金钗石斛抗血栓作用研究

李婵娟

摘要：目的通过对金钗石斛的提取物和粗提物分别进行抗血小板聚集活性筛选和全血凝血实验，探讨金钗石斛的抗血栓作用。方法采用ADP诱导大鼠体外血小板聚集实验和检测小鼠全血凝血时间来评判金钗石斛的抗血栓作用。结果对诱导剂诱导的血小板聚集有一定抑制趋势，但与空白对照组相比无统计学意义。在测定全血凝血时间时，6.0 g/kg剂量组明显延长凝血时间，具有显著的抗凝作用（P<0.05）。结论金钗石斛在血栓性疾病中具有一定的积极作用，但活性成分的筛选有待进一步研究。

关键词：金钗石斛；抗血栓；药效筛选

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）09-0060-03

【Abstract】Objective： To study the anti-thrombotic effect of Dendrobium nobile by screening anti-platelet aggregation activity and total blood clotting experiment through the extract and crude extract of Dendrobium nobile. Methods： The anti-thrombotic effect of Dendrobium nobile was evaluated by ADP-induced platelet aggregation in vitro and the time of whole blood clotting in mice. Results： There was certain control tendency for platelet aggregation induced by inducer， but it was not statistically significant when compared with the blank control group. In the determination of whole blood clotting time， 6.0g/kg dose group significantly prolonged clotting time， with significant anticoagulant effect（P<0.05）. Conclusion： Dendrobium nobile has a positive effect on thrombotic diseases， but the screening of active ingredients needs further study.

【Key words】Dendrobium nobile， antithrombotic， drug effect screening

石斛药用历史悠久，始见于《神农本草经》[1]，列为上品，“主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴，久服厚肠胃。”李时珍在《本草纲目》中亦有收载[2]，其有养胃生津、滋阴清熱、明目的功能，用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明等症状。如今石斛仍被广泛应用，诸多中成药如：脉络灵，通塞脉片，石斛散，石斛夜光丸，清咽宁，养阴口服液，以及一些名贵饮料等均以石斛为主要成分或含有石斛。金钗石斛作为药典石斛之一，在临床上和中药复方中被广泛应用，特别是其抗氧化作用在氧化损伤类疾病中的应用得到广泛的认可，而在治疗心脑血管疾病中，抗血栓和抗氧化是对抗此类疾病的关键点，本文以具有较好抗氧化作用的金钗石斛为研究对象，进一步探讨金钗石斛是否具有抗血栓相关的药理作用，从而为金钗石斛应用于心脑血管疾病提供药理学依据。

1金钗石斛资源简介

金钗石斛[3]Dendrobium nobile Lindl.茎丛生，上部稍扁而稍弯曲上升，高10～60 cm，粗达1.3 cm，具槽纹，节略粗，基部收窄。叶近革质，长圆形或长椭圆形，长6 cm～12 cm，宽1 cm～3 cm，先端2圆裂，花期有叶或无叶。总状花序有花1-4朵；花大，下垂，直径达8 cm，花被片白色带浅紫色，先端紫红色；唇瓣倒卵状矩圆形，长4 cm～4.5 cm，宽3 cm～3.5 cm，先端圆形，唇盘上面具1紫斑；花药2室，花粉块4个。花期3-4月。

2金钗石斛抗血小板聚集的药理作用

2.1实验目的本研究旨在观察与评价金钗石斛中几种化学成分对诱导剂所致血小板聚集的影响，结合原药材的活性筛选结果，初步分析物质基础与活性的相关性。

2.2实验材料

2.2.1受试物金钗石斛提取成分：jc1、jc2。以上受试样品均为粉末状，由中国科学院昆明植物所提供。用二甲亚砜溶解成饱和溶液为最高浓度，再小量分装，低温冻存，临用前以相同溶媒倍比稀释成各浓度供体外血小板聚集实验用。

2.2.2对照品Aspirin（ASP），100 mg/片，批号：J20130078，拜耳公司生产。用二甲亚砜溶解成饱和溶液为最高浓度，再用相同的溶媒倍比稀释成各浓度供体外血小板聚集实验用，现用现配。

2.2.3诱导剂ADP，sigma，批号：A2754。ADP用生理盐水配成3000 umol/L浓度，于-20℃以下小量分装，低温冻存。临用前复溶，并用生理盐水稀释至300 umol/L。

2.2.4动物

2.2.4.1品系及来源SPF级SD大鼠，雌雄兼用，体重250～350 g，由昆明医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（滇）k2015-0002，发证机关：云南省科学技术厅。

2.2.4.2饲养条件大鼠饲养于IVC动物实验室，温度20～25℃（日温差≤3℃），湿度40%～70%，照明12 h：12h明暗交替，照度150～300 lx，噪音≤60 dB。endprint

2.2.4.3饲养管理大鼠用透明塑料盒群养，每箱≤6只，每日喂饲鼠用配合饲料，自由饮水，视情况更换笼具和垫料。豚鼠采用不锈钢丝笼饲养，雌雄分笼，每笼5只，每日喂饲、喂水一次并给予青草适量，每日更换笼具和垫料。

2.2.5主要仪器AL104电子分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；JJ2000型电子天平，常熟双杰测试仪器厂；Eppendorf离心机，德国艾本德股份公司；LBY-NJ4血小板聚集仪，北京普利生仪器有限公司；BCD-193冰箱，合肥荣事达电冰箱有限公司；Millipore超纯水处理系统，美国Millipore公司；101-2EBS电热鼓风干燥箱，北京市永光明医疗仪器厂。

2.2.6主要试剂氯化钠注射液，国药准字H53020469，500mL/瓶，昆明南疆制药有限公司；二甲亚砜，上海试剂厂；枸橼酸钠，天津市化学试剂三厂，批号091107；水合氯醛，天津市瑞金特化学试剂有限公司，批号20090814。

2.2.7数据处理实验结果以（x±s）表示，统计用DAS1.0软件处理。计量资料符合正态分布，方差齐用t检验，方差不齐用t，检验；偏态分布用秩和检验。

2.3方法与结果

2.3.1对ADP诱导大鼠体外血小板聚集的影响参考文献方法[4]，预先将玻璃比浊管和搅拌珠用1%的硅油甲苯溶液硅化烘干后，挑选透光值相近的比浊管备用。将SD大鼠以300 mg/kg.bw剂量腹腔注射水合氯醛麻醉后，颈总动脉插管取血，用3.8%的枸橼酸钠1：9抗凝，以3000 r/min离心3min，取出上层富血小板血浆（PRP）后，剩余部分再以4000 r/min离心10 min，管中上清液即为贫血小板血浆（PPP）。取200 ul的PRP置于比浊管内，每管加入不同浓度的各受试物药液2 uL，对照管PRP中加入2 uL二甲基亚砜。测定时先用PPP（加入与PRP管相同的溶液2 uL，消除受试物自身颜色的干扰）调零，然后将PRP标本放入测定孔，加入搅拌珠，在37℃温育5min后加入ADP诱导剂5ul（终浓度为7.246 umol/L），检测对照管与给药管PRP在5 min内的最大聚集率，并计算血小板聚集的抑制率和各受试物的半数抑制浓度（IC50），结果见表1-2。

血小板聚集抑制率（%）=（對照组最大聚集率-给药组最大聚集率）/对照组最大聚集率×100%

由表1可见，0.882～0.11mmol/l浓度的jc1对ADP诱导大鼠的体外血小板聚集有一定抑制趋势，但无明显剂量依赖性；因其最高浓度的抑制率低于50%，故无法计算出IC50。

由表2可见，0.970～0.121 mmol/L浓度的jc2对ADP诱导大鼠的体外血小板聚集有一定抑制趋势，但无剂量依赖性；因其最高浓度的抑制率低于50%，故无法计算出IC50。

3金钗石斛对小鼠全血凝血时间的影响

选用18～20 g雄性昆明种小鼠44只，按体重随机分为4组：空白对照组；阳性对照阿司匹林40 mg/kg组；石斛样品粗提物3.0 g/kg组；石斛样品粗提物6.0 g/kg组；每组11只。给药组动物每日分别按3.0 g/kg，6.0 g/kg干燥药材剂量灌胃给药一次，连续3d，空白对照组灌服等容量1%CMC-Na 20ml/kg.bw。末次给药后1h，用20ul采血管于每鼠眼后静脉丛取血，以毛细管法测定凝血时间。结果表明，3.0 g/kg的低剂量组仅有延长趋势而无统计学差异，6.0 g/kg的高剂量组延长率79.45%，与空白对照组相比差异显著（P<0.05）。

4讨论

金钗石斛的两种提取物在进行抗血小板聚集活性筛选时，对诱导剂诱导的血小板聚集有一定抑制趋势，但与空白对照组相比无统计学意义。金钗石斛的粗提物测定全血凝血时间时，6.0 g/kg剂量组明显延长凝血时间，具有显著的抗凝作用。从这一结果可看出，金钗石斛在血栓性疾病中具有一定的积极作用，而在抗血小板聚集实验中未显示出较好的效果，这可能与我们提取条件有限，从金钗石斛中提取的成分种类过少，而已提取的这两种成分均不是金钗石斛抗血小板聚集的最佳活性物质，有待进一步研究。

参考文献：

[1]中国药科大学.中药辞海[M].北京：中国医学科技出版社，1993：1461-1466.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2000：75.

[3]赵兴蕊，刘常逊，张庆芝.保山地区石斛属植物药用资源[J].中国保健营养，2013.04：2069.

[4]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1991：1119.endprint