H型高血压患者代谢性相关指标及MTHFR基因多态性分析

刘玲玲+唐智+肖林

[摘要]目的 分析MTHFR基因在高血压患者中的多态性，探讨H型高血压与同型半胱氨酸（Hcy）等代谢性生化指标的关系。方法 选取2013年7月～2016年6月我院收治的100例H型高血压患者和100例普通高血压患者为研究对象，检测两组的血浆同型半胱氨酸（Hcy）和血脂、血糖等生化指标，比较MTHFR基因多态性。结果 H型高血压组的Hcy、尿酸（UA）、肌酐（Cr）水平明显高于普通高血压组（t=14.989、6.672、4.832，P<0.05）；H型高血壓组的MTHFR 677C/T 基因型频率分布以T等位基因为主，普通高血压组以C等位基因频率分布为主（P<0.05）。结论 高Hcy、UA、Cr水平与H型高血压的发生密切相关，MTHFR基因677C/T纯合突变TT基因型可能是H型高血压的重要遗传因素。

[关键词]H型高血压；MTHFR；基因多态性；同型半胱氨酸

[中图分类号] R544.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）08（c）-0098-04

[Abstract]Objective To analyze the polymorphism of MTHFR gene in patients with hypertension，and to explore the relationship between H-type hypertension and metabolic biochemical indexes such as homocysteine （Hcy）.Methods 100 patients with H-type hypertension and 100 patients with general hypertension treated in our hospital from July 2013 to June 2016 were selected as study subjects.Plasma homocysteine （Hcy） and blood lipids，blood glucose and other biochemical indicators were detected in two groups，and the polymorphism of MTHFR gene was compared.Results Hcy，uric acid （UA），creatinine （Cr） level in the H-type hypertension group were significantly higher than those in the general hypertension group （t=14.989，6.672，4.832，P<0.05）.The frequency distribution of MTHFR 677C/T genotype frequency of the H-type hypertension group was mainly T allele，and the frequency distribution of C allele was dominant in the general hypertension group （P<0.05）.Conclusion The level of Hcy，UA and Cr are closely related to the occurrence of H-type hypertension.Homozygous mutant TT genotype of MTHFR gene 677C/T may be an important genetic factor of H-type hypertension.

[Key words]H-type hypertension；MTHFR；Gene polymorphism；Homocysteine

高血压是影响心脑血管疾病的病理基础，血浆同型半胱氨酸（homocysteine， Hcy）水平>10 μmol/L的原发性高血压即为H型高血压（H-type hypertension）[1]。H型高血压患者Hcy水平较普通高血压患者显著升高，而Hcy是动脉粥样硬化性心血管疾病强有力的预测因子[2]，且与脑卒中发生存在密切的关系[3]。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）可使同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，参与甲基化反应。本文重点探讨H型高血压患者代谢性相关指标及分析MTHFR基因多态性，以期为H型高血压的治疗及相关并发症的预防提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年7月～2016年6月经本院确诊的100例H型高血压患者和100例普通高血压患者为研究对象。入选标准：入选的病例组患者严格按照高血压病JNCⅦ诊断标准。H型高血压组患者：男68例，女32例，年龄40～72岁，平均（59.31±10.52）岁；普通型高血压组患者男64例，女36例，年龄43～75岁，平均（61.24±10.78）岁。本研究经医院伦理委员会批准。排除标准：①合并急慢性肾功能不全、心功能不全、妊娠或正口服避孕药或其他可能影响血压药物患者；②近1个月内服用维生素B6、叶酸、维生素B12等影响血浆Hcy水平的药物患者；③继发性高血压或者血压难以控制达标者。两组患者的性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 Hcy的检测 采集患者空腹静脉血3 ml，3000 r/min离心10 min（离心半径3 cm）后置于-80℃冰箱待检。Hcy检测采用循环酶法，试剂盒由台湾台塑生医科技股份有限公司提供，操作按照试剂盒说明进行。

1.2.2生化指标检测 采集所有患者空腹静脉血4 ml，高速离心后取血清，检测三酰甘油（TG）、总胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）、血糖（GLU）、尿酸（UA）及肌酐（Cr）含量。本研究采用奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪及原装配套试剂盒，检测方法：酶学比色法。endprint

1.2.3 MTHFR 基因多态性分析 MTHFR基因多态性检测采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法，提取样本基因DNA，采用PCR-RFLP法扩增MTHFR 677C/T基因片段，扩增片段及产物经限制性内切酶进行酶切后，使用2%琼脂糖凝胶电泳分离，紫外线凝胶成像仪判断基因型，观察不同类型高血压患者MTHFR基因多态性及677C/T基因片段分布。

1.3 统计学方法

数据采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，Hcy等生化指标用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验；MTHFR基因型频率采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组患者不同生化指标的比较

H型高血压组的Hcy、UA、Cr水平明显高于普通高血压组（P<0.05）；两组患者的TG、CHO、LDL、GLU水平比较差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2 Hardy-Weinberg平衡检验

使用 Hardy-weinberg 遗传平衡检验软件对两组人群3个位点的基因型分布进行平衡检验，结果显示普通高血压组符合 Hardy-weinberg 遗传平衡。样本代表性良好（表2）。

2.3 酶切反应结果

MTHFR C677T位点基因型 CC出现282 bp条带；CT为282、176、106 bp三个条带；TT为176、106 bp 两个条带（图1）。

2.4 测序结果

根据测序图的单峰、双峰来判断基因型，单峰为纯合基因型，双峰为杂合基因型。C677C和T677T均为单峰，C677T为双峰（图2）。

2.5两组患者MTHFR基因型频率及等位基因频率分布的比较

H型高血压组MTHFR 677C/T 基因型频率分布以T等位基因为主，普通高血压组以C等位基因频率分布为主，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）（表3）。

3 讨论

H型高血压是伴同型半胱氨酸升高的高血压，它包括高血压、高Hcy两种危险因素。已有研究证明，Hcy作为蛋氨酸代谢的中间产物，是动脉粥样硬化性心血管疾病强有力的预测因子[4]，1969年，哈佛病理学家Mcully教授首次提出Hcy可导致血管动脉粥样硬化。2004年，Stroke杂志上对Hcy血管损伤机制给予全面阐述：通过氧化应激反应，损伤内皮细胞；通过炎症因子破坏机体凝血和纤溶平衡，使机体处于血栓前状态通过信号转导通路，诱导血管平滑肌细胞的增殖等，從而加速血管内动脉粥样硬化的过程。因为Hcy在动脉粥样硬化的启动与发展中的显著地位，西方科学界把它称为“21世纪新的胆固醇”。已经有研究证实，血浆Hcy每升高5 μmol/L，脑卒中风险增高59%，因此，血浆Hcy水平对预测动脉粥样硬化性心血管疾病、脑卒中有重要意义[2-3]。关于心脑血管疾病的发生与Hcy的关系，总结可能的发病机制如下[5]：①Hcy对心脏、脑部血管内皮细胞具有一定的毒性作用，以及Hcy可导致血液中血小板的黏附性增加；②已有研究证明[6]，Hcy及其衍生物能使血小板聚集和凝血因子Ⅴ的活性受到影响，主要是Hcy及其衍生物会增加血小板凝血恶烷的产生；③Hcy可能影响血栓调节素的表达和蛋白C的活性，而表现为一种血栓剂。总之，大量的研究表明，高Hcy血症是心脑血管疾病发生的重要的独立的危险因素之一。由我国科学家自主研发的Ⅰ类新药依那普利叶酸片已证实具有良好的控制H型高血压的疗效，并对亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T TT基因型患者降压降Hcy效果更佳[7]；在以往的研究中，高血压的发生和血脂、血糖等代谢异常密切相关[8-11]。H型高血压是血浆Hcy水平>10 μmol/L的原发性高血压。本研究中，H型高血压组，中Hcy、UA、Cr水平明显高于普通高血压组，两组患者的TG、CHO、LDL、GLU水平比较差异无统计学意义，提示高血脂、高血糖是导致高血压发病的重要因素，而Hcy、UA、Cr与H型高血压的发生密切相关。

本研究中，H型高血压组MTHFR 677C/T基因型频率分布以T等位基因为主，普通高血压组以C等位基因频率分布为主。MTHFR 基因定位于染色体1q36.3，第C677T位点突变是目前已知的人类最常见且最重要的，其会影响酶的热敏感性，降低酶活性。血清MTHFR中C677T的突变可导致血浆中Hcy和亚甲基四氢叶酸浓度上升，降低甲基化水平[12-15]。

本研究结果表明，高Hcy、UA、Cr水平与H型高血压的发生密切相关，MTHFR基因677C/T纯合突变TT基因型可能是H型高血压的重要遗传因素，因此，临床对H型高血压患者需同时给予降血压和降血浆Hcy的药物治疗，可预防脑卒中的发生，改善患者预后。

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（收稿日期：2017-05-12 本文編辑：许俊琴）endprint