昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数及脾脏指数的影响

秦 乐，陈新梅，邢佰颖，岳志敏

(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)

昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数及脾脏指数的影响

秦 乐，陈新梅，邢佰颖，岳志敏

(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)

研究昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响。以胸腺指数及脾脏指数为测量指标，观察不同浓度昆仑雪菊总黄酮对小鼠免疫功能的影响作用。低、中、高剂量昆仑雪菊总黄酮可不同程度的增加小鼠胸腺和脾脏的质量，其中，与空白对照组比较，高剂量昆仑雪菊总黄酮组能显著提高小鼠脾脏指数(P<0.05)；但对胸腺指数的作用结果不明显。以胸腺指数和脾脏指数作为检测指标，昆仑雪菊总黄酮可增强小鼠胸腺和脾脏的脏器指数，提高小鼠的免疫功能。

昆仑雪菊总黄酮；胸腺指数；脾脏指数

昆仑雪菊为菊科金鸡菊属(Coreopsis)，具有独特功效的稀有高寒植物，现代研究表明其主要活性成分为包括马里苷、黄诺马苷等黄酮类物质[1]，已有研究报道昆仑雪菊总黄酮具有较为明确的降血糖、降血脂[2]、抗氧化[3]的药理作用。本课题组前期研究也表明昆仑雪菊总黄酮对小鼠记忆[4]和抗疲劳作用[5]有一定的积极影响，其作用机制可能与昆仑雪菊总黄酮的抗氧化能力有关。有研究表明总黄酮对免疫功能的影响与其抗氧化活性和清除自由基能力有关，因此，为进一步探索昆仑雪菊总黄酮的作用机制及药用价值，本试验以小鼠胸腺指数和脾脏指数为指标，初步研究昆仑雪菊总黄酮对小鼠免疫功能的影响。

1 材料

1.1 仪器

恒温不锈钢水浴锅(上海树立仪器仪表有限公司)；JM-A3002电子天平(诸暨市超泽衡器设备有限公司)；UV-5100紫外可见光分光光度仪(上海元析仪器有限公司)。

1.2 试剂

雪菊(新疆润元本草有限公司，批号：20170210，经山东中医药大学李宝国老师鉴定为昆仑雪菊)；芦丁标准品(上海源叶生物科技有限公司，批号:Y01M7S10307)；氯化钠(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20160902);氢氧化钠(天津市广成化学试剂有限公司，批号:20140907)；亚硝酸钠(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号:20160509)；三氯化铝(国药集团化学试剂有公司，分析纯，批号:20141215)。

1.3 试验动物

体质量28～32g的SPF级昆明种小鼠，购于山东鲁抗医药股份有限公司质检中心实验动物室。动物合格证编SCXK鲁(20170006)。

2 试验方法

2.1 昆仑雪菊总黄酮的提取

精密称取粉碎后过60目网筛的昆仑雪菊5.00g于三角烧瓶中，以料液比1∶10加入50 mL蒸馏水，水浴锅90℃下热浸20min，过滤，如此重复2次，合并两次浸出液，得到昆仑雪菊总黄酮溶液。

2.2 昆仑雪菊总黄酮供试品的制备[6]

以芦丁为标准品得到标准曲线A=11.515C-0.0078，相关系数R=0.995，NaNO2-AlCl3-NaOH显色法测得上述昆仑雪菊总黄酮含量为29.8%，浓度为11.14mg/mL，以此作为高剂量雪菊总黄酮溶液，稀释两次，各稀释1倍，得到浓度为5.57 mg/mL的中剂量雪菊总黄酮溶液和2.78mg/mL低剂量雪菊总黄酮溶液。

2.3 动物分组及给药

健康小鼠40只随机分为空白对照组，昆仑雪菊总黄酮低、中、高剂量组，共4组，每组10只。空白对照组以0.1 mL/10 g的生理盐水给给予灌胃，其余各组给予等量的低、中、高剂量雪菊总黄酮，每日灌胃给药两次，连续给药45天。各组小鼠等量喂食普通饲料，自由饮水。

2.4 小鼠胸腺指数及脾脏指数的测定[7]

各组小鼠末次给药后禁食不禁水12 h，称取其体质量，脱颈椎处死，解剖摘取胸腺和脾脏，去除脂肪和结缔组织后称重，计算各组小鼠的胸腺和脾脏指数，计算公式如下：

胸腺指数(mg/g)=胸腺质量(mg)/小鼠体质量(g)；

脾脏指数(mg/g)=脾脏质量(mg)/小鼠体质量(g)。

2.5 试验数据的统计处理

试验数据以平均数±方差(X±S)表示，利用SPSS17.0进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析。

3 结果与分析

不同浓度的雪菊总黄酮对各组小鼠的胸腺指数和脾脏指数的影响结果见表1。

表1 昆仑雪菊总黄酮对小鼠免疫器官指数的影响(X±S)Table 1 The effect of flavonoids on the immune organ index in mice

注：与空白对照组比较，*P<0.05。

由表1可知，小鼠给药45天后，与空白对照组相比，各试验组小鼠胸腺和脾脏的质量均有所提高。其中，胸腺指数方面，各组昆仑雪菊总黄酮组的小鼠胸腺指数随昆仑雪菊浓度增加而呈上升趋势，但差异不显著；脾脏指数方面，低、中、高剂量昆仑黄酮组的脾脏指数与空白对照组比较均有提高，随昆仑雪菊浓度增加而增加，且高剂量组脾脏指数提高显著(*P<0.05)。试验结果表明昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数和脾脏指数的提高有一定积极作用，且具有剂量效应关系，昆仑雪菊浓度越高,胸腺和脾脏质量增加越明显，其中，高剂量的昆仑雪菊总黄酮作用效果最为显著。

4 讨论

胸腺和脾脏是哺乳动物免疫细胞分布的主要器官，胸腺是诱导淋巴细胞增殖分化成免疫活性细胞的场所，是构建细胞免疫功能的车间；脾脏是成年动物最大的免疫器官，在体液免疫和细胞免疫中发挥着重要作用[8]。机体免疫功能表现亢进或抑制时，胸腺细胞和脾脏细胞也相应的增殖或萎缩[9]。因此，采用胸腺指数和脾脏指数作为检测指标可在一定程度上反映机体对抗原的免疫应答水平，体现药物对机体免疫功能的影响。

本试验通过测定不同浓度的昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数及脾脏指数的影响程度，以研究昆仑雪菊总黄酮在小鼠免疫功能上的作用，结果表明与空白对照组相比，低、中、高剂量雪菊总黄酮均可在不同程度上促进小鼠免疫器官的生长，提高其质量，且其增长程度随昆仑雪菊总黄酮浓度的升高而增大。其中，高剂量的昆仑雪菊总黄酮可显著提高小鼠的脾脏指数，但对胸腺指数的影响差异不显著，说明就胸腺指数和脾脏指数这一方面而言，昆仑雪菊总黄酮在一定程度上可增强小鼠免疫功能，且与昆仑雪菊总黄酮的剂量有关。其作用机制可能与总黄酮良好的抗氧化活性和清除自由基的能力抑制了脂质过氧化损伤，降低过氧化损伤对小鼠免疫细胞造成的风险，从而在一定程度上提高小鼠免疫能力有关[10]。

[1] 张彦丽,王 艳,李新霞,等. 高效液相色谱法测定昆仑雪菊中绿原酸和黄芩苷的含量[J]. 中国实验方剂学杂志,2012(4):107-109.

[2] 方 煊,李雅丽,陈新梅. 雪菊黄酮对脂肪变肝细胞的降脂效果[J]. 温州医科大学学报,2016,46(10):720-723.

[3] 宋烨威,金红娜,徐 洁,等. 昆仑雪菊中黄酮类化合物的提取分离及抗氧化活性评价[J]. 食品与发酵工业,2016(4):220-223.

[4] 秦 乐,陈新梅,邢佰颖,等. 雪菊总黄酮对小鼠体重及记忆再现障碍的影响[J]. 化工时刊,2017(2):10-12.

[5] 邢佰颖,陈新梅,秦 乐,等. 昆仑雪菊总黄酮对小鼠负重游泳的影响[J]. 化工时刊,2017(1):9-11.

[6] 邢佰颖,陈新梅,秦 乐,等. 两种显色法测定昆仑雪菊总黄酮含量的比较研究[J]. 化工时刊,2016(12):23-25.

[7] 李海珊,刘丽乔,聂少平. 茶多糖对小鼠肠道健康及免疫调节功能的影响[J]. 食品科学,2017(7):187-192.

[8] 赵志强,贾丽霞,张庆波,等. 黄酮对免疫功能影响的体内研究[J]. 临床荟萃,2014(1):49-51.

[9] 皮建辉,谭 娟,胡朝暾,等. 金银花黄酮对小鼠免疫调节作用的研究[J]. 中国应用生理学杂志,2015(1):89-92.

[10] 毛 媛,吕留庄,刘克武,等. 东紫苏(Elsholtiza bodinieri Vaniot)总黄酮的提取及其抗氧化、免疫活性的研究[J]. 食品工业科技,2016(9):85-88.

(本文文献格式：秦 乐，陈新梅，邢佰颖，等.昆仑雪菊总黄酮对小鼠胸腺指数及脾脏指数的影响[J].山东化工,2017,46(15):41-42.)

Effects of Total Flavonoids from Coreopsis Tinctoria on Thymus Index and Spleen Index in Mice

QinLe,ChenXinmei,XingBaiying,YueZhimin

(College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji'nan 250355,China)

To study the effects of total flavonoids fromcoreopsis tinctoria on thymus index and spleen index of the mice.Using the thymus index and the spleen index to observe the effects of different concentrations total flavonoids fromcoreopsis tinctoria on the immune function of the mice.Low,medium and high dose of total flavonoids fromcoreopsis tinctoria can increase the thymus and spleen in mice of different level of quality,and compared with blank control group,high dose of total flavonoids from coreopsis tinctoriagroup can significantly improve the index of spleen in mice (P < 0.05); But the effect on the thymus index was not obvious.As the thymus index and the spleen index was used as test indicators,the total flavonoids from coreopsis tinctoriacan enhance the index of the thymus and spleen and improve the immune function of mice.

total flavonoids fromcoreopsis tinctoria; thymus index; spleen index

2017-05-31

山东省教育厅2015年度山东省本科高校教学改革研究项目(2015M189)；山东省卓越工程师教育培养计划项目(鲁教高字[2013]3号)

秦 乐(1995—)，女,2014级制药工程专业本科；通讯作者：陈新梅(1973—)，女，博士，副教授，硕导，研究方向：中药新制剂与制药新技术研究。

R284

A

1008-021X(2017)15-0041-02