高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量

邓晓玲

(江苏省盐城市第一人民医院，江苏 盐城 224000)

高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量

邓晓玲

(江苏省盐城市第一人民医院，江苏 盐城 224000)

目的建立测定硫酸阿托品滴眼液含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱采用瑞士Spherigel C18柱(150 mm×4.6 mm，5 m)，流动相为甲醇 -0.5%KH2PO4(35∶65)，流速为 1 mL／min，检测波长为 217 nm。结果 硫酸阿托品质量浓度在 40.0～163.0 g／L范围内与峰面积线性关系良好（r＝0.999 86，n＝7）；平均回收率为 101.33% ，RSD ＝1.74%(n＝9)；日内精密度 RSD 分别为 0.52% ，0.33% ，0.30%(n＝5)；日间精密度 RSD分别为1.67%，1.20%，0.89%(n＝5)。结论 该法简便、敏捷、准确，可用于硫酸阿托品的质量控制。

高效液相色谱法；硫酸阿托品；含量

硫酸阿托品滴眼液是常用的眼科制剂，用于治疗角膜溃疡、角膜炎、虹膜睫状体炎，同时可用于眼底检查前的散瞳，也用于青少年假性近视的验光检查及治疗[1]。我院采用双向中和滴定法测定其含量[2]，但终点不易观察；且硫酸阿托品分子中含有酯键，弱酸集中性条件下较稳定，在碱性溶液中分解，如加热则分解更迅速，生成莨菪酸及莨菪醇而失效，故滴定用标准溶液不稳定，需经常标定，比较烦琐。同时，该制剂在消毒后含量一直高于消毒前，可能消毒后硫酸阿托品酯键水解产生酸根，而酸碱滴定法测定的是酸根，所以该法不能直接反映其中阿托品的含量。采用酸性染料比色法[3]，但其所用各种赋形剂在紫外分光光度计上测定有不同程度的干扰，含量测定结果偏低，给生产带来不必要的麻烦。采用BaSO4比浊法[4]、系数倍率法[5]、电荷转移中和分光光度法[6]、电子对比色法[7]、多波长吸光度比之差法[8]、反相高效液相色谱法[9]等方法测定硫酸阿托品滴眼液中主药的含量等，但操作比较烦琐，且方法不稳定。高效液相色谱（HPLC）法测量硫酸阿托品片剂[10]和滴鼻剂[11]含量的报道，均证明了方法的可行性和优越性。本试验中采用HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量，操作简便，能真实反映所测硫酸阿托品的含量，对医院制剂的质量控制具有一定的指导意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

紫外可见分光光度计（美国瓦里安医疗系统公司）；Agilent1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；BP211D型准微量分析精密电子天平（德国赛多利斯仪器有限公司）。

1.2 试药

硫酸阿托品滴眼液（批号分别为150102，150202，150321，医院制剂）；硫酸阿托品对照品（含量为 0.5 g ／L，批号为1611261，天津金耀药业有限公司）；氯化钠（含量为 10 mL∶0.9%，批号为 7A89D3，中国大冢制药有限公司）；对羟基苯甲酸乙酯（批号为150801，石家庄第一制药集团新华制药厂）；磷酸二氢钾（批号为150802，上海新华化工厂）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 系统适用性试验

色谱柱：瑞士 Spherigel-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇 -0.5% 磷酸二氢钾(35 ∶65)；流速：1 mL ／min；检测波长：217 nm；进样量：20 μL；柱温：室温。按拟订色谱条件，硫酸阿托品峰与杂质峰分离良好，理论板数达3 000[12]，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 方法学考察

标准曲线制备：取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品100 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 mL，置 50 mL 容量品中，加水稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液，按拟订色谱条件进样20 μL，进行线性回归，得回归方程 H＝0.916 4 C-4.840，r＝0.999 86（n＝ 7）。结果表明，硫酸阿托品质量浓度在40.0～163.0 g／L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验： 取 142.8，102.0，61.2 g／L 3 种标准溶液，按拟订色谱条件重复进样5次，测定峰高，计算日内 RSD和日间 RSD。结果日内 RSD分别为 0.52%，0.33% ，0.30% （n＝5），日 间 RSD 分 别 为 1.67% ，1.20%，0.89%（n ＝ 5），表明仪器精密度良好。

加样回收试验：称取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品 80，100，120 mg，精密称定，各 3 份，置 100 mL容量瓶中，同时按处方比例分别加入对羟基苯甲酸和氯化钠使溶解后，加水稀释至刻度，配成模拟硫酸阿托品滴眼液样品，精密量取模拟样品5 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度配成低、中、高（80%，100%，120%）浓度的模拟样品溶液，按拟订色谱条件进样，计算含量及回收率。结果表1。

2.3 样品含量测定

HPLC法：精密吸取硫酸阿托品眼药水成品1.0 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按拟订色谱条件进样20 μL，依法测定，计算含量。结果见表2。

表1 硫酸阿托品加样回收试验结果（n＝9）

双向酸碱中和滴定法：精密量取硫酸阿托品滴眼液成品5 mL，加中性乙醇与中性氯仿（对酚酞指示液显中性）各5 mL，酚酞指示液3滴，用氢氧化钠液（质量浓度为 0.02 mol／L）滴定，至溶液显淡红色，即得每 1 mL的氢氧化钠（质量浓度为 0.02 mol／L）相当于 6.948 mg 的硫酸阿托品，计算含量，并与HPLC法进行比较。结果见表2。

表2 两种含量测定方法供试品含量比较(%，n＝3)

3 讨论

3.1 含量测定方法选择

由表2可知，双向酸碱中和滴定法的结果高于HPLC法，与实际工作中的情况相似。酸碱中和滴定法结果受终点指示剂变色判断，测得含量误差大，所以不能真实反映硫酸阿托品的实际含量。由于对羟基苯甲酸乙酯的干扰以及硫酸阿托品为末端吸收，也不能用紫外分光光度法。因此，本试验中根据硫酸阿托品的化学结构和相关文献报道，采用HPLC法测定含量，方法简便准确，可不经分离直接测定硫酸阿托品的含量，且对羟基苯甲酸乙酯不干扰主要的含量测定。

3.2 流动相波长选择

阿托品与654-2（消旋山莨菪碱）的化学结构相似，但654-2较硫酸阿托品多1个—OH[12]，即654-2的极性稍大。参考654-2高效液相含量测定的色谱条件，选流动相为甲醇-KH2PO4(22∶78)，检测波长为217 nm。结果分离效果较好但出峰时间偏晚，故提高甲醇比例，选择甲醇-0.5%KH2PO4(35∶65)。硫酸阿托品的吸收波长为210 ～220 nm[2，13]，经多次试验发现，于 217 nm 处出峰效果良好。

[1]王松鹤，李 俐，袁建树.低浓度硫酸阿托品滴眼液治疗小学生假性近视[J].宁波医学，1997，5(2):12-13.

[2]中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范(西药制剂）[M].第 2版 .北京：中国医药科技出版社，1995：182-183.

[3]邓朝晖，刘银生，葛碧谨.复方硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品含量测定方法研究[J].中国药业，2000，9(9)：23-24.

[4]林玉洪，华 剑.BaSO4比浊法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].实用全科医学，2003，1(2):155-156.

[5]屈 锐.系数倍率法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国药师，2005，8(5):436-437.

[6]陈学峰，冯炜钢.电荷转移络合分光光度法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国现代应用药学，2003，20(6):514-516.

[7]习 丹，胡坚信，张 瑛.离子对比色法测定硫酸阿托品滴眼液中主药的含量[J].中国药房，2007，18(7)：549-550.

[8]冯志祥，张俊美，郭 军，等.多波长吸光度比之差法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].数理医药学杂志，1998，11(1):28-29.

[9]吴美香，欧阳吉德，齐 皓，等.反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品注射液的含量[J].中国药品标准，2006，7(4):29-31.

[10]郑 笠.高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量与含量均匀度[J].福建医药杂志，2004，26(5):123-124.

[11]林观样，徐晓卫，潘柔和.高效液相色谱法测定复方阿托品滴鼻液中硫酸阿托品的含量[J].温州医学院学报，2006，36(3):286-287.

[12]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1335.

[13]李锦 .HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国药师，2006，9(6):528-529.

Content Determination of Atropine Sulfate Eye-Drops by HPLC

Deng Xiaoling
(Yancheng First People′s Hospital of Jiangsu Province,Yancheng,Jiangsu,China 224000)

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of Atropine Sulfate Eye-Drops.Methods The Switzerland Spherigel C18column(150 mm × 4.6 mm,5 μm)was adopted with carbinol-0.5%KH2PO4(35 ∶65)as mobile phase,the flow rate was 1 mL／min and detection wavelength was 217 nm.Results The linear range of atropine sulfate was 40.0-163.0 g ／L(r＝0.999 86,n ＝7),the average recovery rate was 101.33%,RSD ＝1.74%(n ＝9).The inter-day precision (RSD)were 0.52%,0.33%,0.30%(n ＝ 5),the intra-day precision(RSD)were 1.67%,1.20%,0.89%(n ＝ 5).Conclusion This method is simple,rapid and accurate,which can be used for quality control of atropine sulfate.

HPLC;atropine sulfate;content

R927.2；R988.1

A

1006－4931(2017)17－0023－03

10.3969 ／j.issn.1006-4931.2017.17.007

邓晓玲（1981-），女，大学本科，主管药师，研究方向为医院药学，（电子信箱）512360560＠qq.com。

2017－03－06；

2017－05－31)