2015年甘肃省外环境禽流感病毒监测预警分析

李保娣 李红育 张慧 刘丽琦 李梓 于德山 何健

730000 兰州，甘肃省疾病预防控制中心(李保娣、李红育、张慧、于德山、何健)；102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心(刘丽琦、李梓)

·论著·

2015年甘肃省外环境禽流感病毒监测预警分析

李保娣 李红育 张慧 刘丽琦 李梓 于德山 何健

730000 兰州，甘肃省疾病预防控制中心(李保娣、李红育、张慧、于德山、何健)；102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心(刘丽琦、李梓)

目的了解甘肃省外环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况，科学指导全省禽流感防控工作。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法(Real-time fluorescence quantitative-Polymerase Chain Reaction，real-time PCR)对2015年全省14个市州采集的标本2 015份进行禽流感病毒核酸检测。结果FluA、H5、H7、H9的检出率依次为：19.90%、0.05%、0和19.65%。FluA检出率最高的环境标本为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本(31.09%)，最低的为粪便标本(13.85%)。FluA检出率在12月份最高(28.18%)，6、7月份最低(8.59%和8.66%)。定西市和陇南市禽流感病毒核酸FluA和H9的检出率显著高于其他市州(χ2=4.523～88.059，P=0.000～0.043<0.05)。结论2015年甘肃省涉禽外环境中存在的禽流感病毒污染主要为H9亚型，未检出H7N9，应加强监测，做好禽流感预警。

人禽流感是由甲型流感病毒某些感染禽类的亚型即禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的急性呼吸道传染病。近年来全球多个国家发生高致病性禽流感疫情，波及范围十分广泛，对人类健康构成了潜在的重大威胁[1]。为评估甘肃省人禽流感发生风险，为早期发现和预防禽流感疫情提供依据，本研究对2015年全省外环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况进行分析。

图1 2015年甘肃省环境禽流感监测结果Fig.1 The avian influenza monitoring results of 2015 in Gansu province environment

1 材料与方法

1.1标本收集依据监测技术方案在全省14个市州的各监测点[当地活禽批发市场、城乡农贸市场、家禽规模养殖场(户)等]采集禽类粪便、笼具内部表面涂布物，饮水或屠宰后的污水等标本，以市州为单位每月采集10～20份。标本采集后，于4 ℃条件下24 h之内送至所在市州疾病预防控制中心(CDC)的国家级流感监测网络实验室，实验室收到标本后一式三份分装后冻存于-70 ℃冰柜备检。本研究共检测标本2 015份。

1.2病原学检测

1.2.1 病毒RNA提取: 环境标本中核酸提取用Rneasy Mini Kit(德国Qiagen公司)，操作按试剂盒说明书进行。

1.2.2 禽流感病毒核酸检测: 以Real-time PT-PCR方法进行禽流感病毒FluA核酸检测，FluA阳性的标本进一步检测H5、H7、H9亚型核酸。部分市州使用的核酸检测商品化试剂盒由江苏硕世、上海之江提供，PCR扩增引物探针由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心(CNIC)提供，扩增试剂盒为德国Qiagen公司生产，所有操作均按照试剂盒说明书进行。标本检测阳性者送省CDC复核，省CDC复核后的阳性标本送至CNIC采用微量中和实验进行二次复核，以CNIC反馈的结果为准。

1.3主要仪器设备实时荧光PCR仪(ABI7500/7300仪)、SIGMA3-18K离心机等。

1.4统计分析数据采用Excel 2010 和SPSS16.0软件进行整理和统计分析。率的比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1时间分布2015年全省共检测外环境标本2 015份，检出病毒核酸FluA阳性401份，阳性率为19.90%。其中H9阳性396份，占总阳性数的98.75%，H9可疑阳性4份，H5阳性1份，未检出H7亚型禽流感病毒。按月统计，2015年12月阳性率最高(28.18%)，6月最低(8.59%)。FluA在不同季度的检出率依次在14.95%～23.46%、8.59%～20.90%、8.66%～23.70%和22.52%～28.18%之间波动，FluA检出率在二、三季度总体上显著低于一、四季度(χ2=8.155，P<0.05)，详见图1。

2.2不同类型标本分布全省不同类型标本中均检出AIV核酸，其中检出率最高的为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本(31.09%)，最低的为粪便标本(13.85%),平均检出率为19.90%。H9检出率最高的为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本(30.71%)，最低的为粪便标本(13.47%)；粪便标本中检出1份H5阳性，其余标本中均未检出。所有标本均未检出H7亚型禽流感病毒。经统计学检验，各类型标本中禽流感病毒FluA核酸阳性率差异有统计学意义(χ2=52.322，P=0.000)：宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本FluA核酸阳性率显著高于粪便标本、笼具表面擦拭标本和禽类饮水(χ2=6.687～39.755，P=0.000～0.003)；清洗禽类的污水的FluA阳性率显著高于粪便标本和禽类饮水

表1 2015年不同标本种类禽流感病毒核酸检测结果

注：N,阳性数量；L,阳性率

Note: N, positive number; L, positive rate

表2 2015年甘肃省不同地市禽流感病毒核酸检测结果

注：N,阳性数量；L,阳性率

Note: N, positive number; L, positive rate

(χ2=24.304，P=0.013)，但与笼具表面擦拭标本和宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本的FluA核酸阳性率差异无统计学意义(χ2=7.392，P=0.0682)，详见表1。

2.3地区分布全省14个市州除天水市外均检出AIV核酸(401份)，其中H9亚型阳性400份，占FluA阳性数的99.75%。经统计学检验，河东9市州FluA平均检出率(21.29%)和河西5市FluA平均检出率(17.52%)差异有统计学意义(χ2=1.260，P<0.01)；定西市和陇南市禽流感病毒核酸FluA和H9的检出率显著高于全省其它市州(χ2=4.523～88.059，P=0.000～0.043)，详见表2。

3 讨论

甲型流感病毒的抗原变异性非常强，禽流感的暴发和流行，增加了病毒发生基因重排的机会，增加了新型流感病毒(包括可以感染人的毒株)产生的几率，严重威胁人类健康[1]。2015年甘肃省外环境禽流感监测结果显示，全省外环境AIV以H9亚型为主，与2014年武威市秦让山等人的研究结果(H9亚型占96.36%)一致[2]，H5亚型检出率很低(0.20%)，未发现H7亚型AIV。2013年以来H7亚型AIV对公众健康造成的威胁不容忽视[3]，全省要做好密切的监测。

从监测结果来看，一年四季AIV均可污染外环境，但以一、四季度较为严重，具有明显的季节性，这与我国部分南方省市研究结果相一致[4-5]。活禽交易市场外环境标本检出率以宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本和清洗禽类的污水为最高，与秦让山等人研究结果一致[2]，表明在禽类宰杀、销售等环节非常容易造成外环境的污染，尤其宰杀禽类时所用的案板和水等更容易被AIV污染[6]。由于活禽批发市场卫生条件差、宰杀场所设施简陋、活禽来源复杂、无相关的消毒管理措施等，污染机会非常大，有可能增加不同亚型病毒之间重配的几率[7]，病毒分布的改变和变异随时可能发生。所以应加强健康教育，提升从业人员防护意识并加强防护措施，尽可能降低病毒扩散的风险。

监测结果表明：全省14个市州中定西市和陇南市AIV核酸检出率显著高于其他市州，建议两市尽快开展职业暴露人群血清学调查，对全市禽流感病毒分布状况进行全面分析；河西5市中，张掖市和嘉峪关市外环境禽流感污染状况相对较轻，但毗邻嘉峪关市的酒泉市、武威市和金昌市的高检出率提醒河西地区要警惕人感染禽流感病例的发生。全省各市州应加强外环境禽流感监测工作，及时掌握本地区禽流感病毒传播力和致病力的改变情况，及时防范可能发生的人感染禽流感风险。禽类暴露或与禽类密切接触是人感染禽流感的危险因素之一[8-9],建议全省建立多部门联防联控机制，积极开展职业暴露人群禽流感感染水平监测研究，动态评估禽流感病毒分布趋势，做好风险预警。

志谢：感谢在全省流感/禽流感防控工作中做出贡献的人员。

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[4] 陈宗遒,陆剑云,肖新才,等.广州地区2006-2012年人感染H5/H7/H9亚型禽流感病毒风险监测[J].中华流行病学杂志,2013,34(9):900-905. doi:10.3760/cma.j.jssn.0254-6450.2013.09.010.

[5] 胡世雄,孙倩莱,刘富强,等.2009-2011年湖南省禽流感外环境监测结果分析[J].疾病监测,2014，29(3):207-209. doi:1003-9961(2014)03-0207-03.

[6] 张烨,李晓丹,邹淑梅,等.2009～2013年我国活禽市场环境样本中禽流感病毒的检测[J].病毒学报, 2015,31(6)：615-619.doi:1000-8721(2015)06-0615-05.

[7] Centers for Disease Control and Prevention.Types of Influenza Viruses.2014[EB/OL].[2017-04-01].http://www.cdc.gov/flu/about/viruses/types.htm.

[8] Chen Y,Liang WF,Yang SG,et al.Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry：clinical analysis and characterisation of viral genome[J].Lancet,2013,381(9881)：1916-1925. PMID: 23623390.

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EarlywarninganalysisofavianinfluenzavirusinenvironmentalsamplesinGansuprovince，2015

LiBaodi,LiHongyu,ZhangHui,LiuLiqi,LiZi,YuDeshan,HeJian

GansuProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Lanzhou730000,China(LiBD,LiHY,ZhangH,YuDS,HeJ)；ChineseNationalInfluenzaCenter，NationalInstituteforViralDiseaseControlandPrevention，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206，China(LiuLQ,LiZ)

HeJian,Email: 1014770674@qq.com;LiHongyu,Email:hongyuligs@163.com

ObjectiveTo understand the contamination status of avian influenza virus H5, H7, and H9 in environmental samples in Gansu province during 2015，and provide scientific guidance for the prevention and control of human infection with AIV in the province.MethodsWe detected the AIV nucleic acid of 2015 environmental samples with real-time PCR; the samples were collected from all of the monitoring points in the whole province, then we analyzed the result of environmental monitoring of pathogens in the province.ResultsThe detection rates of FluA, H5, H7 and H9 were 19.90%, 0.05%, 0 and 19.65% respectively. The sample specific detection rate of FluA was the highest in wipe specimen of the board surface of slaughtering or placing poultry (31.09%) and the lowest in stool specimens (13.85%). FluA detection rate was the highest in December and the lowest in June and July(8.59% and 8.66%). The detection rate of Dingxi city and Longnan city of nucleic acid of avian influenza virus FluA and H9 were significantly higher than those in other cities in the province(χ2=4.523～88.059，P<0.05).ConclusionsThe main AIV pollution of the external environment in Gansu province in 2015 were the H9 subtype, and there was no H7N9 positive, we should strengthen the monitoring and early warning for avian influenza.

Avian influenza virus; Polymerase chain reaction; Monitoring

禽流感病毒；聚合酶链反应；监测

2017-05-25)

(本文编辑：唐浏英)

何健，Email：1014770674@qq.com；李红育，Email：hongyuligs@163.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.04.007

国家“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项(2012ZX10004-208)；甘肃省卫生行业科研计划项目(GSWSKY2017-28)

Fundprograms: State Mega-project for Infectious Disease Research of China(2012ZX10004-208)；Health Industry Scientific Research Projects in Gansu Province(GSWSKY2017-28)