10 854例珠蛋白生成障碍性贫血基因筛查结果及基因类型分析

何 丽,朱晓芳,王 薇,黄 婵,朱 欣,吕虹洁,钱 婧,张海燕

(重庆市妇幼保健院妇保科 400010)

10 854例珠蛋白生成障碍性贫血基因筛查结果及基因类型分析

何 丽,朱晓芳,王 薇,黄 婵,朱 欣,吕虹洁,钱 婧,张海燕△

(重庆市妇幼保健院妇保科 400010)

目的 了解重庆地区进行孕前检查人群的珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率、基因类型和构成比情况。方法 对2014年4月至2016年3月在该院进行孕前体检的10 854人进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查，筛查包括：平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)水平,血红蛋白电泳，对筛查结果任意一项异常者行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。结果 在10 854人中，珠蛋白生成障碍性贫血初筛阳性者1 117人，筛查阳性率10.29%。珠蛋白生成障碍性贫血基因阳性者共458例，珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率4.21%。其中检测出单纯α珠蛋白生成障碍性贫血253例，α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率2.33%，其中α珠蛋白生成障碍性贫血以--SEA最常见，构成比为52.17%。检测出单纯β珠蛋白生成障碍性贫血197例，β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率1.81%，其中β珠蛋白生成障碍性贫血以CD17 (A→T)最常见，构成比为31.47%。检测出携带αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因11例。结论 重庆是珠蛋白生成障碍性贫血高发地区，做好孕前珠蛋白生成障碍性贫血筛查工作，对提高人口素质，实现优生优育具有重要作用。

α珠蛋白生成障碍性贫血；β珠蛋白生成障碍性贫血;遗传筛查

珠蛋白生成障碍性贫血是一种比较常见的单基因遗传病[1]，主要是由于遗传基因缺陷所致的一种或多种珠蛋白肽键合成缺乏或者不足所致的一组遗传性溶血性贫血病[2-3]。本病最初发生于地中海地区，以后世界各地都有发现，东南亚即为高发区之一。我国广东、广西、四川、重庆等地多见，长江以南各省区有散发病例，北方则少见。根据珠蛋白肽链缺乏的种类及程度，珠蛋白生成障碍性贫血可分为α、β、δ、δβ和γδβ等不同类型，常见的主要是α和β两大类型。珠蛋白生成障碍性贫血目前尚无有效的治疗方法,但它是人类近7 000多种遗传病中预防效果最好的几种遗传病之一。重庆是珠蛋白生成障碍性贫血高发地区，因此做好孕前珠蛋白生成障碍性贫血筛查，为珠蛋白生成障碍性贫血的诊断、治疗、预防咨询提供了理论依据,对提高人口素质、减少出生人口缺陷有重大意义。本文对本院2014年4月至2016年3月10 854例孕前检查对象进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查，对珠蛋白生成障碍性贫血基因的携带率，基因类型及构成比等情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年4月至2016年3月在本院行孕前优生健康检查的育龄患者共10 854例，年龄20～45岁，男女不限，均自愿参加此项目检查。

1.2 珠蛋白生成障碍性贫血筛查方法 抽取孕前优生检查人群外周静脉血3 mL,行血常规检查，以平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)为筛查指标，血常规MCV 参考范围82～100 fL，MCH 参考范围27～34 pg，若 MCV<82 fL或MCH<27 pg，认定为珠蛋白生成障碍性贫血筛查阳性；血红蛋白电泳检测，若血红蛋白A2(HbA2)>3.5%或HbA2<2.5%，和(或)血红蛋白F(HbF)增高，或出现异常血红蛋白区带，为血红蛋白电泳异常，亦认定为珠蛋白生成障碍性贫血筛查阳性。对MCV、MCH和血红蛋白电泳分析有任意一项异常者，则行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。

1.3 仪器设备

1.3.1 血细胞分析 采用日本Sysmex公司生产的XN-1000型全自动血细胞分析仪及配套试剂对MCH、MCV进行测定。

1.3.2 血红蛋白电泳 使用法国Sebia公司生产的Capillarys型全自动毛细管电泳仪及配套试剂，对各血红蛋白成分和比例进行分离。

1.3.3 珠蛋白生成障碍性贫血基因检测 采用gap-PCR技术检测--SEA、-α3.7、-α4.23种常见缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血，采用PCR结合反向杂交(PCR-RDB)技术检测αCSα、αQSα、αWSα 3种非缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血和17种β珠蛋白生成障碍性贫血，即CD41-42(-TCTT)、CD43(G→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CD71-72(+A)、βE(GAG→AAG)、CD17(A→T)、CD31(-C)、CD14-15(+G)、CD27-28(+C)、IVS-Ⅰ-1(G→A，G→T)、IVS-I-5(G→C)、CAPM、IntM等。诊断α缺失型珠蛋白生成障碍性贫血的试剂盒购买于中山大学达安基因股份有限公司，诊断α非缺失型及β珠蛋白生成障碍性贫血的试剂盒购买于亚能生物技术(深圳)有限公司。

2 结 果

在10 854例中，珠蛋白生成障碍性贫血初筛阳性者1 117例，筛查阳性率10.29%。珠蛋白生成障碍性贫血筛查阳性者均行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，阳性者共458例，珠蛋白生成障碍性贫血基因检测阳性占初筛人数的比例为41.00%，珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率4.21%。其中检测出单纯α珠蛋白生成障碍性贫血253例，α珠蛋白生成障碍性贫血基因检测阳性占初筛人数的比例为22.65%，α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率2.33%，其中α珠蛋白生成障碍性贫血以--SEA最常见，构成比为52.17%。检测出单纯β珠蛋白生成障碍性贫血197例，β珠蛋白生成障碍性贫血基因检测阳性占初筛人数的比例为17.64%，β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率1.81%，其中β珠蛋白生成障碍性贫血以CD17 (A→T)最常见，构成比为31.47%。检测出αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因11例，αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因检测阳性占初筛人数的比例0.99%。α、β及αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因检测具体结果见表1～3。

表2 β珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果 (n=197)

表3 αβ珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果(n)

3 讨 论

珠蛋白生成障碍性贫血是临床上最为常见的,并且危害较大的一种遗传病,夫妻携带同型珠蛋白生成障碍性贫血基因，每次妊娠都有1/4的概率生育重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿。重型珠蛋白生成障碍性贫血可引起死胎、死产，新生儿出生不久死亡[4-5]，目前尚无根治的办法,临床上主要以输血、去铁对症处理为主，这对社会家庭带来了巨大的经济负担及精神压力[6]。预防重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿出生成为控制该病的有效方法。目前取消了婚前检查，失去了防控计划的第一道屏障，因此抓住孕前检查这道防线，尽早发现珠蛋白生成障碍性贫血基因携带并做出科学及时的生育指导，显得至关重要。

本研究中对每位孕前检查者均进行了详细的病史询问及体格检查。458例确诊为珠蛋白生成障碍性贫血的患者均无不适症状，其中仅14例有珠蛋白生成障碍性贫血家族史，查体均无黄疸、脸色萎黄、苍白、发育不良、全身水肿或头颅增大、颧骨突出、眼距增宽、鼻梁低平等体征。很大比例的人不知晓珠蛋白生成障碍性贫血相关知识及危害，有一部分确诊为珠蛋白生成障碍性贫血的患者反应曾予补铁剂治疗。故在孕前检查中，加强珠蛋白生成障碍性贫血的宣传教育，提高人们对珠蛋白生成障碍性贫血筛查的重视，扩大医务人员培训队伍，避免珠蛋白生成障碍性贫血的漏诊误诊，均是开展珠蛋白生成障碍性贫血防控计划的重要内容。

本研究对2014年4月至2016年3月在本院进行孕前体检的10 854例进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查，珠蛋白生成障碍性贫血初筛阳性者1 117例，筛查阳性率10.29%。检测珠蛋白生成障碍性贫血基因阳性者共458例，珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率4.21%，较文传芳等[7]报道重庆璧山地区的3.24%偏高，与李良琼等[8]报道重庆东北部地区的4.74%相近，较李娟等[9]报道本地区的珠蛋白生成障碍性贫血发生率5.6%偏低。检测出单纯α珠蛋白生成障碍性贫血253例，α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率2.33%，与李良琼等[8]报道2.06%相近及以往报道的四川地区α珠蛋白生成障碍性贫血发生率为2%左右相符[10]。其中α珠蛋白生成障碍性贫血以--SEA最常见，构成比为52.17%，与重庆、广东、广西、贵阳等多地报道的常见α缺失类型相符[11-14]。α非缺失型珠蛋白生成障碍性贫血少见，3种非缺失类型构成比为7.91%，与Ko等[15]及Xu等[16]报道的一致。 检测出单纯β珠蛋白生成障碍性贫血197例，β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率1.81%，与姚秀云等[17]报道的重庆地区β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率为1.51%相近。本研究共检测出11种基因型，常见的几种类型分别为：CD17 (A→T)、CD41-42(-TCTT)、 IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、βE(GAG→AAG)，与本地区之前杜伟等[18]报道的结果一致。β珠蛋白生成障碍性贫血中以CD17 (A→T)最常见，与同处我国西南地区的贵州报道[19]相同，而与同属亚热带地区的广东[12]、广西[20]、海南[21]等地报道不同，这3个地区变异位点频率最高的则是CD41-42(-TCTT)。研究表明β珠蛋白生成障碍性贫血是受疟疾选择最明显的基因之一，由于地理位置、气候条件，疟疾的不同等原因而造成β珠蛋白生成障碍性贫血的基因分别有明显的地域和种族差异[22]。检测出αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因11例，阳性率0.99%，由于αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血，往往呈现β珠蛋白生成障碍性贫血的基因特征，容易掩盖α珠蛋白生成障碍性贫血的一些特征，当β珠蛋白生成障碍性贫血检测阳性时，建议同时行α珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，提高其检测率[23]。本研究中常见的α及β基因缺失类型与文献报告相符，但本研究中α珠蛋白生成障碍性贫血检测阳性率高于β珠蛋白生成障碍性贫血，与之前对重庆地区的报道又有所不同[8，18，24]，可能与重庆经济发展快人口流动较大、构成比例多元化相关，且本研究数据来源仅限于在本院行孕前检查的患者，这一结果还不能全面准确反应重庆市总的珠蛋白生成障碍性贫血的发病率、基因类型及分布情况，需要更多区域的合作研究和更大规模筛查。但此数据资料对本地区珠蛋白生成障碍性贫血防控计划提供了有价值的参考。

按国际标准珠蛋白生成障碍性贫血筛查应为MCH<27 pg和MCV<78 fL，但往往会造成一部分珠蛋白生成障碍性贫血的漏检[25-26]，为提高筛查的灵敏度，本研究取MCV<82 fL或MCH<27 pg为珠蛋白生成障碍性贫血初筛阳性。尽管如此，据李爱敏等[27]报道在MCV≥82 fL、MCH≥27 pg血液学表型阴性的人群中仍有14.21% 的珠蛋白生成障碍性贫血漏诊。研究表明对珠蛋白生成障碍性贫血的诊断MCV或MCH的灵敏度较高，而血红蛋白电泳的特异度较高，若联合检查，能互补单项检查的不足，可使筛查结果更加可靠[28]。故本研究取MCV、MCH、血红蛋白电泳，任意一项筛查结果异常者行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。在制订珠蛋白生成障碍性贫血防控方案时，为降低后代重型珠蛋白生成障碍性贫血风险，一旦发现一方为珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，无论配偶血液学筛查是否阳性均建议行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。本研究中还发现，有些血液学筛查阳性高度怀疑珠蛋白生成障碍性贫血者，但基因检测结果却是阴性，据吕荣钰等[29]报道常规基因检测可能存在1.8%的漏诊率，还有5.6%的罕见基因突变。建议对基因检测阴性又疑似珠蛋白生成障碍性贫血的患者，必要时行常规基因复测及罕见基因检测。由于本研究的不足及技术条件所限，未行常规基因复测及罕见突变基因测序和突变类型分析，故对检测结果可能会造成一定影响。

综上所述，重庆为珠蛋白生成障碍性贫血高发地区，珠蛋白生成障碍性贫血筛查是孕前检查的一项重要内容。因此，加强对珠蛋白生成障碍性贫血知识的宣传普及，做好珠蛋白生成障碍性贫血防治筛查工作,避免漏检而造成重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿的出生，对提高人口素质，实现优生优育具有重要作用。

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Analysis on result of genetic screen and gene types of 10 854 cases with thalassemia

HeLi,ZhuXiaofang,WangWei,HuangChan,ZhuXin,LvHongjie,QianJing,ZhangHaiyan△

(DepartmentofWomen′sHealthCare,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400010,China)

Objective To investigate the gene carrying rate,gene type and composition ratio of thalassemia among pre-pregnant population in Chongqing area.Methods A total of 1 054 people were enrolled in the hospital from April 2014 to March 2016 for thalassemia screening.The content of screening included mean corpuscular volume(MCV),mean corpuscular hemoglobin(MCH) and hemoglobin electrophoresis.Thalassemia gene was examined in people with any abnormal term of screening result.Results In 10 854 cases,1 117 cases showed positive in thalassemia primary screening,and the positive rate was 10.29%.458 cases were tested positive of thalassemia gene,the carrying rate of thalassemia was 4.21%.In which,253 cases of pure α-thalassemia were tested.The carrying rate of α-thalassemia was 2.33%.The most common kind in α-thalassemia was --SEAwhose constituent ratio were 52.17%.197 cases of pure β-thalassemia were tested,the carrying rate of β-thalassemia was 1.81%.The most common kind in β-thalassemia was CD17 (A→T),whose constituent ratio were 31.47%.11 cases were diagnosed with αβ-thalassemia.Conclusion Chongqing is high-prevalence area of thalassemia.It is important to conduct thalassemia genetic screen before pregnancy which plays a vital role in improving population quality and achieving prepotency.

alpha-thalassemia;β-thalassemia;genetic screening

何丽(1986-)，主治医师，硕士，主要从事妇产科临床、保健研究。

△通信作者，E-mail:zhangdodo1975@126.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.23.026

R715.5

A

1671-8348(2017)23-3251-03

2017-03-18

2017-04-23)

·调查报告·