肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响研究*

钟军华，袁勇，宋飞飞，杨世忠，林丹

（海南医学院第一附属医院，海南 海口 570102）

肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响研究*

钟军华，袁勇，宋飞飞，杨世忠，林丹

（海南医学院第一附属医院，海南 海口 570102）

目的探究肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响。方法48只雄性清洁级SD大鼠随机分为：正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组及肝纤溶颗粒组，每组各12只。除正常对照组外各组复制肝纤维化模型。于复制模型后的3周各组大鼠同时给药，正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1.5 ml/kg灌胃，1次/d；复方鳖甲软肝片组给予33.3%复方鳖甲软肝片溶液1.5 ml/kg重灌胃，1次/d；肝纤溶颗粒组给予33.3%肝纤溶颗粒溶液1.5 ml/kg灌胃，1次/d。各组连续用药6周。实验开始后第3、6和9周对各组大鼠肝脏病理学、细胞凋亡数量、肝纤维化指标水平以及内质网应激相关指标进行检测。结果与其他各组相比，肝纤溶颗粒组纤维增生程度评分下降（P＜0.05），肝凋亡数下降（P＜0.05）；透明质酸、层黏连蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原水平下降（P＜0.05）；CHOP、ATF6蛋白表达水平下降（P＜0.05）。结论肝纤溶颗粒组肝纤维化大鼠细胞凋亡数量和肝纤维化水平较复方鳖甲软肝片组下降，差异有统计学意义（P＜0.05），肝纤溶颗粒能够改善肝脏病理变化，调节内质网应激相关指标，对临床有指导意义。

肝纤溶颗粒；复方鳖甲软肝片；大鼠肝纤维化模型；细胞凋亡；内质网应激相关因子

各种慢性肝病，包括病毒性肝炎、酒精性肝病以及非酒精性脂肪肝等肝脏疾病有相当一部分会转化为肝硬化，从而引起肝癌，甚至死亡，其中肝纤维化是关键的一个步骤，而早期肝纤维化是一种可逆性病变[1]，因此临床研究以如何阻断纤维化的进展为预防肝硬化及肝癌的重要课题之一。肝纤维化是由于肝内胶原沉积增多，肝脏结构受损导致患者出现消化功能障碍、糖代谢异常、凝血功能紊乱与肝缺血再灌注损伤[2]。西药治疗肝纤维化的研发仍处于临床研究阶段，并无高效、无明显毒副作用的药物。祖国医学大量的临床研究资料为肝纤维化提供了基础治疗契机，在改善临床症状等诸多方面存在较大潜力。肝纤溶颗粒是一种由鳖甲、黄芪、三七、紫河车、丹参制成的中药复方[3]，临床应用具有活血化瘀、益气软坚的疗效。曾有研究显示，肝纤溶颗粒能够减轻炎症反应[4]，缓解肝细胞变性坏死，对急慢性肝炎及肝纤维化有良好的预防和治疗作用。但现今对本品靶点及其分子机制尚未进行深入研究。本研究采用复制动物模型及中药干预的方法，深入探讨肝纤溶颗粒对肝纤维化的药效机制和复方有效成分的作用机制是否与内质网应激途径相关，为临床防治肝纤维化提供新的防治策略和有效方法提供新的实验依据和方法论的指导。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

复方鳖甲软肝片，0.5 g/片（批号：20130511，内蒙古福瑞医疗科技股份有限公司），肝纤溶颗粒（鳖甲、黄芪、三七、紫河车、丹参组成，长春中医药大学附属医院制剂室提供），四氯化碳（上海子起生物科技有限公司），甲醛（上海嵘崴达实业有限公司）。

恒温液压动物手术台（上海玉研科学仪器有限公司），石蜡包埋机（湖北泰康医疗设备有限公司），LVEM5台式透射电子显微镜（Quantum量子科学仪器贸易北京有限公司），Stratos台式离心机（赛默飞世尔科技），全自动生化分析仪（江苏省医药动物实验基地），放射性检测仪（北京东方德教育科技有限公司北科研发中心），WD-9413B型凝胶成像分析系统（上海巴玖实业有限公司）。

大鼠透明质酸（HA）ELISA kit（上海古朵生物科技有限公司），层黏连蛋白（LN）Elisa kit（南京赛泓瑞生物科技有限公司），大鼠Ⅲ型前胶原（PCⅢ）ELISA试剂盒（上海江莱生物科技有限公司），大鼠Ⅳ型胶原（ColⅣ）ELISA试剂盒（上海金穗生物科技有限公司），细胞凋亡-原位缺口末端标记法（TUNEL）（北京永欣康泰科技发展有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 实验动物与分组 采用健康清洁级雄性SD大鼠 48只，鼠龄为 7周龄，体重为（200±20）g，购买于南京君科生物工程有限公司，许可证号：RAWMX-90011。随机分为正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组及肝纤溶颗粒组，每组各12只。分笼饲养，确保正常饮食和饮水。大鼠适应性喂养1周适应环境，动物自由进食、水，实验室温度维持在25℃。

1.2.2 肝纤维化模型复制[5]除正常对照组外，其余3组健康清洁级雄性SD大鼠进行模型复制。给予40%CCL4色拉油溶液皮下注射给药，首次剂量为0.5 ml/kg，以后剂量按照0.3 ml/kg注射，3次/周，连续用药6周。

1.2.3 药品制备及应用 用研钵将复方鳖甲软肝片研磨成粉末状，将其与无菌蒸馏水混合调制为浓度为33.3%的复方鳌甲软肝片溶液；将肝纤溶颗粒与无菌蒸馏水混合调制为浓度为33.3%的肝纤溶颗粒溶液。于复制模型后的3周各组大鼠同时给药，正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1.5 ml/kg灌胃，1次/d；复方鳖甲软肝片组给予33.3%复方鳖甲软肝片溶液1.5 ml/kg重灌胃，1次/d；肝纤溶颗粒组给予33.3%肝纤溶颗粒溶液1.5 ml/kg灌胃，1次/d。各组连续用药6周。

1.3 观察指标

于实验开始后第3、6、9周最后一次给药2 h后，每组随机选取4只进行相关实验观察。

1.3.1 肝脏病理学检测 大鼠股动脉放血处死，取肝左叶，切分为3 mm×1 mm×1 mm大小，用10%甲醛溶液固定，石腊包埋切片，进行HE染色，光镜下观察炎症反应及纤维组织增生等病理变化情况。将纤维增生程度分为0～4级，0级无纤维化；1级为纤维结缔组织仅局限于汇管区或存在汇管区扩大的区域，出现向小叶发展的倾向；2级为纤维结缔组织增生侵入肝小叶2/3和1级有相同的变化；3级为纤维结缔组织增生侵入小叶甚至到达中央静脉周围；4级为纤维结缔组织蔓延整个小叶，并存在多处弥漫性增生，形成假小叶，与3级有相同的变化。分别为0、1、2、3、4 分。

1.3.2 细胞凋亡的检测 采用TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标（TUNEL）法检测各组大鼠肝细胞凋亡情况，分别记录每个高倍视野内的肝凋亡细胞数量，取平均值。

1.3.3 肝纤维化指标 取大鼠腹主动脉血，分离血清，采用放射性免疫分析法检测血清透明质酸（hyaluronic acid，HA）、层黏连蛋白（laminin，LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）以及Ⅳ型胶原（CⅣ）水平。

1.3.4 内质网应激相关指标的检测 鼠肝中叶取材，行ATF6和CHOP免疫组织化学显色。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量数据以均数±标准差（±s）表示，同一时间点不同组间首先进行方差分析，利用LSD-t检验进行组间比较；使用配对t检验对不同时间点内同一组之间差异进行分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 纤维增生程度评分比较

在相同用药时间内4组之间差异具有统计学意义（P ＜0.05），复方鳖甲软片组（t=-3.629，P=0.011）、肝纤溶颗粒对照组（t=-6.382，P=0.001）的纤维增生程度评分低于模型组，并且肝纤溶颗粒组低于复方鳖甲软片组（t=-3.416，P=0.014），差异具有统计学意义。复方鳖甲软片组（F=8.134，P=0.020）、肝纤溶颗粒组（F=26.148，P=0.001）的纤维增生程度评分用药后3～9周呈下降趋势，差异具有统计学意义；与复方鳖甲软片组比较，肝纤溶颗粒组的纤维增生程度评分下降，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 肝凋亡数的表达值比较

肝纤溶颗粒组在肝凋亡数上低于复方鳖甲软片组，在相同用药时间内，复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组之间差异无统计学意义（P=0.189），但它们与模型对照组（P=0.000）和正常对照组（P=0.000）之间差异均具有统计学意义。复方鳖甲软片组（F=1.282，P=0.344）、肝纤溶颗粒组（F=4.021，P=0.078）的肝凋亡数用药后3～9周呈下降趋势，但差异不具有统计学意义；与复方鳖甲软片组比较，肝纤溶颗粒组的肝凋亡数除在第3周无统计学意义外（t=1.703，P=0.078），在6和9周均有统计学意义（t=2.496和3.992，P=0.047 和 0.007），见表 2 和图 1。

2.3 肝纤维化指标含量比较

复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组在大鼠血清HA含量上低于模型对照组，方差分析显示这两组与模型对照组在不同给药时间内差异均有统计学意义。配对t检验结果显示它们与正常对照组以及彼此之间比较差异均无统计学意义（复方鳖甲软片组vs正常对照组，P=0.054；肝纤溶颗粒组vs正常对照组，P=0.727；复方鳖甲软片组vs肝纤溶颗粒组，P=0.263）。方差分析显示复方鳖甲软片组（F=8.268，P=0.019）和肝纤溶颗粒组（F=6.572，P=0.031）的大鼠HA含量在用药后3～9周呈下降趋势，差异具有统计学意义。见表3。

表1 各组大鼠纤维增生程度评分比较 （n=4，分，±s）

表1 各组大鼠纤维增生程度评分比较 （n=4，分，±s）

注：1）与模型对照组比较，P ＜0.05；2）与复方鳖甲软片组比较，P ＜0.05

9周正常对照组 1.20±0.13 1.34±0.14 1.19±0.18 - -模型对照组 28.02±3.19 28.02±3.19 28.02±3.19 - -复方鳖甲软片组 21.05±2.141） 16.93±2.001） 14.28±1.541） 8.134 0.020肝纤溶颗粒组 16.14±1.921）2） 10.08±1.021）2） 8.38±1.001）2） 26.148 0.001 F值 97.736 99.961 114.301 P值 0.000 0.000 0.000组别3周6周F值P值

表2 各组大鼠肝凋亡数的表达值比较 （n=4，±s）

表2 各组大鼠肝凋亡数的表达值比较 （n=4，±s）

注：1）与模型对照组比较，P ＜0.05；2）与复方鳖甲软片组比较，P ＜0.05

9周正常对照组 1.37±0.16 1.33±0.16 1.35±0.15 - -模型对照组 7.08±0.70 7.14±0.76 7.11±0.74 - -复方鳖甲软片组 4.10±0.441） 3.74±0.431） 3.56±0.391） 1.282 0.344肝纤溶颗粒组 3.52±0.521） 3.04±0.361） 2.59±0.291）2） 4.021 0.078 F值 67.956 77.747 91.248 P值 0.000 0.000 0.000组别3周6周F值P值

图1 各组大鼠肝细胞凋亡情况 （×200）

复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组的大鼠血清LN含量随给药时间增加而略微增加并且它们的含量均低于模型对照组。方差分析显示在给药3和6周这两组与模型对照组中大鼠血清LN含量对比差异均无统计学意义（P=0.086和0.172），而在给药9周后大鼠血清LN含量与模型对照组比较，差异有统计学意义（P=0.000）。方差分析结果表明复方鳖甲软片组中大鼠血清LN含量随给药时间增加但差异无统计学意义（F=0.077，P=0.927），肝纤溶颗粒组LN含量变化差异无统计学意义（F=0.014，P=0.986）。见表4。

复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组大鼠血清PCⅢ含量在各给药时间中均低于模型组，不同培养时间下，组内之间差异无统计学意义，并且各组随时间增加大鼠血清PCⅢ含量差异无统计学意义（F=0.354和 0.417，P=0.716和 0.677）。详见表 5。

表3 各组大鼠血清H A含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

表3 各组大鼠血清H A含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

注：†与模型对照组比较，P＜0.05

9周正常对照组 314.86±41.26 245.63±30.82 325.46±33.48 - -模型对照组 369.83±41.29 415.38±42.77 480.93±50.92 - -组别3周6周F值P值复方鳖甲软片组肝纤溶颗粒组257.39±34.78†235.09±27.83†316.39±34.76†271.34±24.02†377.92±39.19†319.80±33.50†8.268 6.572 0.019 0.031 F值 8.158 14.692 10.500 P值 0.008 0.001 0.004

表4 各组大鼠血清LN含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

表4 各组大鼠血清LN含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

注：†与模型对照组比较，P＜0.05

9周正常对照组 25.29±3.49 23.29±3.09 25.28±2.97 - -模型对照组 33.29±3.45 32.87±3.52 43.28±4.87 - -复方鳖甲软片组 28.19±2.90† 28.94±3.10 29.11±3.181） 0.077 0.927肝纤溶颗粒组 26.17±2.89† 25.83±3.10† 26.19±2.971） 0.014 0.986 F值 3.770 4.977 16.337 P值 0.059 0.031 0.001组别3周6周F值P值

表5 各组大鼠血清PC I I I含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

表5 各组大鼠血清PC I I I含量变化比较 （n=4，μg/L，±s）

9周正常对照组 37.29±4.02 37.29±4.15 39.29±4.07 - -模型对照组 43.29±4.63 43.29±4.59 43.29±5.19 - -复方鳖甲软片组 41.20±4.59 38.29±4.01 40.38±4.49 0.354 0.716肝纤溶颗粒组 38.19±4.18 39.01±4.11 41.19±4.19 0.417 0.677 F值 1.202 1.176 0.423 P值 0.369 0.378 0.742组别3周6周F值P值

复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组大鼠血清CⅣ在不同给药时间下均低于模型对照组，方差分析显示培养第3周复方鳖甲软片组与模型组比较差异无统计学意义（P=0.100），但肝纤溶颗粒组与模型对照组比较差异有统计学意义（P=0.0018）。培养6～9周后这两组与模型组比较差异均具有统计学意义（6周：复方鳖甲软片组vs模型对照组，P=0.019；肝纤溶颗粒组vs模型对照组，P=0.0019；9周：复方鳖甲软片组vs模型对照组，P=0.0055；肝纤溶颗粒组vs模型对照组，P=0.0006）。复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组比较在各时间段内差异均有统计学意义（复方鳖甲软片组vs肝纤溶颗粒组：P3周=0.0066；P6周=0.027；P9周=0.034）。复方鳖甲软片组和肝纤溶颗粒组大鼠血清CⅣ含量随着给药时间增加而呈现下降趋势（复方鳖甲软片组F=2.189，P=0.193；肝纤溶颗粒组F=0.813，P=0.487），差异无统计学意义，见表6。

2.4 内质网应激相关指标比较

复方鳖甲软片组、肝纤溶颗粒组的CHOP、ATF6蛋白表达水平在各给药时间内均低于模型对照组，各培养时间下组内差异有统计学意义（F=126.545、124.792 和 142.968，均 P=0.000）。用药后3～9周这2种蛋白呈下降趋势，差异具有统计学意义（CHOP：复方鳖甲软片组P=0.046；肝纤溶颗粒组P=0.036；ATF6：复方鳖甲软片组P=0.000；肝纤溶颗粒组P=0.001）；与复方鳖甲软片组比较，肝纤溶颗粒组的CHOP、ATF6蛋白表达下降，差异具有统计学意义（CHOP：复方鳖甲软片组P=0.000，肝纤溶颗粒组P=0.000；ATF6：复方鳖甲软片组P=0.000；肝纤溶颗粒组P=0.000），见表7和图2、3。

表6 各组大鼠血清C I V含量变化比较 （n=4，u/L，±s）

表6 各组大鼠血清C I V含量变化比较 （n=4，u/L，±s）

注：1）与模型对照组比较，P ＜0.05；2）与复方鳖甲软片组比较，P ＜0.05

9周正常对照组 5.02±3.49 5.12±3.09 5.06±0.57 - -模型对照组 11.43±1.37 12.09±1.72 12.08±1.57 - -复方鳖甲软片组 9.79±0.99 8.94±1.001） 8.11±0.961） 2.189 0.193肝纤溶颗粒组 7.23±0.781）2） 7.10±0.781）2） 6.50±0.681） 0.813 0.487 F值 6.111 7.46 26.390 P值 0.018 0.11 0.000组别3周6周F值P值

表7 各组大鼠肝脏C H O P和ATF6蛋白表达比较 （n=4，±s）

表7 各组大鼠肝脏C H O P和ATF6蛋白表达比较 （n=4，±s）

注：1）与模型对照组比较，P ＜0.05；2）与复方鳖甲软片组比较，P ＜0.05

组别CHOP 6周2.54±0.27 2.57±0.28模型对照组 56.39±6.02 59.02±6.76复方鳖甲软片组 28.11±3.791） 23.74±3.431）肝纤溶颗粒组 12.17±1.361）2） 11.07±1.361）2）F值 126.545 124.792 P值 0.000 0.000 3周正常对照组ATF6 9周2.69±0.28 3.10±0.37 3.19±0.37 3.35±0.39 58.14±6.73 77.29±12.39 78.29±11.58 75.39±7.64 19.39±2.391） 36.02±3.931） 31.29±3.611） 25.38±2.671）8.68±1.021）2） 23.49±2.591）2） 15.49±1.631）2） 13.29±2.441）2)142.968 66.884 86.601 171.463 0.000 0.000 0.000 0.000 9周3周6周

图2 各组大鼠肝脏C H O P蛋白表达 （免疫组织化学×200）

图3 各组大鼠肝脏ATF6蛋白表达 （免疫组织化学×200）

3 讨论

肝纤维化是由于多种慢性肝病向肝硬化发展的病理过程，患有本病的患者细胞外基质分泌量增高，降解失衡，于肝脏内过度堆积，血清转氨酶升高代谢异常，白蛋白合成障碍，肝细胞受损，肝脏严重受累，最终导致肝硬化及肝癌的发生[6]。我国针对肝纤维化的非创伤性以及抗肝纤维化药物的临床治疗取得了长期有效的进展，研究证明肝纤溶颗粒对肝纤维化有良好的缓解作用，能够改善平滑肌痉挛，促进微循环，调整肝血液流量，抑制自由基作用效果。研究显示，中药抗肝纤维化的作用机制具有多方面、多层次、复合性的作用[7]。肝纤溶颗粒的药物组成中丹参具有活血凉血、祛瘀止痛的作用，有研究显示，丹参明显降低血清Ⅲ胶原蛋白的表达，抑制细胞合成以及抗氧化的作用[8]。黄芪具有补气健脾、利水的功效，研究人员通过对肝纤维化大鼠进行研究发现，黄芪能够改善肝纤维化程度。三七能够止血定痛、活血化瘀，研究显示[9]，三七具有改善微循环，抗过氧化作用，抑制肝纤维化的发生。曾有研究显示，肝纤溶颗粒治疗瘀血阻络型肝纤维化疗效明确[10]。鳖甲具有滋阴潜阳，退热除蒸，软坚散结之功效，研究显示，复方鳖甲片能够通过降低血清中透明质酸、层黏蛋白水平，提高尿中羟脯氨酸，从而起到抗纤维化的作用[11]。本研究就肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片进行对比，探究两者治疗肝纤维化的疗效以及药效机制。在此类研究中动物实验至关重要，SD大鼠由于生长快，繁育性能好，其抗病能力强，自发肿瘤率低，对性激素感受性高的特性，非常适合本实验。

细胞凋亡在人类疾病的发病、机体发育以及组织稳定中起关键作用，属于机体内不必须或被损坏的细胞，能够对抗外来病原体以及缺陷细胞，进而防御机体受损。肝脏的生理活动和细胞凋亡具有相关性，可能通过基因抑制、激活或突变等多途径发挥作用。肝细胞凋亡是正常的生理过程，是细胞更新、增殖和再生的重要机制，诱导细胞凋亡的因素包括射线、高温、毒素药物以及缺血缺氧等物理因素，机体正常的细胞凋亡能够抗感染肿瘤、预防肝细胞自身免疫反应，从而保护正常细胞，机体正常分泌的肝细胞凋亡抑制因子能够预防过度凋亡诱发的肝衰竭。肝细胞凋亡不仅发生于肝发育以及成人肝细胞更新，同时是诱发肝脏损伤以及肝脏疾病的关键环节。现代研究显示，肝纤维化、病毒性肝炎以及自身免疫性肝炎等肝脏疾病均出现大量肝细胞凋亡，严重影响患者肝脏功能，诱发病情的恶化[12]。本研究显示，与鳖甲软片组相比，肝纤溶颗粒组的纤维增生程度评分下降，证实肝纤溶颗粒降低肝纤维化大鼠细胞凋亡数量较复方鳖甲软肝片显著，能缓解肝脏的损伤。

诊断肝纤维化需要进行肝纤4项检查，因此肝纤4项是诊断肝纤维化发展的首选指标，具有衡量炎症活动以及纤维化程度的作用。血清PCⅢ水平与肝纤维化病变程度紧密相关，在患病早期即升高，对慢性肝炎肝纤维化的早期诊断以及预后有临床诊断价值[13]。CⅣ参与基底膜的构成，当患者出现肝纤维化时，肝细胞发生变性坏死，巨噬细胞活跃，基地胶原的更新率升高，促使CⅣ水平升高，反映肝纤维化过程敏感性较高[14]。LN是一种参与肝纤维活动的基底膜特有非胶原性结构蛋白，可有效反映纤维进展，随着肝纤维化转化为肝硬化患者食管静脉曲张加重，LN水平增高[15]。HA是一种由间质细胞合成的反应肝内纤维量以及肝组织受损程度的肝纤维化以及肝硬变敏感指标，随着肝纤维化不断加剧，HA水平随之增高，肝硬化时达到高峰。本研究显示，与鳖甲软片组相比，肝纤溶颗粒组的透明质酸、LN、血清PCⅢ、血清CⅣ较低，证实肝纤溶颗粒降低肝纤4项水平较复方鳖甲软肝片显著，减少肝内胶原，抑制纤维以及成纤维细胞的增殖分裂，促进肝脏细胞修复，从而抗肝纤维化。

内质网（endoplasmic reticulum，ER）源自于真核细胞，为蛋白质合成、折叠和运输以及细胞内钙离子储存、钙离子信号传导、类固醇、胆固醇及其他脂类合成等反应提供主要场所，能够调节细胞应激反应、蛋白质和脂类合成。现代研究显示，酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、胆汁淤积、乙型和丙型肝炎病毒等疾病的发病机制与内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）诱发的损伤具有相关性[16]。ERS 的发生主要由于ER出现功能障碍，患者出现钙离子稳态失衡，阻碍蛋白质N-相关的糖基化作用，突变蛋白表达，和其他不同类型的细胞应激引起内质网腔错误折叠蛋白质的积聚。曾有研究显示[17]，内质网应激时CHOP与碱基重复序列相结合，加速TRB3的表达，与相关凋亡具有相关性。TRB3对CHOP具有抑制作用，能够起负反馈作用。有研究显示，大鼠肝纤维化过程中内质网应激相关分子CHOP以及ATF6的表达水平升高，参与肝纤维化的发生发展。本研究显示，与鳖甲软片组相比，肝纤溶颗粒组的CHOP、ATF6蛋白表达下降，证实肝纤溶颗粒降低内质网应激相关指标较复方鳖甲软肝片显著，起抗氧化作用，抑制肝纤维化的发生发展。

因此，可认为肝纤溶颗粒降低肝纤维化大鼠细胞凋亡数量、肝纤维化水平，较复方鳖甲软肝片显著，能够改善肝脏病理变化，调节内质网应激相关指标，对临床有指导意义。在下一步研究中，将对本实验得出的结论进行更加深入的探讨，为本实验的结果做出进一步论证。

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（张蕾 编辑）

Effect of Hepatic Fibrinolysis Granules combined with Fufang Biejia Ruangan Tablets on apoptosis and endoplasmic reticulum related factor expressions in rat hepatic fibrosis model*

Jun-hua Zhong,Yong Yuan,Fei-fei Song,Shi-zhong Yang,Dan Lin
(Department od Traditional Chinese Medicine,the Affiliated Hospital of Hainan Medical College,Haikou,Hainan 570102,China)

ObjectiveTo investigate the effects of Hepatic Fibrinolysis Granules combined with Fufang Biejia Ruangan Tablets on cell apoptosis and endoplasmic reticulum(ER)related factor expressions in rat hepatic fibrosis model.MethodsA total of 48 male SD rats of clean grade were randomly divided into normal control group,model control group,Biejia Ruangan Tablets group and Hepatic Fibrinolysis Granules group with 12 rats in each group.The hepatic fibrosis models were copied in all the groups except the normal control group.After the model was made for 3 weeks,the rats were given medicines at the same time.In the normal control group and the model control group the rats were given intragastric administration of 1.5 ml/kg normal saline,once a day.In the Fufang Biejia Ruangan Tablets group the rats were given 33.3%Fufang Biejia Ruangan Tablets solution 1.5 ml/kg for gavage,once a day.In the Hepatic Fibrinolysis Granules group the rats were given 33.3%Hepatic Fibrinolysis solution 1.5 ml/kg for gavage,once a day.The medication continued for 6 weeks.In the 3rd,6th and 9th week of the experiment,the liver pathology was observed,the number of apoptosis cells and the levels of hepatic fibrosis indexes and ER-related indexes were detected in all the groups.ResultsCompared with other groups,the fibrosis grade score significantly decreased(P＜0.05);the number of apoptotic hepatocytes was significantly reduced(P＜0.05);the levels of hyaluronic acid,laminin,serum type III procollagen and type IV collagen were decreased significantly(P＜0.05);CHOP and ATF6 expression levels also decreased significantly(P＜0.05)in the Hepatic Fibrinolysis Granules group.ConclusionsHepatic Fibrinolysis Granules decrease the number of apoptosis cells and hepatic fibrosis level in rats with hepatic fibrosis.They are better than Biejia Ruangan Tablets in improvement of the pathological changes of liver and adjustment of endoplasmic reticulum related indicators,therefore have clinical significance.

Hepatic Fibrinolysis Granules;Biejia Ruangan Tablets;rat model of hepatic fibrosis;cell apoptosis;endoplasmic reticulum related factor

R-332

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.002

1005-8982（2017）13-0006-08

2016-12-15

海南省卫计委科学课题（琼卫2011-54）