龙眼肉理化指标与两类贮藏库温度积的动态分析❋

吴 翠，马玉翠，巢志茂(中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

【方药研究】

龙眼肉理化指标与两类贮藏库温度积的动态分析❋

吴 翠，马玉翠，巢志茂△
(中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

目的: 探究简易库与冷藏库中龙眼肉理化指标的变化及其与温度积的相关性。方法: 日光下观察龙眼肉的外观，烘干法测定水分，高效液相色谱(HPLC)法测定5-羟甲基糠醛(5-HMF)的含量。采用温度积分析其对5-HMF含量的影响。结果: 简易库的温度积呈缓急交替上升趋势，冷藏库的温度积直线上升。简易库中的龙眼肉从3个月开始析出糖分并质地变硬，冷藏库中的龙眼肉出现轻度的黏软现象，两库中龙眼肉的水分含量呈下降趋势。龙眼肉在0月时5-HMF的含量为0.001031 mg·g-1，在之后的27个月内，5-HMF含量均逐渐升高，且简易库中的含量值是冷藏库对应值的2.7～4.6倍。结论: 龙眼肉中5-HMF含量的升高与贮藏库的温度积变化趋势具有一致性，首次提出温度积的概念，用于分析中药在贮藏环节中化学成分的变化规律。

龙眼；5-羟甲基糠醛；龙眼肉；贮藏；温度积

龙眼肉为无患子科植物龙眼DimocarpuslonganLour.的假种皮，具有补益心脾、养血安神的功效，用于气血不足、心悸怔忡、健忘失眠、血虚萎黄等症[1]。现代药理学研究表明，龙眼肉具有抗肿瘤[2]、抗焦虑[3]、免疫调节[4]、抗自由基[5]等药理活性。龙眼肉的主要化学成分有糖类[6]、黄酮类[7]、挥发性成分[8]、脂类[9]等。龙眼肉具有药食同源的性质，使用广泛，但目前药典只从性状、鉴别等方面作了规定，缺少内在质量控制指标。研究表明，新鲜龙眼肉中腐胺的含量在室温贮藏中下降，但在低温贮藏时先迅速下降后趋于稳定；精胺及亚精胺的含量，室温和低温贮藏变化均不明显[10]。目前对作为中药使用干燥的龙眼肉研究报道较少。

本文将药用龙眼肉置于简易库与冷藏库中，观察外观、测定水分和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量，提出仓库温度积的概念，并分析温度积与5-HMF的动态变化规律，为中药龙眼肉的质量评价提供依据。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色谱仪(DGU-20A5型自动脱气机，LC-20AT型泵，SPD-M20A型二极管阵列检测器，SIL-20A型自动进样器，CTO-10ASvp柱温箱，LC-solution色谱工作站)(日本岛津公司)，XS105 Dual Range型电子分析天平(感量0.00 001 g，Mettler Toledo仪器系统有限公司)，OHAUS CP224C型电子天平(感量0.0 001 g，奥豪斯(上海)仪器有限公司)，单道可调量程移液器(艾本德(上海)国际贸易有限公司)，KQ-100E超声波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司)，JWS-A5温湿度表(北京市亚光仪器有限责任公司)，高翔DL60冷风机(浙江高翔工贸有限公司)，比泽尔5P系统压缩机(比泽尔制冷技术(中国)有限公司)。5-HMF对照品(批号BCBF6127V，纯度≥99%)购自美国Sigma-Aldrich公司，甲醇(色谱纯)购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

1.2 药材

龙眼肉2013年秋天产于广西，经中国中医科学院中药研究所巢志茂研究员鉴定为无患子科植物龙眼DimocarpuslonganLour.的干燥假种皮，样本放置于该所的1016实验室。

1.3 贮藏库

简易库为中国中医科学院中药研究所1016室隔出来的一部分，未做温度和湿度的调节。冷藏库为具有冷风机控制系统的恒温仓库。

2014年7月11日将龙眼肉药材置于白色塑料袋中，分别贮藏于简易库和冷藏库中，作为0月的样品。2014年10月31日、2015年4月30日、2015年10月31日、2016年4月30日、2016年10月31日从库中取出样品，作为第3、9、15、21、27个月的样品。

1.4 温湿度

图1显示，冷藏库，保持3.5～5.0 ℃的恒温，65%～75%相对湿度的恒湿环境。简易库每日记录温度和湿度，入库之日起的日历月作为0月，之后的每个日历月作为1个月，实际贮藏28个月。

图1 简易库与冷藏库温湿度记录图

图2 简易库与冷藏库温度积及龙眼肉中5-HMF含量

1.5 温度积

其中，Ti为简易库当日上午10点时的温度，Dm为每个月记录的天数，Ta为冷藏库的平均温度即4.25 ℃，D为每个月的天数。图2显示，两库中0～27个月逐月的温度积。

1.6 外观观察

表1显示，从库中取出样品置于白色搪瓷盘中，于日光下观察外观。

1.7 水分测定

表1显示，从库中取出样品粉碎过3号筛，按《中国药典》规定的烘干法[11]测定水分。

1.8 5-HMF含量测定

1.8.1 色谱条件 图3显示，ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(5∶95，v/v)，流速1.0 mL·min-1，检测波长284 nm，柱温35 ℃，进样量10 μL。

表1 简易库与冷藏库中龙眼肉的水分和5-HMF的含量

注：1、2.龙眼肉药材批次

图3 5-HMF对照品与供试品HPLC图注：A.对照品；B.供试品；1.5-HMF

1.8.2 对照品溶液的制备 精密称取5-HMF对照品3.97 mg置于10 mL棕色量瓶中，以80%甲醇溶解、定容，制成0.397 mg·mL-1的5-HMF对照品溶液。

1.8.3 供试品溶液的制备 取“1.7”项下的样品1.0 g精密称定，置于25 mL具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇溶液25 mL，称定质量，超声处理25 min放至室温，再次称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，过滤取续滤液，过0.22 μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

1.8.4 方法学考察 ①线性关系考察:将对照品溶液用80%甲醇稀释配成浓度为0.06352、0.0397、0.01985、0.00397、0.00006625、0.00 002 914 mg·mL-1的系列溶液，分别进样10 μL，按“1.8.1”的色谱条件测定峰面积。以进样量(mg)为横坐标，峰面积(mAU)为纵坐标绘制标准曲线。线性方程为：y=6797937x+4341 (r2=0.9998),表明进样量在0.0002914-0.6 352 mg范围内，与峰面积线性关系良好；②精密度试验:精密吸取对照品溶液，稀释成0.00 397 mg·mL-1后，按“1.8.1”项下色谱条件，连续进样6次，每次10 μL，测定5-HMF的峰面积，计算得RSD为0.21%(n=6)，表明仪器精密度良好。③重复性试验:精密称取同一供试品6份(简易库27个月样品1)，按“1.8.3”项下制备供试品溶液，按“1.8.1”项下色谱条件进样测定，5-HMF平均含量为0.009 017 mg·mL-1，计算得RSD为2.29%(n=6)，表明本方法重复性良好；④稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液(简易库27个月样品1)，室温放置，分别在0、2、4、8、12、24 h进样分析，测定5-HMF峰面积，计算RSD为1.85%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好；⑤加样回收率试验:表2显示，称取同一供试品6份(简易库27个月样品1)，每份约0.5 g精密称定，分别精密加入稀释的5-HMF对照品溶液(0.0 397 mg·mL-1)163 mL，按“1.8.3”项下制备供试品溶液，按“1.8.1”项下色谱条件测定5-HMF含量，计算平均回收率为98.53%，RSD为2.20%(n=6)；⑥检测限与定量限:在“1.8.1”色谱条件下将对照品溶液逐渐稀释，最终确定检测限(S/N=3)为1.457×10-4mg，定量限(S/N=10)为3.312×10-4mg。

表2 龙眼肉中5-HMF的加样回收率

1.8.5 样品含量测定 表1显示，各样品按“1.8.3”项下制备供试品溶液，在“1.8.1”色谱条件下测定，用外标一点法计算干品中5-HMF含量。

2 结果

2.1 贮藏库温湿度比较

图1结果显示，从2014年7月11日开始到2016年10月31日的28个月中，冷藏库保持了恒温恒湿状态，温度较低为3.5～5.0 ℃，湿度较高维持在65～75%RH。简易库经过3个夏天2个冬天的过程，夏天的温度和湿度均比冬天要高，温度的最高值为42 ℃、最低值为15 ℃，湿度的最高值为74%RH、最低值为30%RH。

2.2 外观比较

表1显示，简易库中龙眼肉从第3个月开始，质地变硬，表面有糖分析出。冷藏库中龙眼肉质地柔润，表面无糖分析出，但有轻度的黏软现象。龙眼肉色泽较深为棕褐色，在贮藏过程中未见明显变化。

2.3 水分含量

简易库与冷藏库各两批龙眼肉中的水分含量比较差异无统计学意义，在0月时的水分高于药典规定的15%。贮藏27个月后，简易库中水分下降了4.66%、4.86%，冷藏库中下降3.98%、3.82%。

2.4 5-HMF含量

龙眼肉的5-HMF含量在0月时为0.001 031 mg·g-1，贮藏后均得到升高。第3个月时简易库与冷藏库分别升高到0.005191、0.005173和0.001134、0.001 430 mg·g-1。贮藏到第27个月时，简易库样品是0月时含量的10.0、10.1倍，冷藏库则为3.8、3.2倍。简易库5-HMF的含量是冷藏库对应时间的2.7～4.6倍，同一库中2批样品之间5-HMF的含量基本一致。

2.5 温度积对5-HMF含量变化的影响

图2显示，简易库与冷藏库温度积均随着贮藏时间的延长而升高。简易库的温度积受季节的影响，其升高呈急缓相间的变化。冷藏库的温度常年维持稳定，其温度积的升高呈直线累积。两库的龙眼肉中5-HMF的变化趋势与两库的温度积具对应的一致性。

3 讨论

牛膝、大枣、五味子、栝楼等中药，随着色泽的加深，5-HMF含量逐渐升高[12-15]。山萸肉随着贮藏时间的延长相应地产生色泽加深和5-HMF含量升高[16]。而龙眼肉随着贮藏时间的延长，产生了5-HMF含量升高的现象，但未见色泽的加深，这种现象系首次报道。由于5-HMF的产生与美拉德反应[17]的产生有关，该反应又受到温度的影响，这与本文中简易库产生更多的5-HMF现象一致。

通过HPLC的分析，首次说明龙眼肉中含有5-HMF，对其进行含量测定，将有助于龙眼肉质量标准的提高，对质量控制具有参考意义的热分析动力学中，采用了温度积的概念[18]。温度积也曾被用来评价不同季节铺筑不同砂砾的抗裂性能[19]、不同季节铺筑半刚性材料的力学性能[20]，对于与时间跨度有关的动态变化具有较好的评价意义。本文将温度积的概念首次应用于分析温度对中药在贮藏过程中化学成分变化的影响。

从外观变化和5-HMF含量的升高考虑，我们建议龙眼肉的贮藏以低温为好。

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Dynamic Analysis between Physic-chemical Indexes of Longan Arillus and Temperature-integral of Two Kinds of Warehouse

WU Cui, MA Yu-cui, CHAO Zhi-mao△
(InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)

Objective: To study the dynamic change between temperature-integral and physic-chemical indexes of Longan Arillus (dried arillus ofDimocarpuslonganLour.) stored in simple and cool warehouses. Methods: The properties of Longan Arillus were observed under sunlight. The water content was determined based on the drying method. The content of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) was determined by HPLC method. The temperature-integral was used to analyze its effect on 5-HMF content. Results: The temperature-integral showed a fast and slow alternating increasing trend of simple warehouse and linear upward trend of cool warehouse. The white sugar powder and hard texture of Longan Arillus were appeared since the third month in simple warehouse. The slight soft and moist of Longan Arillus were appeared in cool warehouse. The water content of Longan Arillus was decreased in both warehouses. The 5-HMF content at the 0 month was 0.001031 mg·g-1and was gradually increasing in the succedent month with a range of 2.7～4.6 times in simple warehouse than in cool warehouse. Conclusion: The increase trend of 5-HMF content of Longan Arillus was consistent with the change trend of temperature-integral. The concept of temperature-integral was put forward and used to analyze the change of chemical composition in Chinese medicine during the storage link for the first time.

Dimocarpuslongan; 5-hydroxymethylfurfural; Longan Arillus; storage; temperature integral

中医药行业科研专项(201407005)-中药材贮藏库及配套技术

吴 翠(1993-),女,江苏徐州人,医学硕士,从事中药材贮藏与包装研究。

△通讯作者：巢志茂(1963-),男,江苏常州人,研究员,医学硕士,从事中药材贮藏与包装研究,Tel：13522705161，E-mail: chaozhimao@163.com。

R284.1

A

1006-3250(2017)08-1158-04

2017-03-28