阿司匹林磷脂复合物的制备及其表征

贺智勇，吴朝花，严俊丽，李海志，沈祥春，陶玲#

（1.贵州医科大学药学院，贵阳550004；2.贵州省普通高等学校天然药物药理与成药性评价重点实验室，贵阳 550025）

阿司匹林磷脂复合物的制备及其表征

贺智勇1，2＊，吴朝花1，2，严俊丽1，2，李海志1，2，沈祥春1，2，陶玲1，2#

（1.贵州医科大学药学院，贵阳550004；2.贵州省普通高等学校天然药物药理与成药性评价重点实验室，贵阳 550025）

目的：制备阿司匹林磷脂复合物（ASP-PC）并进行表征。方法：以ASP与PC的复合率为指标，采用单因素试验筛选ASP-PC的制备方法、PC种类、溶剂种类、反应时间、反应温度、溶剂体积和药脂比，并进行验证。采用紫外分光光度法、热重分析法、X射线衍射法和傅里叶红外光谱分析对所制ASP-PC进行表征。结果：采用磁力搅拌-冷凝回流法，药物-大豆磷脂比为1∶3（mol/mol），溶剂为四氢呋喃（50 mL），58℃下反应3 h，所制ASP-PC的平均复合率为83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）。与ASP、ASP和PC的物理混合物比较，紫外光谱显示ASP-PC没有出现新的吸收峰；热重分析、X射线衍射分析和傅里叶红外光谱分析显示ASP-PC中的ASP与PC发生了相互作用，且ASP-PC在0～300℃范围内质量变化较小。结论：成功制得ASP-PC，其中ASP与PC复合成功，但仍有微量ASP以晶体形式存在。

阿司匹林；磷脂复合物；制备工艺；光谱学性质

ABSTRACTOBJECTIVE：To prepare aspirin phospholipid complex（ASP-PC）and conduct the characterization.METHODS：Using the combination rate of ASP and PC as index，single factor test was used to screen the preparation method of ASP-PC，PC type，solvent type，reaction time，reaction temperature，solvent volume and drug-lipid ratio.The verification test was conducted.UV spectrophotometry，Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy were used for the characterization of ASP-PC.RESULTS：Magnetic stirring-condensing reflux method was adopted，drug-soybean phospholipids ratio was 1 ∶3（mol/mol），solvent was tetrahydrofuran，reacting for 3 h under 58 ℃.The average combination rate of prepared ASP-PC was 83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）.Compared with ASP，physical mixture of ASP and PC，UV spectrum showed that ASP-PC had no new absorption peak.Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy showed the ASP and PC in ASP-PC were interacted；and ASP-PC changed little in quality within 0-300 ℃.CONCLUSIONS：ASP-PC can be successfully prepared，in which，ASP and PC were combined successfully；while there are still trace amounts of ASP in the form of crystals.

KEYWORDSAspirin；Phospholipid complex；Preparation technology；Spectroscopic properties

阿司匹林（Asprin，ASP）又名乙酰水杨酸，在干燥空气中稳定，遇潮会缓慢水解为水杨酸和醋酸，微溶于水；传统用于解热镇痛、抗炎抗风湿疾病，数年来已广泛用于抑制血小板聚集，成为心血管疾病的重要基础治疗药物[1]。另外，其在抑制动脉粥样硬化、抗肿瘤、防治心肌纤维化[2]等方面的临床用途也不断得到扩展。但ASP在抑制环氧酶（COX）活性从而发挥抑制血小板聚集效果的同时，间接导致胃黏膜上皮脱落增加并超过更新速度，使胃黏液减少，引起胃黏膜损伤或加重溃疡的程度。此外，ASP水溶性差、生物利用度低、胃肠道药物残留量高，其酸性直接致胃黏膜损伤，可透过胃肠黏膜上皮脂蛋白膜层，破坏脂蛋白膜的保护作用，使胃酸可逆地弥散到组织中损伤细胞，致毛细血管破损而出血，是导致患者停药的主要原因[3-4]。提高ASP的生物利用度，可减少药物在胃肠道的残留量，减轻药物对胃肠道的直接刺激作用，对于提高患者依从性、维持心脑血管疾病患者的抗凝治疗具有重要意义。

磷脂（Phospholipid，PC）复合物是指药物与PC以一定的配比关系结合而成的复合物。PC主要成分为磷脂酰胆碱，由于其两亲性的特性而成为药物递送系统领域的一种特殊载体[5-6]，可以改善药物的溶解度和药物的释放速率。PC复合物和胃肠液之间具有较低的界面张力，可以促进药物透膜转运，提高药物较低的膜渗透率[7]，从而改善口服药物的渗透和吸收[8]，提高药物的生物利用度，减少药品不良反应，甚至起到一定的损伤修复作用等。因此，本研究旨在筛选具有较高复合率的ASP-PC复合物（简称ASP-PC）的制备工艺并进行表征，以期在ASP-PC基础上，为制备溶解性能改善、生物利用度提高、胃肠道副作用减轻的阿司匹林新递送系统奠定基础。

1 材料

1.1 仪器

D/Max-2200型全自动X射线衍射仪（日本理学电机公司）；Nicolet 6700型傅里叶变换红外分析仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）；Q50型热重分析仪（美国Waters公司）；UV-5800PC型紫外分光光度（UV）计（上海元析仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

ASP原料药[阿拉丁试剂（上海）有限公司，批号：D1316056，纯度：99%]；注射用大豆PC（批号：20140702，磷脂酰胆碱含量：≥90%；批号：20140703，磷脂酰胆碱含量：≥80%）和注射用蛋黄PC（批号：20150101，磷脂酰胆碱含量：≥80%）均购自上海太伟药业有限公司；四氢呋喃（天津市科密欧化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 ASP-PC的制备及复合率的测定

ASP和PC按照一定比例溶于适量的有机溶剂中，一定温度条件下搅拌反应一定时间后，减压回收有机溶剂；加入适量石油醚，充分溶解后，经0.22µm微孔滤膜过滤；滤液回收石油醚，真空干燥得到ASP-PC，－20℃冷冻保存。收集滤膜上残余沉淀，干燥12 h并称质量，得到未复合的ASP的量，计算复合率。复合率＝（ma－mb）/ma×100%，式中，ma为ASP的初始投药量，mb为未复合ASP的量。

2.2 单因素试验筛选处方工艺

2.2.1 制备方法 根据文献[9]以及预试验结果，设定ASP与PC比例为1∶3（mol/mol）、四氢呋喃50 mL，考察不同制备方法（室温1 000 r/min磁力搅拌12、24 h；冰浴150 W超声0.5、1 h；58℃下冷凝回流，1 000 r/min磁力搅拌2、3 h）对ASP-PC复合率的影响。不同制备方法对ASP-PC复合率的影响结果见表1。

表1 不同制备方法对ASP-PC复合率的影响Tab 1 Effects of different preparation methods on the combination ratio ofASP-PC

由表1可知，采用磁力搅拌-冷凝回流法，温度为58℃，反应时间为3 h时，所制ASP-PC复合率最高。

2.2.2 PC种类 按“2.2.1”项下条件制备ASP-PC，考察不同种类PC（磷脂酰胆碱含量≥80%的大豆PC、磷脂酰胆碱含量≥90%的大豆PC和磷脂酰胆碱含量≥80%的蛋黄PC）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为54.56%、83.56%、54.20%，由此确定PC为磷脂酰胆碱含量≥90%的大豆PC。

2.2.3 反应溶剂 根据“2.2.1”“2.2.2”项下条件制备ASP-PC，考察不同反应溶剂（四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、丙酮）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为83.56%、58.03%、31.39%、14.18%、8.49%、61.90%，由此确定反应溶剂为四氢呋喃。

2.2.4 反应时间 根据“2.2.1”～“2.2.3”项下条件制备ASP-PC，考察不同反应时间（1、2、3、3.5、4 h）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为47.53%、57.32%、83.56%、74.87%、65.28%，由此确定反应时间为3 h。

2.2.5 反应温度 根据“2.2.1”～“2.2.4”项下条件制备ASP-PC，考察不同反应温度（30、40、50、58 ℃）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为39.73%、41.81%、57.46%、83.56%，由此确定反应温度为58℃。

2.2.6 溶剂体积 根据“2.2.1”～“2.2.5”项下条件制备ASP-PC，考察不同溶剂体积（30、50、70、90 mL）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为50.0%、83.56%、59.13%、54.70%，由此确定溶剂体积为50 mL。

2.2.7 ASP与PC比例 根据“2.2.1”～“2.2.6”项下条件制备ASP-PC，考察ASP与PC不同比例（1∶1、1∶2、1∶3、1∶3.5、1∶4，mol/mol）对ASP-PC复合率的影响。结果显示，所制ASP-PC的复合率分别为12.52%、46.87%、83.56%、84.26%、88.83%，综合考虑确定ASP与PC比例为1∶3。

2.3 验证试验

根据“2.2”项下筛选得到的处方工艺：采用磁力搅拌-冷凝回流法，ASP与PC比例为1∶3（mol/mol），四氢呋喃50 mL，58℃条件下反应3 h，重复3次，制备3批次的ASP-PC。计算得其平均复合率为83.52%，RSD为1.16%（n＝3），说明该工艺稳定、重复性好。

2.4 ASP-PC的光谱学分析

2.4.1 UV分析 将ASP、PC、ASP与PC物理混合物和ASP-PC分别溶于适量无水乙醇中，以无水乙醇为空白对照，在190～400 nm波长范围内进行UV扫描。结果显示，与ASP和物理混合物比较，ASP-PC没有出现新的吸收峰，但吸光度有所减小。这表明ASP-PC中ASP的发色基团结构未发生变化，但可能由于PC的极性键与ASP发生了相互作用，导致其吸光度减小。光谱图见图1。

2.4.2 热重分析 采用热重分析仪对ASP、PC、ASP与PC物理混合物和ASP-PC进行热重分析，温度范围0～300℃。结果显示，ASP、PC和物理混合物在整个温度范围内质量均有所下降，但ASP-PC的质量变化较小，表明ASP与PC极性端结合使得ASP-PC的熔点较原来的化合物有所上升，使ASP稳定性增大。热重分析图见图2。

图1 紫外吸收光谱图Fig 1 UV absorbance spectra

图2 热重分析图Fig 2 Thermogravimetric analysis spectra

2.4.3 X射线衍射分析 在室温下，采用X射线衍射对ASP、PC、ASP与PC的物理混合物和ASP-PC的晶体状态进行分析。工作电压40 kV，测试条件Cu靶，工作电流40 mA，扫描范围0°～80°，扫描速度4°/min。结果显示，ASP以结晶形式存在；PC表现出无定形的特征；物理混合物表现出ASP结晶的衍射峰，但强度较ASP显著减弱；ASP-PC中ASP结晶的衍射峰均消失，仅在7.454°、15.721°附近有结晶峰存在，这可能是ASP与PC的极性端之间的相互作用，使部分晶体特征被抑制所致。X射线衍射分析图见图3。

图3 X射线衍射分析图Fig 3 X-ray diffraction analysis

2.4.4 傅里叶红外光谱分析 采用傅里叶红外光谱仪对ASP、PC、ASP与PC的物理混合物和ASP-PC进行分析，以KBr为参比制剂进行红外光谱分析，波长范围400～4 000 cm－1。结果显示，ASP-PC保留了PC的1 733 cm－1波长处的特征吸收峰，但其宽度以及峰的强度发生了一定的变化；另外，不再保持—COOH基团的特征峰，其吸收峰的形状和宽度也发生了变化，这可能是ASP当中的某个官能团与PC分子的某些部位发生了相互作用所致。傅里叶红外光谱图见图4。

图4 傅里叶红外光谱图Fig 4 Fourier transform infrared spectra

3 讨论

根据Giraud MN等[10]研究表明，通过将ASP与二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）制备成复合物，可以明显增加ASP在胃肠道内的吸收，但关于ASP-PC的制备技术的研究尚未见报道。

由于DPPC目前市场价位过高，不利于后期大生产的应用，因此笔者选用了大豆PC和蛋黄PC进行PC种类的考察，结果表明，磷脂酰胆碱含量≥90%的大豆PC所制的ASP-PC复合率最高。反应溶剂考察结果表明，介电常数较小的四氢呋喃中所制的ASP-PC复合率较高，可能是由于溶剂的介电常数大，所产生的反向电势也大，相应降低了反应物间的作用力，不利于电荷相反的离子间的化合反应[9]。随着反应时间的增加，所制的ASP-PC复合率在一定范围内增加，但是当反应时间超过3.0 h后复合率反而有下降的趋势，这可能是由于反应时间过长、PC不稳定引起的。尽管随着反应温度的增加，复合率呈上升的趋势，但是PC在大于60℃时易氧化变性，因此反应温度确定为58℃。溶剂体积过大时，ASP与PC的碰撞机会减少，而当溶剂体积过小时，PC浓度过高可能会出现饱和，两种情况都会降低复合率，综合考虑确定溶剂体积为50 mL。随着PC加入量的增加，复合率相应增加，当药脂比增加到1∶3.5和1∶4时复合率虽然较高，但是与1∶3时比较增加幅度很小。考虑到PC过多会使ASP-PC干燥变慢且成本增加，因此选择1∶3作为ASP和PC的最佳比例。

通过UV、红外光谱、X射线衍射和热重分析可知，ASP和PC的物理混合物只是ASP与PC简单地加和；而ASP-PC中ASP的羧基特征吸收峰基本消失，且没有新的化学键形成，从而推测ASP羧基上的氧可能与PC的极性端通过偶极-偶极作用力而形成了PC复合物。

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Preparation and Characterization of Aspirin Phospholipid Complex

HE Zhiyong1，2，WU Chaohua1，2，YAN Junli1，2，LI Haizhi1，2，SHEN Xiangchun1，2，TAO Ling1，2
（1.School of Pharmacy，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，China；2.Key Laboratory of Natural Medicinal Pharmacology and Drugability in Guizhou Colleges and Universities，Guiyang 550025，China）

R943

A

1001-0408（2017）25-3562-04

2017-02-04

2017-04-05）

（编辑：邹丽娟）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.25.28

贵州省普通高等教育科技创新团队（No.黔教合人才团队字〔2014〕31）；贵阳市科技计划项目（No.筑科合同〔20141001〕12号）

＊硕士研究生。研究方向：药物制剂新技术和新剂型。电话：0851-8841610。E-mail：254964684@qq.com

#通信作者：教授，硕士生导师。研究方向：药物制剂新技术和新剂型。电话：0851-88416160。E-mail：649511230@qq.com