，女性56名。所有受试者均留取随机尿20 mL待检，分别用两种方法同时检测标本中尿中MA浓度。结果经一致性检验，免疫试纸半定量法和放射免疫法检测随机尿中MA的一致性较好（Kappa＝0.902）；假阳性率和假阴性率都较理想。结论免疫试纸半定量法是患者自我监测和大型流行病学调查人群中尿MA较可靠的指标。

尿微量白蛋白； 免疫试纸半定量法； 放射免疫法

肾脏是机体重要的排泄器官，同时也参与某些物质（碳水化合物、脂肪、氨基酸等）的代谢过程［1］。即使轻微的肾脏损伤也可能带来不良临床结局［2］。肾损伤的尿液生物学标志物可以区分急性肾损伤属于结构性还是功能性［3］。糖尿病肾病早期表现为微量蛋白尿，最终发展至终末期糖尿病肾病［4］。微量白蛋白尿（microalbuminuria，MA）是1型、2型糖尿病早期肾损伤诊断及监测的重要临床指标［5-8］，因此，本研究比较免疫试纸半定量法（Micral-Test strip）和放免法（RIA）检测随机尿MA结果的一致性，评价罗氏Micral-Test试纸检测MA的临床价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 健康对照组（NG组） 征集29例健康志愿者。其中男性13名，女性16名；年龄20～49岁，平均年龄（35±9）岁。

1.1.2 疾病组（DG组） 115例华西医院门诊和住院患者（包括62例糖尿病和53例高血压患者）。其中男性59名，女性56名；年龄19～85岁，平均年龄（58±14）岁。

1.2 检测方法

1.2.1 仪器与试剂 免疫试纸半定量法采用罗氏Micral-Test试纸进行MA半定量检测（阴性：0；阳性：≥20 mg/L，根据比色法有20、50、100 mg/L 3个判读界值）。放免法用北京北方生物技术研究所提供的放免试剂盒。放射免疫分析仪器为上海核所日环光电仪器有限公司生产的SN-659B型γ计数器。

表1 疾病组放免法和免疫试纸半定量法测定MA检测结果

1.2.2 样本收集及检测 所有受试者均留取随机尿20 mL待检，检测当日以3 500 r/min离心5 min，取上清液，分别用两种方法同日检测。检测方法参见说明书。

1.3 统计学分析 所有数据均采用SPSS 11.5软件包处理，两种方法间的比较采用一致性检验，Kappa＞0.4认为存在一致性，Kappa≥0.75认为存在较好一致性。

2 结果

2.1 检测结果

2.1.1 放免法与免疫试纸半定量法检测MA比较健康对照组中，两种方法符合率为100%，所有测值均＜20 mg/L。疾病组中，测值在0～20 mg/L组中有2例不相符，20～50 mg/L组中有4例不相符，50～100 mg/L组中有1例不相符，经一致性检验Kappa值为0.888，说明两种方法在疾病组中检测MA的一致性较好。结果见表1。

2.1.2 两种方法检测MA比较 以参考值20 mg/L为界值，将＜20 mg/L定义为阴性（-），＞20 mg/L定义为阳性（+），比较两种方法总的（健康对照组和疾病组）一致性，经一致性检验，Kappa值为0.902，说明两种方法检测MA总的一致性较好。见表2。

表2 两种方法检测MA总的结果比较

2.2 免疫试纸半定量法检测MA的临床价值 如果以放射免疫法检测MA为“标准”，以20 mg/L为界值，将＜20 mg/L定义为阴性（-），＞20 mg/L定义为阳性（+）。本实验结果显示，免疫试纸半定量法检测健康对照组标本的假阳性率和假阴性率均为0，因此说明，免疫试纸半定量法在正常人群的筛查中有较好的适用性，并且因其标本留取方便，检测方法简单，可以实现在家中自行完成检测，为使用者带来了极大的方便。同时，免疫试纸半定量法检测尿中MA也很适用于大型流行病学调查。免疫试纸半定量法在疾病组中检测结果的假阳性率为2.9%，假阴性率为5.6%，说明这种方法也适用于糖尿病、高血压患者用于自我监测。

3 讨论

MA是评估早期肾脏损伤最有价值的蛋白［9］，能判断肾功能损伤的严重程度，在肾损伤可逆期发出警告［10］，也是糖尿病患者并发心血管疾病的危险因素［11-14］。目前各实验室检测MA主要采用放射免疫法（放免法）、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法等，这些方法均需要特殊的仪器和设备以及专业的检验人员才能进行［15-16］。上述方法无法用于自我监测或大型流行病学调查，寻找验证一种能实时检测的方法显得尤为重要。尿白蛋白检测的标本类型一般为晨尿和随机尿两种，晨尿的准确性高于随机尿，但晨尿检测对标本质量要求较高，因此实验室常用随机尿代替。时段尿（夜尿或24 h尿）主要用于检测尿MA排泄率，但时段尿的留取操作较复杂，患者依从性差，很容易漏留或多留，对于门诊患者可操作性更差，在实际应用中受到限制［17］。另外也有研究表明，随机尿检测的灵敏度优于过夜尿［18］。因此，本研究选择最容易收集的随机尿作为分析对象。单次MA的检测受尿量影响较大，为了排除此影响，目前临床上常用尿MA/肌酐（SCr）比值（ACR）来校正，但是考虑到在患者用于自我监测或大型流行病调查的实际应用中，测量SCr实际可操作性差，这也是本研究直接检测MA浓度的原因，目的是在尽量模拟常规应用条件下来评价其运用价值［19］。

MA与糖尿病肾病密切相关，通常预示糖尿病肾病已经存在。MA也多见于原发性高血压患者，表明MA涉及早期肾脏与血管病变，预示了肾脏病变的恶化与心血管病变的发展，MA检测对于早期发现糖尿病、高血压、心血管疾病等合并肾损伤有重要的意义［20-21］。荷兰医疗卫生调查中，肾脏和血管终末期疾病预防的干预研究对尿白蛋白检测的成本-效益进行了评估，研究组首先在普通人群中进行尿白蛋白筛查，随后对尿白蛋白阳性的调查对象使用血管紧张素转化酶抑制剂进行治疗，结果表明，尿白蛋白筛查的人群疾病防治的成本-效益优于未筛查人群。因此，临床筛查尿中MA具有重要意义。

随着即时检验（point of care testing，POCT）技术的发展，人们了解到POCT有简单快速、操作容易、判读方便的特点，因而广泛被患者接受［22-24］。免疫试纸半定量法测定MA也是一种POCT，其原理为黄金标记抗体的免疫检测法。试纸分为纱布层、绒层和捕获层，尿液标本通过纱布层（纱布层可以起到滤过杂质的作用）渗入绒层，尿液中的白蛋白与绒层中能与白蛋白特异性结合的可溶性黄金标记抗体特异性结合，剩余抗体与捕获层里锚定的白蛋白（不同于人类尿液的白蛋白）结合而被留住，只有与尿中白蛋白结合的抗体才可以通过捕获层到达检测垫并出现呈色反应，产生的颜色反应与尿液中白蛋白含量呈相关性。但POCT也存在一些弊端，比如结果稳定性差、干扰因素较多、易出现假阳性和假阴性等。因此，评价免疫试纸半定量法的临床应用价值就显得尤为重要。

本研究显示，放免法和免疫试纸半定量法检测MA总的一致性较好，特别是健康对照组符合率达到100%。疾病组中测值在0～20 mg/L组符合率为97.1%，20～50 mg/L组为78.9%，50～100 mg/L组为96.2%。虽然健康对照组（符合率100%）的样本数较少，只有29例，但疾病组中测值在0～20 mg/L组的病例有70例，可见MA的测值越低，两者的符合率越好，表明在大型人群筛查中免疫试纸半定量法更有价值。

综上所述，本研究结果表明，放免法和免疫试纸半定量法在检测健康对照组和疾病组标本时的一致性均较好，同时免疫试纸半定量法的假阳性率和假阴性率都较理想。因此，作为POCT的免疫试纸半定量法在患者自我监测和大型流行病学调查中表现出较好的可靠性。

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The comparison between Micral-Test strip and radioimmunoassay for detection of microalbuminuria

Shi Shaorui, Zhang Linlin, Liu Ying. Department of Laboratory Medicine, the Second People's Hospital of Yibin,Yibin 644000, Sichuang, China (Shi SR, Zhang LL);
Department of Laboratory Medicine, West China Hospital,Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuang, China (Liu Y)

ObjectiveTo compare the consistency of the random urine microalbumin (MA) tested by Micral-Test and radioimmunoassay (RIA). And to evaluate the clinical value of Roche Micral-Test in the detection of microalbuminuria.MethodsA total of 29 normal subjects (13 males and 16 females) were served as normal control group (NG), 115 patients (59 males and 56 females) with the diagnosis of hypertension (53 patients) and diabetes (62 patients) were served as disease group (DG). Random urine (20 mL) of all subjects was collected.The microalbuminurias of all samples were detected by Micral-Test strip and radioimmunoassay on the same day.ResultsThe consistency between Micral-Test strip and radioimmunoassay is very well (Kappa = 0.902).ConclusionMicral-Test strip is dependable for self-monitoring and large-scale epidemiological investigation.

Microalbuminuria; Micral-Test strip; Radioimmunoassay

2017-06-16）

（本文编辑：杨程伍 李银平）

四川省宜宾市科技计划项目（2014SF016）

644000 四川宜宾，宜宾市第二人民医院检验科（施绍瑞、张林琳）610041 四川成都，华西医院实验医学科放射免疫室（刘英）

施绍瑞，Email：774516315@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2017.03.007

Corresponding author: Shi Shaorui, Email: 774516315@qq.com