探究培养液中酵母菌种群数量的变化

于伟东

显微镜直接计数法在人教版必修3《稳态与环境》的“培养液中酵母菌种群数量变化”探究实验中有提及，但是关于如何计数与操作，教材并未做具体说明，如果教师不进行适当的补充，学生在学习时必然要受到困扰，学习效果将大打折扣。现将有关知识做以下简要补充。

1实验原理

用液体培养基培养酵母菌，种群的增长受培养液的成分、空气、pH、温度等因素的影响。在理想的无限环境中，酵母菌种群呈“J”型增长；自然界中资源和空间总是有限的，酵母菌种群呈“S”型增长。计算酵母菌数量可用显微镜直接计数法。

2实验步骤

实验步骤见图1。

图1实验步骤3计数方法和工具

计数方法为显微镜直接计数法，计数工具为血球计数板。

4血球计数板使用方法简介

血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每1边的平台上各自刻有1个方格网，每个方格网共分为9个大格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图2所示。计数室的刻度一般有2种规格，一种是1个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是1个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，如图3所示。每1个大方格边长为1 mm，则每1个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3。计数时，如果是一个大方格分成25个中方格，通常数5个中方格的总菌数，即共80个小格；如果是大方格分成16个中方格，通常数4个中方格的总菌数，即共100个小格，如图4所示。然后求得每个小方格的平均数，再乘上400，就得出1个大方格中的总菌数，再换算成1 mL菌液中的总菌数。

1-血球计数板；2-盖玻片；3-计数室。

图2血球计数板构造（一）图3血球计数板构造（二）设中方格内总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则1 mL菌液的总菌数为：A÷80×400×104×B；如果是16个中方格的计数板，则1 mL菌液的总菌数为：A÷100×400×104×B。

图4两种规格的血球计数板

5跟踪训练

某生物兴趣小组开展探究实验，课题是“探究培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系”。实验材料和用具：菌种和无菌培养液、试管、血球计数板、滴管、显微镜等。实验步骤：将含有酵母菌的培养液滴在计数板上，计数1个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中酵母菌总数。连续观察7天，并记录每天的数值。根据以上叙述回答下列问题：

（1）根据所学知识，该课题的实验假设是：开始一段时间，酵母菌呈“J”型增长，隨着时间的推移，由于，酵母菌呈“S”型增长。

（2）本实验没有另设置对照实验，原因是。该实验是否需要重复实验？（填“是”或“否”）。

（3）在吸取培养液计数前，要轻轻振荡几次试管，目的是。如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取的措施是。

（4）利用血球计数板可在显微镜下对酵母菌进行直接计数。每个计数室由400（25×16）个小室组成，容纳液体的总体积为0.1 mm3。现将1 mL酵母菌样品中加入99 mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许样品滴在盖玻片边缘，使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余菌液，如图5所示。

图5计数室放大图现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中方格80个小室内共有酵母菌44个，则上述1 mL酵母菌样品中约有酵母菌个。为获得较为准确的数值，减少误差，你认为应采取的做法是。

参考答案：（1）环境资源和空间有限。（2）该实验在时间上形成前后自身对照。（3）使酵母菌分布均匀；稀释菌液。（4）44÷80×400×100×100 00=2.2×108；多取样、取平均值。endprint