Stat3和TopoⅡα在宫颈癌中的表达以及临床意义

黄琳玲，吴娟，黎艳

--论著--

Stat3和TopoⅡα在宫颈癌中的表达以及临床意义

黄琳玲，吴娟，黎艳

（江西省妇幼保健院妇科，江西 南昌 330006）

目的 探讨Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中的表达及临床意义。方法 选取2015年12月～2016年6月江西省妇幼保健院采集的宫颈鳞状细胞癌手术标本45份，设为观察组，选取子宫肌瘤全子宫切除后的15例正常宫颈组织，设为对照组。采用免疫组织化学法检测两组组织中Stat3和TopoⅡα表达水平，分析Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中的表达及临床意义。结果 观察组组织经免疫组织化学法测定后Stat3和TopoⅡα表达阳性率，均高于对照组（P＜0.05）；单因素结果显示：宫颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与年龄、肿瘤大小比较差异无统计学意义；颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分期关系密切（P＜0.05）；相关性研究结果显示：观察组Stat3和TopoⅡα表达阳性与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分析呈正相关性（P＜0.05）。结论 Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中均呈高表达，能直接参与疾病的发生、发展，加强Stat3和TopoⅡα水平测定能为患者后续治疗提供依据，值得推广应用。

Stat3；TopoⅡα；宫颈癌；临床意义

宫颈癌是临床上常见宫颈癌是临床上常见的恶性肿瘤，我国每年新增的宫颈癌患者达到13.5万人，仅次于乳腺癌[1]。近年来，随着人们生活方式的改变，导致宫颈癌发生率呈上升及年轻化趋势，严重影响我国女性健康[2]。目前，临床上对于宫颈癌发病机制尚不完全知晓，普遍认为其发病属于是一个多因素、多病因、多阶段性过程，且患者发病早期临床症状缺乏特异性，多数患者一旦确诊，已经是中、晚期，延误了最佳治疗时机[3]。信号转导及转录活化因子3（Stat3）属于Stats家族成员之一，最早于1994年在肝脏中发现，能在启动急性期基因时选择性与增强子作用。研究表明[4]：Stat3在肿瘤血管的生成、免疫及肿瘤的侵袭、转移中发挥了重要的作用。TopoⅡα是一类核蛋白，广泛存在于机体中，并且能够通过调节核酸结构的动态变化，在DNA复制、修复、转录、重组以及染色体分离等生命活动中发挥重要作用[5]。因此，加强宫颈癌患者Stat3和TopoⅡα表达对患者早期诊断、治疗具有重要的意义。为了探讨Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中的表达及临床意义。选取2015年12月～2016年6月江西省妇幼保健院采集的宫颈鳞状细胞癌手术标本45份及15份正常宫颈组织作为研究对象，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 取2015年12月～2016年6月江西省妇幼保健院采集的宫颈鳞状细胞癌手术标本45份，设为观察组，年龄30～64岁，平均（43.50±4.12）岁。临床分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期16例。宫颈癌类型：宫颈鳞状细胞癌31例，宫颈腺癌14例。淋巴结转移：淋巴结转移者13例，无淋巴结转移者32例。浸润情况：有脉管浸润者21例，无脉管浸润者24例。病理分级：G1级7例，G2级32例，G3级6例。纳入标准：①符合《2015年NCCN宫颈癌指南》[6]中关于宫颈癌临床诊断标准；②均经过手术病理检查最终得到确诊；③均未经放化疗及相关生物学治疗。选取子宫肌瘤全子宫切除后的15例正常宫颈组织，设为对照组，年龄30～65岁，平均（42.91±4.09）岁。排除标准：①不符合宫颈癌临床诊断标准者；②资料不全或难以配合诊断、治疗者；③合并严重心、肝、肾功能异常者。本课题在伦理委员会批准、监督下进行，患者对诊断方法等知情同意。

1.2 方法 采用免疫组织化学法检测2组组织中Stat3和TopoⅡα表达水平，宫颈癌患者手术方式为主要为广泛或次广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫术，部分为扩大性全子宫切除。取术中切除的组织制备标本，采用10.0%甲醛液固定，石蜡包埋，制备4 um厚连续切片。将切片放置在烘烤箱（60℃）下进行1 h烘烤，脱蜡至水，采用pH为7.2～7.4 PBS缓冲液3次清洗，每次3 min，采用浓度为3%H2O2溶液放在室温下进行20 min孵育，将组织中内源性过氧化物酶消除，采用PBS进行3次冲洗，每次3 min，加入1∶10普通山羊血清进行15 min下孵育，减少非特异性抗原抗体结合。去除组织切片上的血清，滴加1抗（抗鼠Stat3和TopoⅡα单克隆抗体），4℃下过夜，室温下放置1 h，采用PBS进行3次清洗，每次3 min，加入生物素标记的二抗，孵育30 min，温度为37℃。加入辣根过氧化物酶，孵育30 min，温度为37℃，采用PBS进行3次清洗，每次3 min，DAB显色，苏木精复染8～10 s，中性树胶封片。根据阳性细胞数和染色强度进行半定量测定，在200倍光镜下每张切片随机选择5个视野，每个视野测定3次后取平均值，比较Stat3和TopoⅡα在不同组织中的表达阳性率及相关性[7-8]。

1.3 判定方法 普通显微镜下观察组织的显色反应，Stat3和TopoⅡα表示细胞质中出现淡黄色或棕黄色颗粒，评定时从细胞阳性数（1～4分）及染色强度（0～12分）进行评定，得分越高，阳性率越高，每个病理组织随机取3个血管最多的切片，在200倍光镜下取5个视野，取平均值[9-10]。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0软件处理，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组Stat3和TopoⅡα表达阳性率比较观察组组织经免疫组织化学法测定后Stat3和TopoⅡα表达阳性率，均高于对照组（P＜0.05）。见表1和图1。

表1 观察组与对照组Stat3和TopoⅡα表达阳性率比较[n（%）]Table 1 The positive rates of Stat3 and TopoⅡα expression in observation group and control group were compared[n(%)]

图1 观察组与对照组免疫组织化学法测定（×40）Figure 1 Observation group and control group by immunohistochemical method(×40)注：A图为对照组组织免疫组织化学法图片；B图为观察组组织免疫组织化学法图片。

2.2 观察组不同临床病理下Stat3和TopoⅡα表达阳性单因素结果显示：宫颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与年龄、肿瘤大小无统计学意义；颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分期关系密切（P＜0.05）。见表2。2.3 观察组Stat3和TopoⅡα表达阳性与病理相关性 相关性研究结果显示：观察组Stat3和TopoⅡα表达阳性与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分析呈正相关性（P＜0.05）。见表3。

表2 观察组不同临床病理下Stat3和TopoⅡα表达阳性[n（%）]Table 2 Stat3 and TopoⅡαwere positive in different clinical pathologies[n(%)]

表3 观察组Stat3和TopoⅡα表达阳性与病理相关性（r，P）Table 3 The positive correlation between Stat3 and TopoⅡα expression in the observation group was correlated with pathology(r，P)

3 讨论

宫颈癌是临床上常见的疾病，其死亡率占女性恶性肿瘤的第二位，严重影响我国女性健康和生命[11]。目前，临床上对于宫颈癌以手术治疗、放射治疗为主，该方法虽然能改善患者预后，但是部分患者发病早期临床症状缺乏特异性，导致患者治疗预后较差，严重影响我国居民健康及生命。目前，临床上对于宫颈癌发病机制尚不完全知晓，普遍认为是一个多因素过程，其发生、发展涉及因素较多，均能促进疾病的发生、发展[12]。

文献报道显示[13]：Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中发挥了重要的作用，能评估患者预后，指导临床治疗，但是该结论有待验证。本研究中，观察组组织经免疫组织化学法测定后Stat3和TopoⅡα表达阳性率，均高于对照组（P＜0.05）。提示：Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中均呈高表达水平。Stat3最早于1994年在肝脏组织中发现，被认为是急性期反应因子之一，属于Stats家族成员，能在机体各种生物酶的作用下发挥选择性作用。国内学者研究显示，Stat3在肿瘤的发生、发展中发挥了重要的作用，其高表达能直接促进肿瘤血管的生成，并且其表达水平还受到机体免疫抑制、肿瘤的临床分析、侵袭、转移等有关，可以通过多方式、多途径促进肿瘤的发生、发展。从基因学角度来说，Stat3在老鼠中主要定位11号染色体，而在人体中定位17号染色体，并且具有三种异构体。从大的角度来说，Stat3可以分为SH2区、SH3区、Y7O5、DNA结合区、羧基端、丝氨酸磷酸化位点及氨基酸序列等七个不同的序列[14]。研究表明：在机体生物酶作用下Stat3在人体中能将不同氨酸进行有效的结合，能生成同源性二聚体，并且能识别特异的DNA序列，促进靶基因激活。由此看出：宫颈癌患者发生、发展后IL-6可激活Stat3基因，刺激细胞生长，促进肿瘤的发生、发展。本研究中，单因素结果显示：宫颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与年龄、肿瘤大小比较差异无统计学意义；颈癌组织Stat3和TopoⅡα表达阳性率与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分期关系密切（P＜0.05）。由此看出：Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中表达时受到的影响因素相对较多，能评估患者预后，指导临床治疗。

TopoⅡα也是人体中常见的核蛋白，能调节核酸结构的变化，并且在DNA的复制、修复、转录中发挥了重要的作用，在机体生命的维持中具有重要的作用。从大的角度来说，TopoⅡ主要由TopoⅡα、TopoⅡβ两种类型，并且在所有的核仁内均能表达，是所有核仁必须物，在核糖体RNA的转录、增殖中发挥了重要的作用。TopoⅡα主要位于核基质中，能直接参与宫颈癌DNA的复制和增殖，并且其表达水平受细胞周期的影响。通常来说，TopoⅡ主要位于正常细胞的S期、G期和M期，并且在G2/M期中能达到峰值，能直接参与细胞的分裂，是临床上细胞分裂的一个特异性指标。因此，恶性肿瘤患者中TopoⅡ表达水平要明显高于良性疾病或正常组织[15-17]。国外学者研究显示：TopoⅡα含量高的细胞分化程度低。在口腔扁平苔藓中，TopoⅡα表达与细胞的异型性，基底细胞增生等密切相关。在口腔上皮鳞癌、外阴鳞癌中TopoⅡα表达与肿瘤细胞分级正相关，且有增殖依赖性。本研究中，相关性研究结果显示：观察组Stat3和TopoⅡα表达阳性与浸润情况、病理分级、淋巴结转移、宫颈癌类型及临床分析呈正相关性（P＜0.05）。因此，为了提高宫颈癌患者临床治疗效果，治疗时应该完善患者相关检查，术后及时对病理标本进行Stat3和TopoⅡα检测，指导患者术后治疗，动态了解患者病情变化情况，使得患者的治疗更具针对性。此外，宫颈癌患者治疗时应密切观察患者生命体征，对于出现异常患者及时采取有效的措施进行干预治疗，促进患者早期恢复。

综上所述，Stat3和TopoⅡα在宫颈癌患者中均呈高表达，能直接参与疾病的发生、发展，加强Stat3和TopoⅡα水平测定能为患者后续治疗提供依据。

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Stat3 and TopoⅡalpha in the expression and clinical significance of cervical cancer

Huang Lin-ling,Wu Juan,Li Yan
(Department of Gynecology,Jiangxi maternal and child health care hospital,Nanchang,Jiangxi,330006,China)

Objective To study the Stat3 and TopoⅡα expression and clinical significance in patients with cervical cancer.Methods Apply from December 2015 to June 2016 in jiangxi province health care of women and children's acquisition of cervical squamous cell carcinoma of the surgical specimens from 45,set as observation group,the selection of uterine fibroids all the 15 cases of normal cervical tissue after hysterectomy,set as control group.Using immune histochemical method detection in Stat3 and TopoⅡα expression levels in the organization of two groups,analyzing Stat3 and TopoⅡα expression and clinical significance in patients with cervical cancer.Results Observation group organization after immune histochemical method to determine the Stat3 and TopoⅡα expression positive rate,were higher than control group(P＜0.05);Single factor the result shows:the cervical cancer tissue Stat3 and TopoⅡα expression positive rate with age,tumor size,no statistical significance;Cervical cancer tissue Stat3 and TopoⅡα expression positive rate and infiltration,pathologic stage,lymph node metastasis,closely related to cervical cancer type and clinical stage(P＜0.05);correlation results show:the observation group Stat3 and TopoⅡα expression positive and infiltration,pathologic stage,lymph node metastasis,the types of cervical cancer and clinical analysis was a positive correlation(P＜0.05).Conclusion Stat3 and TopoⅡα were highly expressed in patients with cervical cancer,can be directly involved in the occurrence and development of diseases,strengthen Stat3 and TopoⅡα level measurement can provide basis for follow-up treatment for the patient,is worthy of popularization and application.

Stat3;TopoⅡα;Cervical cancer;Clinical significance

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.001

江西省卫生计生委科技计划（20165469）