益气养阴健脾方对急性胃溃疡模型大鼠血清炎症因子、行为学和表皮生长因子表达的影响

2017-09-28韩啸峰

中国中医急症 2017年9期

关键词：生长因子胃溃疡健脾

韩啸峰

（山东中医药大学附属医院，山东济南 250001）

益气养阴健脾方对急性胃溃疡模型大鼠血清炎症因子、行为学和表皮生长因子表达的影响

韩啸峰

（山东中医药大学附属医院，山东济南 250001）

目的观察益气养阴健脾方对急性胃溃疡模型大鼠血清炎症因子、行为学和表皮生长因子表达的影响。方法 30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组，每组10只，采用不可预知性刺激法建立急性胃溃疡大鼠模型，对照组和模型组蒸馏水灌胃，中药组益气养阴健脾方煎煮液灌胃。观察各组大鼠的行为学和胃组织病理学变化，比较血清白介素6（IL-6）、白介素23（IL-23）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，免疫组化法检测检测胃黏膜表皮生长因子（EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）。结果模型组大鼠精神萎靡，扎堆睡觉，反应迟钝，毛发不顺，饮食减少，大便稀，而中药组大鼠表现不明显。与对照组比较，模型组大鼠糖水消耗、垂直运动和水平运动得分降低，强迫游泳中静止时间增加，中药组可增加大鼠糖水消耗、垂直运动和水平运动得分，减少强迫游泳中静止时间（P<0.05）。与对照组比较，模型组胃黏膜缺损，炎症细胞浸润、纤维素渗出、部分肌质纤维溶解，中药组溃疡愈合，胃黏膜下肉芽组织增生，炎症细胞浸润减轻，毛细血管丰富。模型组血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著升高，中药组血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著降低（P<0.05）。模型组大鼠胃黏膜EGF和VEGF显著升高，中药组胃黏膜EGF和VEGF显著降低（P<0.05）。结论益气养阴健脾方可改善急性胃溃疡模型大鼠行为学，保护胃组织，减轻炎症反应，促进胃黏膜修复及溃疡愈合。

益气养阴健脾方胃溃疡炎症因子表皮生长因子

临床中急性胃溃疡易发生多种并发症，发病机制较复杂，与胃黏膜生长因子失衡、炎症反应等密切相关［1-2］。胃溃疡属中医学“胃脘痛”“胁痛”范畴，因肝郁气滞、肝胃不和，饮食不节损伤脾胃所致，治宜益气养阴、健脾疏肝为主［3-4］。益气养阴健脾方益气养阴、健脾疏肝，可减轻急性胃溃疡炎症反应，提高临床疗效，但其作用机制尚不明确［5］。因此，本研究以不可预知性刺激法建立急性胃溃疡大鼠模型大鼠，旨在探讨益气养阴健脾方对急性胃溃疡模型大鼠血清炎症因子、行为学和胃黏膜表皮生长因子表达的影响，为临床治疗提供新的参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 30只健康清洁级SD大鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供［许可证号SCXK（京）2011-0011］，雌雄各半，体质量（250±20） g。自然光线，以标准饲料和无菌蒸馏水喂养。

1.2 试药与仪器水合氯醛（国药集团化学试剂有限公），益气养阴健脾方（组成：黄芪 15 g，党参 10 g，生地黄 15 g，玄参 10 g，柴胡 10 g，薏苡仁 20 g，白芍10 g，枳壳 10 g，川芎 10 g，香附 10 g，延胡索 10 g，白及10 g，甘草10 g。药材均为本院中药房提供，并制成1 g/mL 的煎煮液）。白介素-6（IL-6）、白介素-23（IL-23）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒（上海生工技术有限公司），表皮生长因子（EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）抗体（美国 Santa Cruz公司）。NI500显微镜（日本尼康公司），Biotek aQuant型酶标仪（上海坤肯生物化工有限公司），RM2125切片机和TPIIZO全自动封闭式组织脱水机（德国徕卡公司），Y6-6LF生物组织包埋机（湖北亚光易用电子技术有限公司），13R离心机［力康集团力新仪器（上海）有限公司］。

1.3 造模与分组 30只SD大鼠，随机取10只为对照组，剩余20只SD大鼠给予多种不可预知的应激刺激制作急性胃溃疡模型［6］。不可预知应激刺激方法有4℃冰水中游泳5 min，夹尾巴3 min，束缚制动4 h/d，电击30次，束缚1周后，每日随机选取3种应激刺激方法，连续刺激8 d后，20只大鼠随机分为模型组与中药组。对照组和模型组给予蒸馏水灌胃，中药组给予益气养阴健脾方煎煮液灌胃，10 mL/kg，每日灌胃1次，连续给药7 d。

1.4 指标检测观察各组大鼠的皮肤毛发、情绪反应、行为状态、兴奋程度、活跃状况、饮食等一般情况。灌胃给药7 d后，训练大鼠适应含糖饮水，计算大鼠糖水消耗，进行旷场实验，观察垂直运动和水平运动，直立次数为垂直活动得分，动物穿越底面方块数为水平活动得分，记录5 min内大鼠静止时间［7］。处死各组大鼠，切取胃组织标本，甲醛固定，24 h后，经酒精脱水和二甲苯透明后，石蜡包埋，连续切片，切片间距5 mm，HE染色，树胶封片后，光学显微镜观察胃组织病理学变化。取血液2 mL，自然凝固后，3000 r/min离心10 min，分离血清，采用ELISA法检测血清IL-6、IL-23和TNF-α水平，严格按说明书操作。采用免疫组化法检测胃黏膜EGF和VEGF，严格按照说明书操作，在光学显微镜下EGF阳性表达为棕黄色颗粒，平均光度值反映阳性表达强度，每张随机选取3个视野，自动计算其平均光度值和平均灰度值，进行统计分析。

1.5 统计学处理应用SPSS19.0统计软件。计量资料以±s）表示，采用t检验比较组内和组间差异；计数资料以n（%）表示，应用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠一般状态比较对照组大鼠行动迅速敏捷，摄食正常，毛发整齐有光泽，大便正常；模型组精神萎靡，扎堆睡觉，反应迟钝，毛发不顺，饮食减少，大便稀，而中药组大鼠一般状态与对照组比较表现不明显。

2.2 各组大鼠行为学比较见表1。与对照组比较，模型组大鼠糖水消耗、垂直运动和水平运动得分降低，强迫游泳中静止时间增加。中药组可增加大鼠糖水消耗、垂直运动和水平运动得分，减少强迫游泳中静止时间，差异均有统计学意义（P<0.05）。

表1 各组大鼠糖水消耗、垂直运动、水平运动和强迫游泳实验比较

与模型组比较，*P＜0.05；与对照组比较，△P＜0.05。下同。

组别 n 糖水消耗（mL）垂直运动（分）水平运动（分）强迫游泳中静止时间（s）对照组 10模型组 10 3.71±0.89 72.16±9.36 16.37±3.24 64.21±6.74 2.51±0.76△ 41.61±8.42△ 6.15±2.53△ 115.67±8.69△中药组 103.16±0.91* 56.84±9.13* 11.05±3.12* 76.74±8.64*

2.3 各组大鼠病理学变化见图1。对照组大鼠组织结构完整，无溃疡形成；模型组胃黏膜缺损，炎症细胞浸润、纤维素渗出、部分肌质纤维溶解；中药组溃疡愈合，有癒痕组织，胃黏膜下肉芽组织增生，炎症细胞浸润减轻，毛细血管丰富。

图1各组大鼠胃组织病理学变化（HE染色，400倍）

2.4 各组大鼠炎症因子比较见表2。模型组血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著升高，中药组血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著，差异均有统计学意义（P<0.05）。

表2 各组大鼠血清炎症因子比较

组别 n IL-6（ng/L） IL-23（ng/L） TNF-α（μg/L）对照组 10模型组 10 100.21±16.63 53.54±3.59 0.98±0.23 175.41±21.37△ 75.17±4.31△ 1.67±0.28△中药组 10130.52±17.61* 64.12±3.86* 1.27±0.21*

2.5 各组大鼠表皮生长因子比较见表3。模型组大鼠胃黏膜EGF和VEGF显著升高，中药组胃黏膜EGF和VEGF显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。

表3 各组大鼠胃黏膜EGF和VEGF比较（IOD

组别 n EGF VEGF对照组 10模型组 10 0.19±0.03 0.16±0.04 0.85±0.12△ 0.76±0.09△中药组 100.22±0.05* 0.24±0.06*

3 讨论

急性胃溃疡患者组织局部结构与功能未完全恢复，可存在结缔组织充填，黏膜层变薄，微血管结构紊乱，易并发出血穿孔，可发展为慢性胃溃疡，严重影响患者的预后［8-9］。中医学认为急性胃溃疡与正气不足及脾胃瘀阻，饮食不节、肝怒犯脾等致气血失畅、胃膜受损、胃膜不生，胃溃疡与肝脾两脏密切相关，是多种因素所致［10-11］。多种不可预知应激法制作急性胃溃疡模型大鼠，动物不仅不能预知刺激，避免适应现象的发生，也可模拟情志异常引发肝郁证的过程，符合以炎性糜烂、胃黏膜浅表性溃疡甚至出血急性胃溃疡病机［12］。

本研究发现，模型组精神萎靡，扎堆睡觉，反应迟钝，毛发不顺，饮食减少，大便稀，糖水消耗、垂直运动和水平运动得分降低，强迫游泳中静止时间增加，胃黏膜缺损，炎症细胞浸润、纤维素渗出、部分肌质纤维溶解，血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著升高，胃黏膜EGF和VEGF显著升高，说明不可预知性刺激法建立急性胃溃疡大鼠模型的一般状态、行为学、胃组织病理、炎症因子和胃组织皮生长因子均发生了显著的变化，所建立的急性胃溃疡大鼠模型符合急性胃溃疡患者的病理变化，所建立的动物模型可较好地评价药物的干预作用和机制的研究［13］。给予益气养阴健脾方煎煮液灌胃后发现，中药组可显著改善大鼠的皮肤毛发、情绪反应、行为状态、兴奋程度、活跃状况、饮食等一般情况，增加大鼠糖水消耗、垂直运动和水平运动得分，减少强迫游泳中静止时间，促进溃疡愈合，胃黏膜下肉芽组织增生，炎症细胞浸润减轻，毛细血管丰富，血清IL-6、IL-23和TNF-α水平显著降低，胃黏膜EGF和VEGF显著降低，提示益气养阴健脾方可改善急性胃溃疡模型大鼠行为学，保护胃组织，减轻炎症反应，促进胃黏膜修复及溃疡愈合。益气养阴健脾方具有益气养阴、健脾疏肝功效，方中黄芪健脾补中、益卫固表，益气升阳以治疗中虚；党参健脾补气；生地黄滋阴降火；玄参、生地黄清热凉血，养阴生津；柴胡疏散退热、疏肝解郁、升阳举陷，疏肝理气；薏苡仁健脾和胃；白芍养肝敛阴、和胃止痛，助柴胡疏肝功效；枳壳泻脾壅滞，调中焦运化，加强疏肝理气、解郁之功；川芎行气开郁、活血止痛；香附理气和胃止痛，延胡索活血，行气，止痛；白芍和甘草配伍缓急止痛，诸药合用，共奏益气养阴、健脾疏肝功效，对急性胃溃疡可标本兼治。现代药理学证实柴胡疏肝可改善急性应激大鼠行为学及胃组织学形态，减少溃疡指数，提高大脑蓝斑中脑肠肽含量，改善胃局部血液循环、清除氧自由基，保护胃黏膜和增强免疫力［14-15］。

综上所述，益气养阴健脾方可改善急性胃溃疡模型大鼠行为学，保护胃组织，减轻炎症反应，促进胃黏膜修复及溃疡愈合。

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