谈化工检验薄层色谱分离技术

2017-09-24尹辉

科学与财富 2017年23期

关键词：薄层化工色谱

尹辉

摘要：薄层色谱与纸色谱相比，具有分析时间较短、分离能力较强，检出灵敏度较高的特点。薄层色谱实现了仪器化，自动化程度提高，测定精度及灵敏度都有很大提高，至今仍充满活力。

关键词：化工；检验；薄层；色谱；分離技术

平面色谱法又包括纸色谱法和薄层色谱法。薄层色谱法是用载板上涂布或烧结一薄层物质作为固定相的液相色谱法。应用最多的是以硅胶为固定相的吸附薄层色谱法。

薄层色谱与纸色谱相比，具有分析时间较短、分离能力较强，检出灵敏度较高的特点。60年代以来已取代了部分纸色谱的工作。又由于薄层色谱实现了仪器化，自动化程度提高，测定精度及灵敏度都有很大提高，至今仍充满活力。

1 薄层色谱分离原理

将样品溶液点于预先涂布有固定相（如硅胶）薄层板一端适当的位置，将板置于层析缸中，使点有试样的一端浸人流动相（展开剂）中，由于薄层的毛细管作用，展开剂沿薄层渐渐上升，试样的各组分沿着薄层在固定相和流动相之间不断发生溶解、吸附、再溶解、再吸附。由于各组分的分配系数不同使它们在薄层上移动的距离也不同，从而达到分离。展开剂上升到一定距离时，从层析缸中取出薄层板。如果组分是有色的，就可以看到各个色斑，如果组分无色，要用物理的或化学的方法显色，得到一个薄层色谱图。

2 薄层色谱操作方法

薄层色谱的实验步骤有：制板、点样、展开、显色、定性和定量。

2.1 薄层板的制备

将平板玻璃裁成正方形或长方形，一般分析用20cm×20cm和20cm×10cm两种。将玻璃片洗净烘干。通常采用湿法制板，它具有薄层牢固、可批量制备、展开后便于保存、分离效果好等优点。

2.2 点样

样品用适当的有机溶剂制成溶液，浓度约为0.5～2mg/mL。点样量为0.5-5uL，在距薄层板底边1cm处点样，原点直径在3～4mm。手工点样用微量注射器。如用点样仪点样，样量精确、形状整齐一致，能提高定量分析的准确度。

2.3 展开

展开的实验操作是，将点样后的薄层板置于密闭的层析槽中，下端浸入展开剂高度不应超过0.5cm。展开距离一般为10～15cm，根据溶剂移动的方向分为上行展开和下行展开。另外，还可利用多次展开、双向展开等方法得到不同的层析结果。

2.4 定位与显色

确定被分离组分的位置称为定位。展开后的薄层板自槽中取出，室温下挥发去溶剂。若被分离组分本身有颜色，它们的位置根据有色的斑点即可确定。无色的化合物可采用物理检出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射检出法来定位。

2.5 定性

试样与标准品同板作对照试验，二者只f值相同且显色特性相同，可初步认为是同一化合物。必要时采用其他方法加以验证。