慢性丙型肝炎患者外周血中CD4＋T调节性细胞与抗病毒疗效的关系

王 平 刘晓晖 刘国辉

深圳市第三人民医院中西医结合科（广东 深圳，518000）

慢性丙型肝炎患者外周血中CD4＋T调节性细胞与抗病毒疗效的关系

王 平 刘晓晖 刘国辉

深圳市第三人民医院中西医结合科（广东 深圳，518000）

目的：探析慢性丙型病毒性肝炎患者（CHC）外周血中CD4＋调节性T细胞与抗病毒疗效之间的关系。方法：选择2014年5月－2016年3月期间我院收治的125例CHC患者为研究对象，再选择同期来我院体检的90例健康者为对照，分别采集患者治疗前后的外周血，运用流式细胞术对外周血中的CD4＋细胞百分比进行检测；同时检测肝功能指标和HCV-RNA，比较两组的检测结果。结果：治疗前与对照组相比，观察组患者的TBiL、ALT、AST以及HCV-RNA定量均较高，组间比较差异明显（P＜0.05）；同时，治疗前后观察组的CD4＋、TBiL、ALT、AST以及HCV-RNA定量比较有统计意义（P＜0.05）；但是PLT计数对比无差异（P＞0.05）。结论：临床上给予慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗，能够使肝脏损害减少，治愈率提高，并且外周血中CD4＋T细胞可以作为判断治疗效果和预后的一个重要指标。

CD4＋T细胞；抗病毒治疗；慢性丙型病毒性肝炎

慢性丙型病毒性肝炎（CHC）患者往往会出现持续、反复感染，如果治疗不及时，容易出现诸多并发症如原发性肝细胞癌、肝硬化等，甚至危及患者的生命［1，2］。当前临床上在对（对照组）CHC治疗时，抗病毒是常用的一种方法，我们根据慢性丙型病毒性肝炎治疗指南，选取1b型CHC患者给予干扰素联合刘巴韦林抗病毒治疗48周，其疗效评价与T细胞反应有关［3］。因此，本文对外周血CD4＋调节性T细胞细胞进行了检测，探讨其对CHC患者抗病毒疗效预估的临床价值，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选择我院2014年5月－2016年3月期间收治的（CHC）患者125例为研究对象（观察组），再选择同时期健康者90例作为对照组（对照组）。对照组中50例为男性、40例为女性，年龄24～74岁，平均（48.5±15.6）岁；观察组年龄22～73岁，平均（48.3±15.5）岁，其中52例为女性、73例为男性。纳入标准：①符合CHC诊断标准，且经实验室检查结果确诊；②没有其他严重并发症、合并症或者内分泌性疾病，且没有服用过容易损害肝脏的药物；③6个月内没有进行过免疫治疗，且未服用抗病毒药物；④经医院伦理委员会批准；⑤患者及家属知情，且签署同意书。排除标准：①合并内分泌性疾病或者重要器官衰竭性疾病者；②感染其他肝炎病毒者；③合并肝脏毒性药物使用史、嗜酒史以及自身免疫病史者；④近期接受免疫治疗或者抗病毒治疗者。两组患者在性别、年龄方面对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 所有研究患者均于入组前清晨采血，每人采静脉血2ml送检。

1.2.2 检测CD4＋百分比 采集100μl外周血，在室内温度下放置30min，以2500r/min转速进行10min离心处理后，将杂质去除，调配成106外周血单个核细胞（PBMC）溶液，然后将0.5ml红细胞裂解液加入，均匀混合后，进行1次洗涤，标记后在4°C环境下放置30min，经固定，破膜后，运用PE抗人Foxp3试剂进行25min孵育后，选择美国贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪进行检测。

1.2.3 检测HCV RNA 运用荧光定量聚合酶链反应进行检测，均匀混合核酸提取液250μl与血清标本100μl，在室内温度下放置10min后，将三氯甲烷80μl加入，进行20s震荡，再次放置在室温下，掌握好时间，一般为8min，以2500r/min转速进行10min离心处理后，将杂质去除，将400μl预冷的乙醇加入进行1次洗涤，再进行10min离心处理，将杂质去除，选择美国PE公司的5700型DNA扩增仪进行检测。

1.2.4 检测肝功能指标 选择西门子生化仪（ADVIA2400），严格按照说明书要求，对总胆红素（TBiL）、谷草转氨酶（AST）以及谷丙转氨酶（ALT）进行检测。

1.3 观察指标 分别观察两组的各项检测指标，包括CD4＋T细胞百分比、TBiL、ALT、AST以及HCV RNA定量等，并且记录观察组治疗前后的CD4＋、PLT计数、TBIL、ALT、AST以及HCV RNA定量等。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22统计学软件分析数据，其中计量资料采用均数±标准差（±s）表示，运用t检验进行组间AST、ALT以及TBiL比较，以P＜0.05为差异明显。

2 结果

2.1 两组人员治疗前各项临床指标见表1。

表1 两组人员治疗前临床各项指标对比 （±s）

表1 两组人员治疗前临床各项指标对比 （±s）

CD4＋（%） TBiL（mmol/L）ALT（U/L）AST（U/L）HCV RNA定量（logIu/ml ）对照组（n＝90）3.98± 1.05 12.72± 5.4 25.1± 15.3 22.1± 14.50观察组（n＝125）4.6± 2.31 t值 5.093 6.092 9.731 5.996 8.724 P值12.57± 3.77 14.35± 3.48 118.9± 50.23 67.5± 30.41＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.2 观察组患者治疗前后及随访24周时各项指标检测结果见表2。

观察组治疗前后及24周随访时的HCV RNA定量、CD4＋T细胞百分比TBiL、ALT以及AST等比较，差异有显著性意义（P＜0.05）；但是PLT计数无统计学意义（P＞0.05）。

表2 观察组治疗前后及随访24周时各项指标比较 （±s）

表2 观察组治疗前后及随访24周时各项指标比较 （±s）

与治疗前比较，*P＜0.05.

不同时段CD4＋（%）PTL计数（×109）TBIL（mmol/L）ALT（U/L）AST（U/L）HCV-RNA定量logIu/ml治疗前12.57± 3.772.31治疗结束时157.00± 88.00 14.35± 3.48 118.89± 50.23 67.50± 30.44 4.60± 0.76± 1.55随访24周8.98±*2.71 55.00± 76.00 13.02± 3.01 104.00± 30.25 43.45± 18.79 3.45±*2.44 162.00± 74.00 12.07±*1.14 28.56±*15.46 11.31± 12.09*0.11± 0.05*

3 讨论

有研究发现，患者感染HCV后，其免疫学检测结果和临床症状存在着一定的差别，其原因与HCV自身特性、细胞免疫应答、白细胞抗原（HLA）等诸多因素有关［4、5］。CHC患者因为自身HLA-1限制，对HCV各类抗原表位的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答弱，甚至不能应答，无法清除体内HCV病毒，在一定程度上增加了临床治疗难度［6，7］。

有报道显示，在CTL免疫应答中，CD4＋T细胞作为比较重要的一个调控细胞，与HCV的发生和发展有着密不可分的联系，并且T细胞作为比较重要的人体免疫细胞，其免疫无能性和免疫抑制性均较强，其在IL-2浓度不高的情况下不能产生反应，但是在IL-2高浓度情况下，容易经TCR增殖或者激活，对患者体内CD4＋T细胞中的IL-2转录和表达进行抑制，对IL-2活化和增殖产生干扰，并且还能对CD8＋T细胞产生直接作用，对其杀伤效用进行有效抑制［8，9］。

临床研究资料表明，相比较正常健康人群而言，CHC患者外周血内的CD4＋T细胞含量明显升高，如果将外周血内的CD4＋T细胞去除，能够增强HCV特异性反应，并且CHC患者外周血内的T细胞含量与疾病严重程度呈正比关系，对T细胞进行分离后，发现T细胞具有诱导HCV形成抗原特异性的能力，能够对HCV感染的慢性化发展产生直接作用［10，11］。

本次研究结果，提示抗病毒治疗可以使CHC患者的伤害减轻，治愈率提高，避免加重肝脏损害［12］。有学者在研究中发现，与无应答患者相比，有应答患者的CD4＋T细胞、ALT、AST以及HCV RNA定量均较低，说明CHC患者的体内HCV RNA处于不断复制过程，对CD4＋T细胞的活化和增殖起到积极的诱导作用，升高患者体内的CD4＋T细胞百分比，使患者机体免疫不能将HCV病毒清除，从而导致HCV慢性转化［13，14］。

此外，抗病毒治疗在一定程度上能够对CD4＋T细胞百分比进行抑制，使机体肝功能和免疫清除得到明显改善，减轻患者的临床症状，从而达到治疗目的［15］。需要注意的是，因为患者存在个体差异性，在抗病毒治疗中，其CD4＋T细胞百分比下降程度也存在着一定的差别，并且停药后患者CD4＋T细胞恢复上升和维持水平也不同，所以应该根据患者实际情况，制定个性化治疗方案，有效预防复发［16］。

综上所述，在CHC患者的临床诊断和治疗中，外周血中的CD4＋T细胞能够作为判断疾病和疗效的重要指标之一，并且根据患者病情，及时进行抗病毒治疗，可以减少肝脏损害，提高治愈率，改善预后，值得推广。

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The relationship between regulatory T cells in peripheral blood CD4＋and antiviral therapy in patients w ith chronic hepatitis C

WANG Ping，LIU Xiao-hui，LIU Guo－hui.Departmentof Integrated traditional and westernmedicine，The third people hospitial of Shenzhen（Shenzhen Guangdong，518000）China

Objective：To discuss The relationship between regulatory T cells in peripheral blood CD4＋and antiviral therapy in patients with chronic hepatitis C.M ethods：125 cases of chronic hepatitis C patients were admitted to our hospital as the research object from May 2014 to March 2016，and then 90 cases ofhealthy peoplewere selected at the same time as the control group.the peripheral blood of patients before and after treatmentwere collected and the percentage of CD4＋cell in peripheral blood cells was detected.At the same time，liver function and HCV-RNA also were detected and compared between the two groups.Results：Compared with control group，the quantitative of TBIL，ALT，AST and HCV-RNA were significanthigher in observation group（P＜0.05）；At the same time，the quantitative of CD4＋，TBIL，ALT，AST and HCV-RNA had statistical significance before and after treatment in observation group（P＜0.05）；but therewas no difference in PLT（P＞0.05）.Conclusion：When Patients with chronic hepatitis C were given antiviral treatment，it would reduce liver damage，improve the cure rate.and CD4＋cells in peripheral blood could be used as an important index to judge the curative effect and prognosis.

peripheral blood；antiviral；chronic hepatitis C

2016－12－08 编辑：陈盛铎）

10.3969/j.issn.1005-0264.2017.03.007